一种富集病原菌的平衡液及其制备方法和应用技术

本申请公开一种富集病原菌的平衡液，所述平衡液包括10％w/v‑20％w/v葡萄糖、5％w/v‑10％w/v甘露糖、2％w/v‑5％w/v半乳糖和2％w/v‑5％w/v麦芽糖。本申请还提供所述平衡液的制备方法。所述平衡液可以简单，快速地包裹Fe

A kind of equilibrium solution for enrichment of pathogenic bacteria and its preparation and Application

【技术实现步骤摘要】
一种富集病原菌的平衡液及其制备方法和应用
本申请涉及病原菌检测领域，具体地涉及一种富集病原菌的平衡液及其制备方法和应用。
技术介绍
对于感染性疾病患者，早期诊断早期治疗对疾病的预后具有巨大的影响。但是，在细菌，真菌或病毒感染早期，从临床液体标本中，例如组织液、血液、脑脊液、胸腹水、尿液、痰液等，很难直接检测到病原菌。因此，对于这些液体性标本，提高病原菌的检出率具有重要的临床诊断意义。
技术实现思路
以下是对本文详细描述的主题的概述。本概述并非是为了限制权利要求的保护范围。针对这些问题，本专利技术提供了一种平衡液，所述平衡液可以简单，快速地包裹Fe3O4纳米磁珠，从而完成磁珠的改良，而且此平衡液还可以包裹标本中的病原菌，从而更加增加了纳米磁珠与病原菌的结合，极大地提高了磁珠的富集效果。具体地，本申请提供一种富集病原菌的平衡液，所述平衡液包括10％w/v-20％w/v葡萄糖、5％w/v-10％w/v甘露糖、2％w/v-5％w/v半乳糖和2％w/v-5％w/v麦芽糖。在本申请中，所述平衡液包括15％w/v-20％w/v葡萄糖、8％w/v-10％w/v甘露糖、4％w/v-5％w/v半乳糖和4％w/v-5％w/v麦芽糖。在本申请中，所述平衡液还可以包括组胺、鞘氨醇、定菌磷、苯并噻唑、咪唑丙烯酸和谷氨酰胺。在本申请中，所述平衡液还可以包括2.5％w/v-5％w/v交联剂；所述交联剂可以选自糊精、乙烯基三乙氧基硅烷、硼酸和对甲苯磺酸中的任一种或更多种。交联剂的作用是将平衡液中的各组分均匀分布，使得有效成分能够更加紧密的附着与磁珠和病原菌的表面。在本申请中，所述病原菌可以为真菌或细菌。本申请还提供所述平衡液的制备方法，所述制备方法包括：将葡萄糖、甘露糖、半乳糖、麦芽糖溶解在溶剂中。在本申请中，所述制备方法还包括：加入组胺、鞘氨醇、定菌磷、苯并噻唑、咪唑丙烯酸和谷氨酰胺、以及交联剂，混匀，过滤，获得平衡液。在本申请中，所述制备方法包括：将葡萄糖、甘露糖、半乳糖、麦芽糖溶解在溶剂中，加入组胺、鞘氨醇、定菌磷、苯并噻唑、咪唑丙烯酸和谷氨酰胺、以及交联剂，混匀，过滤，获得平衡液。在本申请中，可以在10-40℃下，溶解葡萄糖、甘露糖、半乳糖和麦芽糖。在本申请中，所述溶剂可以为0.9％氯化钠水溶液。在本申请中，溶剂均为生理盐水，尽量维持细胞稳定的形态，利于样本的储存。平衡液用于磁珠的改良，以及标本中病原菌的包裹，极大地提高了磁珠富集病原菌的效果。所有操作均在常温下进行；平衡液的配制简单，快速。磁珠的改良处理一步完成，操作简单方便。标本经平衡液处理后，更提高了病原菌的检出率；使用磁珠富集后进行培养，经平衡液处理磁珠和标本后，富集培养后的菌落数明显增加，未经平衡液处理时，菌落数明显比处理组的少。在本申请中，过滤可以使用0.22μm过滤器进行。在本申请中，所述制备方法包括：在10-40℃下，将葡萄糖、甘露糖、半乳糖、麦芽糖溶解在0.9％氯化钠水溶液中，加入组胺、鞘氨醇、定菌磷、苯并噻唑、咪唑丙烯酸和谷氨酰胺、以及交联剂，混匀，使用0.22μm过滤器进行过滤，获得平衡液。本申请还提供所述平衡液在组织液、血液、脑脊液、胸腹水、尿液或痰液中的病原菌检测中的应用。在本申请中，w/v为质量体积比，例如20％意指20g溶质溶于100ml溶剂中。本申请方法的优点：1.平衡液制作简单，成本低；2.使用平衡液改良磁珠，方法简单，快速，有效；3.平衡液同时对标本中的病原菌包裹，更增加了磁珠的富集效果。本申请的其它特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且，部分地从说明书中变得显而易见，或者通过实施本申请而了解。本申请的目的和其他优点可通过在说明书、权利要求书以及附图中所特别指出的结构来实现和获得。