【技术实现步骤摘要】
一种着床前无透明带胚胎聚合及体外培养的方法
本专利技术涉及一种着床前无透明带胚胎聚合及体外培养的方法，属于胚胎工程、发育生物学
技术介绍
嵌合体是由两个或两个以上具有不同遗传性状的胚胎或细胞结合在一起发育而成的胚胎。嵌合体的制作方法主要有囊胚注射和聚合法两种。聚合法操作简单，不需要特殊的仪器设备，但其成功率却低于囊胚注射法。其原因可能是聚合法主要依赖于手工操作，各个环节的技术性和操作性都很强，例如透明带去除、胚胎聚合条件、聚合胚的培养液和无透明带胚胎培养条件等，影响因素较多。透明带在受精卵进行卵裂的过程中，可以阻止卵裂球分散、提高卵裂球之间的连接，保护受精卵内环境的稳定，对受精卵起着重要的保护作用。因此如何保证无透明带胚胎的正常发育是胚胎聚合及手工克隆胚胎领域急需解决的问题之一。无透明带胚胎培养方法主要有微滴单卵培养法、WOW培养法(参考文献：VajtaG,PeuraTT,HolmP,etal.Newmethodforcultureofzona-includedorzona-freeembryos:...
【技术保护点】
1.一种着床前无透明带胚胎聚合及体外培养的方法，其特征在于，是将处于2-8细胞期的胚胎去除透明带后，置于覆盖有胚胎级矿物油及G1或M16培养液的低溶点琼脂糖微滴孔中聚合，进行体外培养，发育到囊胚；所述低溶点琼脂糖微滴孔是利用低溶点的琼脂糖制成微滴并在其表层打微孔，以用于两个及两个以上无透明带胚胎的聚合及体外发育培养。/n
【技术特征摘要】
1.一种着床前无透明带胚胎聚合及体外培养的方法，其特征在于，是将处于2-8细胞期的胚胎去除透明带后，置于覆盖有胚胎级矿物油及G1或M16培养液的低溶点琼脂糖微滴孔中聚合，进行体外培养，发育到囊胚；所述低溶点琼脂糖微滴孔是利用低溶点的琼脂糖制成微滴并在其表层打微孔，以用于两个及两个以上无透明带胚胎的聚合及体外发育培养。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述体外培养的条件是在35-39℃，4-8％CO2，3-7％O2，85-93％N2的三气培养箱中培养。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，用于无透明带胚胎的聚合及着床前体外培养的物种，包括但不限于哺乳动物鼠、羊、牛、兔或人。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述低溶点琼脂糖使用时溶解于PBS中，使用的浓度范围为0.5-1.0％。
5.根据权利要求1或4所述的方法，其特征在于，低溶点琼脂...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈建泉，陆颖菲，赵承承，周宇，居蓉，
申请(专利权)人：南京市江宁医院，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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