一种红霉素降解菌RJJ-2及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种红霉素降解菌RJJ‑2及其应用，降解红霉素的方法和红霉素降解菌干粉剂。本发明专利技术的有益效果为：本发明专利技术提供的红霉素降解菌及其应用，是通过微生物技术手段，根据红霉素的特性，从特定环境条件中或者通过改造，得到能够降解红霉素的微生物，通过大环内酯酶，转移酶，裂解酶等对红霉素结构进行催化降解，得到无污染的代谢产物。实验证明，本发明专利技术的红霉素降解菌RJJ‑2可以在红霉素为唯一碳源的环境中存活，具有很高的红霉素降解活性，红霉素降解率可达到45％‑70％。本发明专利技术所提供的红霉素降解菌RJJ‑2可以应用于污染环境中的红霉素降解，在水处理和土壤修复方面具有很好的应用价值。

A erythromycin degrading bacterium rjj-2 and its application

【技术实现步骤摘要】
一种红霉素降解菌RJJ-2及其应用
本专利技术涉及微生物
，具体涉及一种红霉素降解菌RJJ-2及其应用。
技术介绍
抗生素生产过程中产生大量的菌渣，其主要成分是产生抗生素的菌体或菌丝体、废弃培养基、发酵过程中产生的代谢产物以及抗生素等。菌渣废弃物被国家部门认定为危险废弃物。不当的处理方法极易造成环境污染和生态危害，同时也是资源的浪费。红霉素生产过程也会产生同样的问题，其生态毒性主要体现在以下两点:一、通过影响环境中各种生物的种群数量及种群结构和营养转移方式，破坏环境中固有的以食物链为联系的生态系统的平衡；二、菌渣中会产生大量抗红霉素菌，当其繁殖、传播后，经过一系列堆积，最终会对人类健康造成危害。目前红霉素菌渣处理方法大致有:焚烧处理、厌氧消化技术处理、菌渣提纯、能源化处理等。这些处理方法成本较大、能量消耗大，而且可能存在二次污染，因此迫切需要更多安全的方法来处理抗生素菌渣。
技术实现思路
本专利技术的目的就是针对上述现有技术中的缺陷，提供了一种红霉素降解菌，即草酸青霉菌(Penicilliumoxalicum)RJJ-2及其应用，以及降解红霉素的方法、红霉素降解菌干粉剂。为了实现上述目的，本专利技术提供的技术方案为：一株草酸青霉菌，该草酸青霉菌(Penicilliumoxalicum)RJJ-2，已于2019年12月23日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏号为CGMCCNO.19265。本专利技术的第二个目的是提供了上述草酸青霉菌(Penicilliumoxalicum)RJJ-2在制备用于红霉素降解的制剂中的应用。本专利技术的第三个目的是提供了上述草酸青霉菌(Penicilliumoxalicum)RJJ-2在制备用于红霉素环境污染后修复的制剂中的应用。本专利技术的第四个目的是提供了上述草酸青霉菌(Penicilliumoxalicum)RJJ-2在制备用于红霉素残留污染后土壤修复的制剂中的应用。本专利技术的第五个目的是提供了上述草酸青霉菌(Penicilliumoxalicum)RJJ-2在制备用于红霉素残留污染后水体修复的制剂中的应用。本专利技术的第六个目的是提供了一种降解红霉素的方法，将上述的草酸青霉菌(Penicilliumoxalicum)RJJ-2接种于含有红霉素的体系中培养，即可实现降解红霉素。进一步的，上述的一种降解红霉素的方法，所述培养温度为37℃，培养时间为72h。本专利技术的第七个目的是提供了一种红霉素降解菌干粉剂，所述干粉剂中含有上述的草酸青霉菌(Penicilliumoxalicum)RJJ-2。本专利技术的第八个目的是提供了上述一种红霉素降解菌干粉剂的制备方法，是将草酸青霉菌(Penicilliumoxalicum)RJJ-2扩大培养后，经过常规方法干燥制得。本专利技术通过微生物技术法，即根据红霉素的特性，从特定环境条件中或者通过改造，得到能够降解红霉素的微生物，利用微生物将红霉素作为其生长所需的碳源和能源，并在酶的作用下水解成简单化合物，最终降解为H2O和CO2等代谢产物，且具有成本低，无二次污染优点，极大减少了环境的负担，符合现在国家所倡导“无废社会”的新理念。本专利技术的有益效果为：本专利技术提供的红霉素降解菌及其应用，以及降解红霉素的方法、红霉素降解菌干粉剂，是通过微生物技术法，即根据红霉素的特性，从特定环境条件中或者通过改造，得到能够降解红霉素的微生物，通过大环内酯酶，转移酶，裂解酶等对红霉素结构进行破坏，得到无污染的代谢产物。