一种超声辅助双水相提取荔枝多酚的方法技术

本发明专利技术涉及天然产物精深加工技术领域，公开了一种超声辅助双水相提取荔枝多酚的方法，该方法包括以下步骤：制备荔枝粉末原料、配制短链醇/盐双水相萃取体系缓冲液、制取萃取溶液、超声波辅助处理提取上相萃取液、真空冷冻干燥制取荔枝多酚，本发明专利技术采用超声辅助双水相萃取荔枝多酚，提取工艺简单、成本低、操作温度低且易于控制，提取得到的荔枝多酚纯度高，适于间歇性和规模化生产加工高纯度、高收率的荔枝多酚，该发明专利技术方法为进一步合理利用荔枝资源奠定了基础。

Ultrasonic assisted extraction of polyphenols from Litchi

【技术实现步骤摘要】
一种超声辅助双水相提取荔枝多酚的方法
本专利技术涉及天然产物精深加工
，具体的说涉及一种超声辅助双水相提取荔枝多酚的方法。
技术介绍
荔枝是无患子科常绿植物荔枝的果实，广泛分布于我国广东、福建、云南等南部地区，是人们生活中的一种常见的水果。《本草纲目》记载荔枝全身是宝，皆可入药，具有养血健脾，行气消肿的功效。现代医学研究证实，荔枝多酚作为荔枝的主要活性成分，具有抗肿瘤、抗氧化、预防心脑血管疾病等作用。在日本和美国市场，荔枝多酚相关产品广泛流行，国内仅作为动物饲料添加剂使用。我国年产荔枝约160万吨，产量大，但保鲜期短，易腐坏；同时我国荔枝深加工技术薄弱，产业发展缓慢。目前荔枝多酚的提取工艺多为水或低碳醇或碱液等溶媒提取后再经大孔树脂柱层析分离纯化，提取工艺复杂，操作繁琐，工艺温度高，多酚含量在70%左右（公开号：CN1733130A）；因此，现在亟需一种高效提取、低能耗、高含量的提取方法，从而来开发荔枝多酚的保健作用以提高荔枝多酚的市场应用。因此，建立一种高效提取、低能耗、高纯度的提取方法，对指导荔枝的精深加工及其功能食品研制具有重要意义。
技术实现思路
针对现有技术中的不足，本专利技术要解决的技术问题在于提供了一种超声辅助双水相提取荔枝多酚的方法，该方法工艺简单，选择度高，且提取物纯度高，免疫增强，活性显著。为解决上述技术问题，本专利技术通过以下方案来实现：一种超声辅助双水相提取荔枝多酚的方法，该方法包括以下步骤：1）制备荔枝粉末原料：荔枝置于-40-40℃真空环境中冷冻干燥或不高于50℃自然环境中鼓风干燥，通过高速粉碎机粉碎后过60-100目筛，得到荔枝粉末；2）配制短链醇/盐双水相萃取体系缓冲液：在蒸馏水中加入占双水相萃取体系总质量比为45%-70%的无水乙醇和3%-20%的硫酸铵，搅拌、静置；3）制取萃取溶液：将步骤1中的荔枝粉末与步骤2中的双水相萃取体系缓冲液按固液比1:8至1:40的比例混合，并充分搅拌；4）超声波辅助处理提取上相萃取液：将步骤3中的萃取溶液通过超声波处理0.5-3小时，静置、分相后提取上相萃取液；5）真空冷冻干燥制取荔枝多酚：真空浓缩步骤4中的上相萃取液至原体积的1/5-1/2，然后将浓缩液在-40-40℃下真空冷冻干燥得到荔枝多酚精粉。进一步的，所述步骤2配制双水相萃取体系缓冲液时在蒸馏水中先加入硫酸铵后加入无水乙醇，并且静置时间为0.5-1小时。进一步的，所述步骤3制取萃取溶液时按比例将荔枝粉末加入到双水相萃取体系缓冲液中。进一步的，所述步骤4中超声波振动功率为150-200W，环境温度为30-50℃，并且超声波振动处理后静置50-60分钟；提取上相萃取液的次数为1-3次。进一步的，所述步骤5中真空浓缩的环境温度不高于50℃。相对于现有技术，本专利技术的有益效果是：本专利技术采用超声辅助双水相萃取荔枝多酚，提取工艺简单、成本低，提取荔枝多酚的活性高、纯度高、收益高，适于间歇性和规模化生产加工，避免了传统提取技术生物活性低、收率低、成本高等弊端。附图说明图1为本专利技术超声辅助双水相提取荔枝多酚方法的流程图；图2为本专利技术提取的荔枝多酚活性评价示意图。具体实施方式下面结合附图对本专利技术的优选实施例进行详细阐述，以使专利技术的优点和特征能更易于被本领域技术人员理解，从而对本专利技术的保护范围做出更为清楚明确的界定。实施例1参照附图1，本专利技术的一种超声辅助双水相提取荔枝多酚的方法，该方法包括以下步骤：1）制备荔枝粉末原料：取50g荔枝置于-40-40℃真空环境中冷冻干燥，通过高速粉碎机粉碎后过60目筛，得到荔枝粉末；2）配制短链醇/盐双水相萃取体系缓冲液：本优选实施例配制200g的双水相萃取体系缓冲液，在88g蒸馏水中加入先后加入12g硫酸铵及100g无水乙醇，搅拌、静置0.5h；无水乙醇、硫酸铵在体系缓冲液中的最终质量比分别50%和6%；3）制取萃取溶液：将步骤1准备的荔枝粉末按固液质量比为1:10的比例加入到步骤2配制的双水相体系缓冲液中（本优选实施例取5g荔枝粉末及50g双水相萃取体系缓冲液），并充分搅拌，制成萃取溶液；4）超声波辅助处理提取上相萃取液：将步骤3制取的萃取溶液在功率150W，温度37℃下，超声波处理1.0小时，静置60min，分相后提取上相萃取液，该提取步骤重复提取2次，并将2次提取液收集；5）真空冷冻干燥制取荔枝多酚：在40℃下，真空浓缩步骤4中收集的上相萃取液至原体积的1/5后，将浓缩液在-40-40℃下真空冷冻干燥获得荔枝多酚精粉11.56mg，提取率为2.31mg/g。