PD-1和LAG-3的高亲和力抗体以及由其制备的双特异性结合蛋白制造技术

本文公开了识别程序性死亡配体‑1(PD‑1)和淋巴细胞活化基因3蛋白(LAG‑3)的高亲和力抗体。将来自人源化抗PD‑1和抗LAG‑3抗体的结合位点掺入Fabs‑in‑Tandem免疫球蛋白形式，而没有明显损失结合亲和力，所得的双特异性多价结合蛋白能够同时结合PD‑1和LAG‑3。此类双特异性FIT‑Ig结合蛋白对于治疗癌症是有用的。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】PD-1和LAG-3的高亲和力抗体以及由其制备的双特异性结合蛋白
本专利技术涉及识别程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)的新抗体、识别淋巴细胞活化基因3蛋白(LAG-3)的新抗体以及由那些抗体制备的双特异性PD-1/LAG-3结合蛋白，例如FIT-Ig结合蛋白。抗体和双特异性结合蛋白可用于治疗免疫疾病和血液癌症。
技术介绍
程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)程序性细胞死亡蛋白1(PD-1，CD279)是CD28受体家族的成员，该CD28受体家族包括CD28、CTLA-4、ICOS、PD-1和BTLA。PD-1的表达经常出现在免疫细胞中，例如T细胞、B细胞、单核细胞和自然杀伤(NK)细胞。PD-1和类似的家族成员是I型跨膜糖蛋白，其包含负责配体结合的类似于Ig可变结构域的免疫球蛋白样结构域、和负责信号传导分子结合的胞质尾部。PD-1的胞质尾部包含两个基于酪氨酸的信号传导基序，一个是ITIM(基于免疫受体酪氨酸的抑制基序)，一个是ITSM(基于免疫受体酪氨酸的开关基序)。Vivier等人，Immunol.Today，18:286-291(本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种能够结合人PD-1的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体的抗原结合部分包含一组六个CDR，即CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，其选自以下的CDR组：/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180503 CN PCT/CN2018/0854681.一种能够结合人PD-1的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体的抗原结合部分包含一组六个CDR，即CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，其选自以下的CDR组：








2.一种抗PD-1抗体，其包含VH和VL结构域，其中两个可变结构域包含选自以下的氨基酸序列：








3.一种能够结合人LAG-3的抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体的抗原结合部分包含一组六个CDR，即CDR-H1、CDR-H2、CDR-H3、CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，其选自以下的CDR组：











4.一种抗PD-1抗体，其包含VH和VL结构域，其中两个可变结构域包含选自以下的氨基酸序列：








5.包含第一、第二和第三多肽链的双特异性多价结合蛋白，其中
所述第一多肽链从氨基到羧基末端包含(i)VLA-CL-VHB-CH1-Fc，其中CL直接与VHB融合，或(ii)VHB-CH1-VLA-CL-Fc，其中CH1直接与VLA融合；
所述第二多肽链从氨基到羧基末端包含VHA-CH1；和
所述第三多肽链从氨基到羧基末端包含VLB-CL；
其中VL是轻链可变结构域，CL是轻链恒定结构域，VH是重链可变结构域，CH1是重链恒定结构域，Fc是免疫球蛋白Fc区，A是PD-1或LAG-3的表位，B是PD-1或LAG-3的表位，前提是A和B不同，所述结合蛋白能够结合PD-1和LAG-3。


6.根据权利要求5所述的结合蛋白，其中所述VLA-CL和VHA-CH1结构域来自与抗原靶标PD-1或LAG-3之一结合的亲本抗体，并且所述VLB-CL和VHB-CH1结构域来自与抗原靶标PD-1或LAG-3的另一个结合的不同亲本抗体。


7.根据权利要求6所述的结合蛋白，其包含第一、第二和第三多肽链，其中所述第一多肽链从氨基到羧基末端包含VLPD-1-CL-VHLAG-3-CH1-Fc，其中CL直接融合至VHLAG-3，
其中所述第二多肽链从氨基到羧基末端包含VHPD-1-CH1；和
其中所述第三多肽链从氨基到羧基末端包含VLLAG-3-CL；
其中VLPD-1是抗PD-1抗体的轻链可变结构域，CL是轻链恒定结构域，VHPD-1是抗PD-1抗体的重链可变结构域，CH1是重链恒定结构域，VLLAG-3是抗LAG-3抗体的轻链可变结构域，VHLAG-3是抗LAG-3抗体的重链可变结构域，Fc是免疫球蛋白Fc区。


8.根据权利要求7所述的结合蛋白，其中在第一多肽链中，结构域VLPD-1-CL与抗PD-1亲本抗体的轻链相同，结构域VHPD-1-CH1与抗PD-1亲本抗体的重链可变结构域和重链恒定结构域相同，结构域VLLAG-3-CL与抗LAG-3亲本抗体的轻链相同，并且结构域VHLAG-3-CH1与抗LAG-3亲本抗体的重链可变结构域和重链恒定结构域相同。


