一种冠突散囊菌株及其发酵液提取物的制备方法技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，公开了一种冠突散囊菌株，冠突散囊菌株（

A strain of guantu and the preparation method of its fermentation liquid extract

【技术实现步骤摘要】
一种冠突散囊菌株及其发酵液提取物的制备方法
本专利技术涉及生物
，具体的说涉及一种冠突散囊菌株及其发酵液提取物的制备方法。
技术介绍
“金花菌”，即冠突散囊菌，是茯砖茶生产的优势菌，在茯砖茶上长有大量金黄色颗粒，俗称“金花”。“金花”是茯砖茶独特风味的主要影响因素，长年饮用茯砖茶有调理肠胃、促进消化、降血糖、降血脂、增强人体体质及延缓衰老等功效，而这些功效与“金花菌”的作用是密不可分的。冠突散囊菌的发酵液提取物同样具备抗氧化、抑菌、抑制乙酰胆碱脂酶活性作用、肉制品保鲜功能及提高免疫力作用，但是目前冠突散囊菌发酵液提取物的制备工艺太过粗糙，其提取纯度较低，如中国专利申请：201710010631.5，所提取得到的发酵液提取物功效较差，无法满足提高免疫力的药物、食品或保健食品功效的高要求。
技术实现思路
针对现有技术中的不足，本专利技术要解决的技术问题在于提供了一种冠突散囊菌株及其发酵液提取物的制备方法。为解决上述技术问题，本专利技术通过以下方案来实现：一种冠突散囊菌株（Eurotiumcristatum）116，该菌株已于2019年11月1日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心登记保藏，保藏编号为CGMCCNo.18826。本专利技术的一种冠突散囊菌株发酵液提取物，该发酵液提取物以冠突散囊菌株116为菌种，通过以下步骤制备而成：（1）菌种活化：挑取冠突散囊菌株菌丝接种于PDA平板上，25℃培养5天，连续活化2次；（2）种子液制备：在去离子水中加入PDB、KH2PO4、MgSO4·7H2O、维生素B1充分搅拌溶解，pH自然，配置得到PDB24.0g/L，KH2PO43.0g/L，MgSO4·7H2O1.5g/L，维生素B110.0mg/L的种子培养液；从步骤1中PDA平板上取5个0.5cm2大小菌块连同培养基分别接种到含有250ml种子培养基的500ml三角瓶中，在恒温震荡培养箱上培养5天（培养温度为25℃，转速150rpm）；（3）一级发酵：制备7.0L发酵培养基置于10L一级发酵罐中，121℃高压原位灭菌后冷却后备用；将步骤2中制备的冠突散囊菌株种子液在火焰保护法下接种于10L一级发酵罐发酵培养基中，接种量为1-10%；接种后，在温度24-30℃，转速60-250rpm，通气量0.1-4m3/h，罐压0.01-0.06MPa条件下发酵3-20天，得到冠突散囊菌株一级发酵液；（4）二级发酵：制备70L发酵培养基置于100L二级发酵罐中，121℃高压原位灭菌后冷却后备用；将步骤3中制备的冠突散囊菌株一级发酵液移种至100L二级发酵罐发酵培养基中，接种量为1-10%；接种后，在温度24-30℃，转速60-250rpm，通气量0.3-5m3/h，罐压0.01-0.06MPa条件下发酵4-35天，得到冠突散囊菌株二级发酵液；（5）超声辅助提取：将步骤4得到的冠突散囊菌株的发酵液在聚能式超声提取机中超声处理20min，超声频率20KHz，超声功率1200-3600W，占空比1:1-5:5，连续超声处理2次；（6）离心处理：将步骤5中冠突散囊菌株的发酵液通入管式离心机中，以转速19000rpm高速离心处理60分钟得到发酵液清液；（7）微滤：将步骤6中冠突散囊菌株的发酵液清夜通入超滤陶瓷膜，温度35-45℃，循环流量6m3/h，进行微滤40min除去悬浮物得到发酵液清液和浓缩液；（8）浓缩：将步骤7中冠突散囊菌株的发酵液清夜通入卷式膜，温度27-32℃，循环流量1200L/h，进口压力0.25MPa，纳滤浓缩20min得到发酵浓缩液；（9）喷雾干燥或冷冻干燥：将步骤7和步骤8中冠突散囊菌发酵浓缩液，通入喷雾干燥器中，进风温度为150-220℃，出口温度为80-120℃，喷雾干燥得到冠突散囊菌发酵液提取物；或将步骤7和步骤8中冠突散囊菌发酵浓缩液，放入冷冻干燥机不锈钢托盘中，经过预冻、一次升华、二次解析过程在-60-40℃下真空冷冻干燥24-72h获得发酵液提取物。进一步的，所述步骤2中每个500ml三角瓶中加入250ml培养基并在121℃高压灭菌20min，冷却后备用。进一步的，所述步骤3中发酵培养基的制备方法为：在去离子水中加入碳源、氮源、KH2PO4、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O、维生素B1充分搅拌溶解，得到碳源10-50g/L，氮源1-20g/L，KH2PO42-10g/L，MgSO4·7H2O0.5-5.5g/L，FeSO4·7H2O0.05-2.5g/L，维生素B110-100mg/L的发酵培养液，调节pH至5.0-6.5，在121℃高压灭菌20min，冷却后备用。进一步的，所述碳源为葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、半乳糖、可溶性淀粉、果糖中的一种或两种；所述氮源为蛋白胨、酵母提取物、硫酸铵、玉米浆、豆饼粉、酵母粉、甜菜碱中的一种或两种。进一步的，所述步骤4中发酵培养基的制备方法为：在去离子水中加入碳源、氮源、KH2PO4、MgSO4·7H2O、FeSO4·7H2O、维生素B1充分搅拌溶解，得到碳源10-50g/L，氮源1-20g/L，KH2PO42-10g/L，MgSO4·7H2O0.5-5.5g/L，FeSO4·7H2O0.05-2.5g/L，维生素B110-100mg/L的发酵培养液，调节pH至5.0-6.5，在121℃高压灭菌20min，冷却后备用。进一步的，所述碳源为葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、半乳糖、可溶性淀粉、果糖中的一种或两种；所述氮源为蛋白胨、酵母提取物、硫酸铵、玉米浆、豆饼粉、酵母粉、甜菜碱中的一种或两种。进一步的，该冠突散囊菌株发酵液提取物在制备提高免疫力的药物、食品或保健食品方面的应用。相对于现有技术，本专利技术的有益效果是：本专利技术的冠突散囊菌株的活化启动快，只需连续活化2次即可完成活化进行发酵工作，同时，本专利技术通过菌种活化、种子液制备、一级发酵、二级发酵、超声辅助提取、离心处理、陶瓷膜微滤、卷式膜纳滤浓缩、喷雾干燥或冷冻干燥等一系列步骤来制备得到冠突散囊菌株发酵液提取物，相对于现有技术，本专利技术优化了发酵液提取物的制备工艺，其提取纯度更高，所制取发酵液提取物提高免疫力的效果更加明显，为进一步研究提高免疫力的药物、食品或保健食品提供了依据。附图说明图1为本专利技术优选实施例中发酵液提取物的制备方法流程图；图2为本专利技术发酵液提取物对RAW264.7对数生长期细胞的活性影响示意图；图3为本专利技术发酵液提取物对小鼠脾淋巴细胞的活性影响示意图。具体实施方式下面结合附图对本专利技术的优选实施例进行详细阐述，以使专利技术的优点和特征能更易于被本领域技术人员理解，从而对本专利技术的保护范围做出更为清楚明确的界定。本专利技术的一种冠突散囊菌（Eurotiumcristatum）116，该菌株已于2019年11月1日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心登记保藏，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCCN本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种冠突散囊菌株（