本实施例对上述提取获得的荔枝多酚精粉中的多酚含量进行了测量，其方法及测量结果如下：（1）标准工作曲线的制备：以没食子酸为标准物质，Folin-Ciocalteu法测定多酚含量。该方法以吸光度为评价指标，检测波长765nm，取0.4mL样品加入Folin-Ciocalteu试剂1.0mL、10％Na2CO3溶液3.2mL，室温反应，显色反应时间2.0h，吸光度与多酚含量在0～250μg/mL范围内呈良好的线性关系（y＝0.005x-0.0028，R2＝0.9988）。（2）样品多酚含量的测定：称取1mg采用本专利技术方法获得的荔枝多酚精粉溶解定容于10mL容量瓶中，得到100µg/ml样品溶液；移取0.4mL标准系列溶液，加入Folin-Ciocalteu试剂1.0mL、10％Na2CO3溶液3.2mL，设置平行三组。在室温下避光反应2h后，在765nm波长下测定吸光度，然后根据工作曲线计算荔枝提取物中荔枝多酚的含量。经计算，荔枝多酚含量为96.7%。本实施例通过以下两种方法对上述提取获得的荔枝多酚进行活性检测评估：A细胞活性评价：取RAW264.7对数生长期细胞配制为合适浓度，并取200μL接种于96孔板中铺板，置于37°C，5%二氧化碳恒温培养箱中培养过夜后，将本专利技术提取获得的荔枝多酚精粉配制成不同浓度的多酚溶液，给予1-200µg/ml（具体的为1µg/ml、10µg/ml、50µg/ml、100µg/ml、200µg/ml）荔枝多酚给药处理，分别在培养24h后加入10μLCCK-8孵育3小时，450nm波长处检测吸光度值，按公式（2a）计算细胞增殖活性，该专利技术获取的荔枝多酚能显著促进该细胞增殖，结果见图2A，LP。增殖率(%)=（A样品-A对照）/A对照×100%（2a）B腹腔巨噬细胞活性评价：常规方法制备腹腔巨噬细胞，取合适浓度细胞悬液200μL接种于96孔板中进行铺板，放于37°C，5%二氧化碳恒温培养箱中进行培养，将本专利技术提取获得的荔枝多酚精粉配制成不同浓度的多酚溶液，分别给予1-100µg/ml（具体的为1µg/ml、10µg/ml、50µg/ml、100µg/ml）荔枝多酚给药处理，分别在培养24h后加入10μLCCK-8孵育3小时，在450nm波长处检测其本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种超声辅助双水相提取荔枝多酚的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：/n1）制备荔枝粉末原料：将荔枝置于-40-40℃真空环境中冷冻干燥或不高于50℃自然环境中鼓风干燥，通过高速粉碎机粉碎后过60-100目筛，得到荔枝粉末；/n2）配制短链醇/盐双水相萃取体系缓冲液：在蒸馏水中加入占双水相萃取体系总质量比为45%-70%的无水乙醇和3%-20%的硫酸铵，搅拌、静置；/n3）制取萃取溶液：将步骤1中的荔枝粉末与步骤2中的双水相萃取体系缓冲液按固液比1:8至1:40的比例混合，并充分搅拌；/n4）超声波辅助处理提取上相萃取液：将步骤3中的萃取溶液通过超声波处理0.5-3小时，静置、分相后提取上相萃取液；/n5）真空冷冻干燥制取荔枝多酚：真空浓缩步骤4中的上相萃取液至原体积的1/5-1/2，然后将浓缩液在-40-40℃下真空冷冻干燥得到荔枝多酚精粉。/n

【技术特征摘要】
1.一种超声辅助双水相提取荔枝多酚的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
1）制备荔枝粉末原料：将荔枝置于-40-40℃真空环境中冷冻干燥或不高于50℃自然环境中鼓风干燥，通过高速粉碎机粉碎后过60-100目筛，得到荔枝粉末；
2）配制短链醇/盐双水相萃取体系缓冲液：在蒸馏水中加入占双水相萃取体系总质量比为45%-70%的无水乙醇和3%-20%的硫酸铵，搅拌、静置；
3）制取萃取溶液：将步骤1中的荔枝粉末与步骤2中的双水相萃取体系缓冲液按固液比1:8至1:40的比例混合，并充分搅拌；
4）超声波辅助处理提取上相萃取液：将步骤3中的萃取溶液通过超声波处理0.5-3小时，静置、分相后提取上相萃取液；
5）真空冷冻干燥制取荔枝多酚：真空浓缩步骤4中的上相萃取液至原体积的1/5-1/2，然后将浓缩液在-40-40℃下真空冷冻...

【专利技术属性】
技术研发人员：邹先伟，李倩，
申请(专利权)人：深圳市清生元生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44