一种人多能干细胞转化为扩展多能干细胞的专用培养基及其应用制造技术

本发明专利技术公开一种人多能干细胞转化为扩展多能干细胞的专用培养基及其应用。该培养基以1:1混合的knockout DMEM/F12和Neurobasal为基础培养基，还包括以下组分：B27，N2，血清替代物，谷氨酸盐,非必需氨基酸,双抗,β‑巯基乙醇，LCDM,WNT通路抑制剂和ROCK抑制剂。采用该培养基结合基质胶体系对人多能干细胞进行培养，可将其成功转化成人扩展多能干细胞。该培养基化学成分明确，可以逆转人多能干细胞命运，将人多能干细胞转化为具有双向嵌合能力的扩展多能干细胞，操作简单，具有良好的应用前景。

A special medium for transforming human pluripotent stem cells into expanded pluripotent stem cells and its application

【技术实现步骤摘要】
一种人多能干细胞转化为扩展多能干细胞的专用培养基及其应用
本专利技术属于干细胞和再生医学领域，具体涉及一种人多能干细胞转化为扩展多能干细胞的专用培养基及其应用。技术背景在哺乳动物早期胚胎发育过程中，存在两种不同类型的细胞，分别为全能(totipotent)细胞和多能(pluripotent)细胞。全能细胞具有最优越的发育潜能，能产生包括胚胎内和胚胎外组织在内的整个胚胎结构，而多能细胞只能发育为胚胎内组织。目前，桑葚胚之前的卵裂球被认为是全能的，在胚胎的第一个谱系特化过程中逐渐失去全能性并转变为多能性。多能性的胚胎干细胞(embryonicstemcell，ESC)或者诱导多能干细胞(inducedpluripotentstemcell，iPSC)已经被建立并大量研究，而全能性细胞，尤其是人类全能性样细胞，能否在体外稳定维持是一个长期以来试图解决的问题。在2017年，Yang等报道成功地在化合物小分子混合物培养基中维持了一种具有双向嵌合能力细胞。具体而言，他们发现由人LIF、GSK3抑制剂CHIR99021、DiM和MiH(称本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种将人多能干细胞转化为扩展多能干细胞的培养基，其特征在于，所述培养基以1:1混合的knockout DMEM/F12和Neurobasal为基础培养基，还包括以下组分：1％B27，0.5％N2，5％血清替代物，1％谷氨酸盐,1％非必需氨基酸,1％双抗,0.1mMβ-巯基乙醇，10ng/mL recombinant human LIF,1μM CHIR99021,2μM(S)-(+)-Dimethindene maleate,2μM Minocycline hydrochloride,0.5-5μM WNT通路抑制剂和1-10μM ROCK抑制剂。/n

【技术特征摘要】
1.一种将人多能干细胞转化为扩展多能干细胞的培养基，其特征在于，所述培养基以1:1混合的knockoutDMEM/F12和Neurobasal为基础培养基，还包括以下组分：1％B27，0.5％N2，5％血清替代物，1％谷氨酸盐,1％非必需氨基酸,1％双抗,0.1mMβ-巯基乙醇，10ng/mLrecombinanthumanLIF,1μMCHIR99021,2μM(S)-(+)-Dimethindenemaleate,2μMMinocyclinehydrochloride,0.5-5μMWNT通路抑制剂和1-10μMROCK抑制剂。


2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述WNT通路抑制剂为IWR-endo-1；所述ROCK抑制剂为Y-27632。


3.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述培养基还包括EZH2抑制剂。


4.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述EZH2抑制剂为GSK126，在培养基中的浓度为0.5-5μM。


5.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述培养基还包括糖酵解抑制剂。


6.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述糖酵解抑制剂为2-DG或ATA，其中2-DG在培养基中的浓度为0.5-10mM，...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋卫，耿婷，郑冉，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42