附图说明附图用来提供对本申请技术方案的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本申请的实施例一起用于解释本申请的技术方案，并不构成对本申请技术方案的限制。图1示出菌液和磁珠在分别或同时使用平衡液富集前后的效果对比。具体实施方式为使本申请的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下文中将结合附图对本申请的实施例进行详细说明。需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互任意组合。实施例实施例1在25℃下，将20g葡萄糖，10g甘露糖，5g半乳糖和5g麦芽糖溶于100ml0.9％的氯化钠溶液中待充分溶解后，加入组胺、鞘氨醇、定菌磷、苯并噻唑、咪唑丙烯酸、谷氨酰胺各0.05g，加入5g糊精，混匀，使用0.22μm的针式过滤器过滤除菌，制成平衡液。实施例2一次性尿液采样器，分别取含有念珠菌的尿液样本后，2小时内送到检验人员处。含有平衡液的检测流程1)取50mg的磁珠(购自厦门普睿迈格生物科技有限公司)溶于1ml的实施例1制备的平衡液中混匀；2)取30ml尿液标本放置于50ml离心管内，加入3ml平衡液混匀；3)将步骤2)获得的混合液与步骤1)获得的磁珠混合，静置10min；4)将步骤3)获得的混合液置于钕硼磁铁磁场中，静置5min。弃上清，吸取100μl的沉淀涂板，置于37℃或28℃孵箱中进行培养，24h后观察菌落情况。5)同样检测流程，将相同量的磁珠溶于生理盐水中，并且相同体积的标本中加入相同量的生理盐水，经过富集后，吸取100μl的沉淀涂板培养，24h后观察菌落情况。从图1可以看出，磁珠和标本中未加入平衡液时，磁珠有一定的富集效果，但是富集后培养后的菌落数较其它加入平衡液的组少；单独标本中或磁珠中加入平衡液，磁珠的富集效果好于不加平衡液组；标本中和磁珠中都加入平衡液后，磁珠的富集效果最好，富集培养后的菌落数最多，明显多去其它组。实施例3稳定性测试1)热稳定性测试将实施例1的平衡液置于40℃避光水浴3天，肉眼未发现分层，镜下无无晶体析出，再按实施例2的操作步骤进行试验，发现富集效果没有减弱。2)冷稳定性测试将实施例1的平衡液置于-20℃冰箱避光1月，期间反复冻融数次，取出，肉眼未发现分层，镜下无晶体析出，再按实施例2的操作步骤进行试验，发现富集效果没有减弱。3)常温稳定性测试将实施例1的平衡液置于常温避光1个月，肉眼未发现分层，镜下无晶体析出，再按实施例2操作步骤进行试验，发现富集效果没有减弱。4)酸碱稳定性测试将生理盐水调节成2-10的不同pH值，然后加入念珠菌，按实施例2的操作步骤，用磁珠进行富集，发现富集效果没有变化。目前，有研究将Fe3O4纳米磁珠进行改良后，通过其表面的活性物质与标本中的病原菌进行结合，再在磁力的作用下，将病原菌进行富集沉淀，用于后续的检测，从而提高了标本中病原菌的检出率。但是，这些磁珠的改良过程复杂，需要在特定条件下进行，需要多种活性本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种富集病原菌的平衡液，所述平衡液包括10％w/v-20％w/v葡萄糖、5％w/v-10％w/v甘露糖、2％w/v-5％w/v半乳糖和2％w/v-5％w/v麦芽糖。/n

【技术特征摘要】
1.一种富集病原菌的平衡液，所述平衡液包括10％w/v-20％w/v葡萄糖、5％w/v-10％w/v甘露糖、2％w/v-5％w/v半乳糖和2％w/v-5％w/v麦芽糖。


2.根据权利要求1所述的平衡液，其中，所述平衡液包括15％w/v-20％w/v葡萄糖、8％w/v-10％w/v甘露糖、4％w/v-5％w/v半乳糖和4％w/v-5％w/v麦芽糖。


3.根据权利要求1或2所述的平衡液，所述平衡液还包括组胺、鞘氨醇、定菌磷、苯并噻唑、咪唑丙烯酸和谷氨酰胺。


4.根据权利要求1或2所述的平衡液，其中，所述平衡液还包括2.5％w/v-5％w/v交联剂；
所述交联剂选自糊精、乙烯基三乙氧基硅烷、硼酸和对甲苯磺酸中的任一种或更多种。


5.根据权利要求1或2所述的平衡液，其中，所述病原菌为真菌...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈弢，张浩，
申请(专利权)人：北京大学，
类型：发明
国别省市：北京;11