实验证明，本专利技术的红霉素降解菌RJJ-2可以在红霉素为唯一碳源的环境中存活，具有很高的红霉素降解活性，红霉素降解率可达到45％-70％。本专利技术所提供的红霉素降解菌RJJ-2可以应用于污染环境中的红霉素降解，在水处理和土壤修复方面具有很好的应用价值。附图说明图1显示为红霉素降解菌(草酸青霉菌(Penicilliumoxalicum)RJJ-2)的单菌落形态图。图2显示为实施例2的红霉素降解曲线。图3显示为实施例3的红霉素降解曲线。图4显示为实施例4的红霉素降解曲线。具体实施方式实施例1：红霉素降解菌(草酸青霉菌(Penicilliumoxalicum)RJJ-2)的筛选方法，步骤如下：称取一定量菌渣，加入蒸馏水，稀释10倍。取1mL上清液，加入9mL无菌水梯度稀释，稀释至1000倍，取上清液加入含红霉素的MSM无菌培养基，置于37℃、180rpm摇床中培养5天。将上述所得上清液均匀涂布在含红霉素的MSM固体培养基上，然后放入37℃培养箱培养3-5天，在LB平板上划线分离，得到红霉素降解菌RJJ-2，其单菌落形态如图1所示。菌株鉴定采用振荡破碎法获得红霉素降解菌RJJ-2基因组DNA，通过PCR方法对菌株ITS基因进行扩增并送至上海捷瑞生物公司进行测序分析；用于扩增ITS基因的上游引物序列为：5’TCCGTAGGTGAACCTGCGG3’，下游引物序列为5’TCCTCCGCTTATTGATATGC3’。PCR反应条件是：95℃预变性10min，95℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min，反应31个循环，72℃延伸5min。使用NCBI的BLAST功能在GeneBank数据库中进行序列比对，分析菌株的分类为：草酸青霉菌菌(Penicilliumoxalicum)。红霉素降解菌RJJ-2的ITS基因序列见序列表中序列1。菌株的ITS基因序列如GeneBank：MN759650所述。(一)主要材料1、培养基LB培养基：酵母粉5g，蛋白胨10g，氯化钠10g，琼脂15g，超纯水1000ml。MSM无机盐培养基：NH4Cl0.630g，K2HPO4·3H2O1.965g，KH2PO40.500g，NaNO31.00g，MgSO40.100g，超纯水1000ml。相对应的固体培养基则在1L液体培养基中添加琼脂粉15g配制成。2、仪器设备FlexCyclerPCR扩增仪，Tanon-3500凝胶成像系统，北京市六一仪器厂电泳仪，灭菌锅，英衡电子天平，UV1900紫外可见分光光度计，恒温培养箱，eppendorf高速冷冻离心机，摇床，青岛海尔集团的低温冰箱。(二)红霉素降解测定(1)红霉素标准曲线的绘制准确称取10.0mg工业纯红霉素于100mL容量瓶中，用流动相定容至标线，制备成每毫升含有100.0mg的红霉素标准液。加入流动相稀释制备成1.0、5.0、10.0、20.0、30.0、50.0和80.0mg/L的红霉素标准溶液。标准曲线为y(峰面积)＝0.2031x(红霉素浓度)-0.2785液相条件：色谱柱：C18填料，260X4.6(mm)流动相：V(0.025mol/L的K2HPO4溶液)∶本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株草酸青霉菌，其特征在于，该草酸青霉菌(Penicillium oxalicum)RJJ-2，保藏号为CGMCC NO.19265。/n

【技术特征摘要】
1.一株草酸青霉菌，其特征在于，该草酸青霉菌(Penicilliumoxalicum)RJJ-2，保藏号为CGMCCNO.19265。


2.根据权利要求1所述的草酸青霉菌(Penicilliumoxalicum)RJJ-2在制备用于红霉素降解的制剂中的应用。


3.根据权利要求1所述的草酸青霉菌(Penicilliumoxalicum)RJJ-2在制备用于红霉素环境污染后修复的制剂中的应用。


4.根据权利要求1所述的草酸青霉菌(Penicilliumoxalicum)RJJ-2在制备用于红霉素残留污染后土壤修复的制剂中的应用。


5.根据权利要求1所述的草酸青霉菌(Penicilliumoxalicum)RJJ-2在制备...

【专利技术属性】
技术研发人员：任建军，张晋，向荣程，张盟，牛东泽，呼和涛力，
申请(专利权)人：常州大学，江苏碧奥环保科技有限公司，河北慈心环保科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32