【技术特征摘要】
1.一种冠突散囊菌株（Eurotiumcristatum）116，其特征在于，该菌株已于2019年11月1日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心登记保藏，保藏编号为CGMCCNo.18826。


2.一种冠突散囊菌株发酵液提取物，其特征在于，以权利要求1所述的冠突散囊菌株116为菌种，通过以下步骤制备而成：
（1）菌种活化：挑取冠突散囊菌株菌丝接种于PDA平板上，25℃培养5天，连续活化2次；
（2）种子液制备：在去离子水中加入PDB、KH2PO4、MgSO4·7H2O、维生素B1充分搅拌溶解，pH自然，配置得到PDB24.0g/L，KH2PO43.0g/L，MgSO4·7H2O1.5g/L，维生素B110.0mg/L的种子培养液；
从步骤1中PDA平板上取5个0.5cm2大小菌块连同培养基分别接种到含有250ml种子培养基的500ml三角瓶中，在恒温震荡培养箱上培养5天（培养温度为25℃，转速150rpm）；
（3）一级发酵：制备7.0L发酵培养基置于10L一级发酵罐中，121℃高压原位灭菌后冷却后备用；将步骤2中制备的冠突散囊菌株种子液在火焰保护法下接种于10L一级发酵罐发酵培养基中，接种量为1-10%；接种后，在温度24-30℃，转速60-250rpm，通气量0.1-4m3/h，罐压0.01-0.06MPa条件下发酵3-20天，得到冠突散囊菌株一级发酵液；
（4）二级发酵：制备70L发酵培养基置于100L二级发酵罐中，121℃高压原位灭菌后冷却后备用；将步骤3中制备的冠突散囊菌株一级发酵液移种至100L二级发酵罐发酵培养基中，接种量为1-10%；接种后，在温度24-30℃，转速60-250rpm，通气量0.3-5m3/h，罐压0.01-0.06MPa条件下发酵4-35天，得到冠突散囊菌株二级发酵液；
（5）超声辅助提取：将步骤4得到的冠突散囊菌株的发酵液在聚能式超声提取机中超声处理20min，超声频率20KHz，超声功率1200-3600W，占空比1:1-5:5，连续超声处理2次；
（6）离心处理：将步骤5中冠突散囊菌株的发酵液通入管式离心机中，以转速19000rpm高速离心处理60分钟得到发酵液清液发酵浓缩液，放入冷冻干燥机不锈钢托盘...

【专利技术属性】
技术研发人员：邹先伟，李倩，陈本科，蔡旭，
申请(专利权)人：深圳市清生元生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44