9.根据权利要求6所述的结合蛋白，其包含第一、第二和第三多肽链，其中所述第一多肽链从氨基到羧基末端包含VLLAG-3-CL-VHPD-1-CH1-Fc，其中CL直接融合至VHPD-1，
其中所述第二多肽链从氨基到羧基末端包含VHLAG-3-CH1；和
其中所述第三多肽链从氨基到羧基末端包含VLPD-1-CL；其中VLPD-1是抗PD-1抗体的轻链可变结构域，CL是轻链恒定结构域，VHPD-1是抗PD-1抗体的重链可变结构域，CH1是重链恒定结构域，VLLAG-3是抗LAG-3抗体的轻链可变结构域，VHLAG-3是抗LAG-3抗体的重链可变结构域，Fc是免疫球蛋白Fc区。


10.根据权利要求9所述的结合蛋白，其中在第一多肽链中，结构域VLLAG-3-CL与抗LAG-3亲本抗体的轻链相同，结构域VHLAG-3-CH1与抗LAG-3亲本抗体的重链可变结构域和重链恒定结构域相同，结构域VLPD-1-CL与抗PD-1亲本抗体的轻链相同，并且结构域VHPD-1-CH1与抗PD-1亲本抗体的重链可变结构域和重链恒定结构域相同。


11.根据权利要求6所述的结合蛋白，其包含第一、第二和第三多肽链，其中所述第一多肽链从氨基到羧基末端包含VHLAG-3-CH1-VLPD-1-CL-Fc，其中CH1直接融合至VLPD-1，
其中所述第二多肽链从氨基到羧基末端包含VHLAG-3-CL；和
其中所述第三多肽链从氨基到羧基末端包含VLPD-1-CL；其中VLPD-1是抗PD-1抗体的轻链可变结构域，CL是轻链恒定结构域，VHPD-1是抗PD-1抗体的重链可变结构域，CH1是重链恒定结构域，VLLAG-3是抗LAG-3抗体的轻链可变结构域，VHLAG-3是抗LAG-3抗体的重链可变结构域，Fc是免疫球蛋白Fc区。


12.根据权利要求11所述的结合蛋白，其中在第一多肽链中，结构域VLLAG-3-CL与抗LAG-3亲本抗体的轻链相同，结构域VHLAG-3-CH1与抗LAG-3亲本抗体的重链可变结构域和重链恒定结构域相同，结构域VLPD-1-CL与抗PD-1亲本抗体的轻链相同，并且结构域VHPD-1-CH1与抗PD-1亲本抗体的重链可变结构域和重链恒定结构域相同。


13.根据权利要求6所述的结合蛋白，其包含第一、第二和第三多肽链，其中所述第一多肽链从氨基到羧基末端包含VHPD-1-CH1-VLLAG-3-CL-Fc，其中CH1直接融合至VLLAG-3，
其中所述第二多肽链从氨基到羧基末端包含VLPD-1-CL；和
其中所述第三多肽链从氨基到羧基末端包含VHLAG-3-CH1；其中VLPD-1是抗PD-1抗体的轻链可变结构域，CL是轻链恒定结构域，VHPD-1是抗PD-1抗体的重链可变结构域，CH1是重链恒定结构域，VLLAG-3是抗LAG-3抗体的轻链可变结构域，VHLAG-3是抗LAG-3抗体的重链可变结构域，Fc是免疫球蛋白Fc区。


14.根据权利要求13所述的结合蛋白，其中在第一多肽链中，结构域VLLAG-3-CL与抗LAG-3亲本抗体的轻链相同，结构域VHLAG-3-CH1与抗LAG-3亲本抗体的重链可变结构域和重链恒定结构域相同，结构域VLPD-1-CL与抗PD-1亲本抗体的轻链相同，并且结构域VHPD-1-CH1与抗PD-1亲本抗体的重链可变结构域和重链恒定结构域相同。


15.根据权利要求1至14中任一项所述的抗体或结合蛋白，其进一步包含Fc区，所述Fc区包含SEQIDNO：28。


16.根据权利要求5所述的结合蛋白，其中所述第一多肽链包含SEQIDNO：78的氨基酸23-679的氨基酸序列，所述第二多肽链包含SEQIDNO：83的氨基酸20-240的氨基酸序列，并且所述第三多肽链包含SEQIDNO：86的氨基酸23-236的氨基酸序列。


17.根据权利要求5所述的结合蛋白，其中所述第一多肽链包含SEQIDNO：88的氨基酸23-684...

【专利技术属性】
技术研发人员：巫玄，宫世勇，吴辰冰，
申请(专利权)人：上海岸迈生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31