使用核苷酸靶识别的靶序列特异性改变技术制造技术

提供了用于靶向靶核苷酸序列的方法。该方法包括将以下引入细胞内：（i）CRISPR I‑D型相关蛋白Cas5d、Cas6d和Cas7d，或者编码这些蛋白质的核酸；以及（ii）引导RNA或编码所述引导RNA的DNA，所述引导RNA包括与所述靶核苷酸序列互补的序列、以及在所述互补序列之前和之后的衍生自CRISPR基因座的共同重复序列。

Target sequence specific change technology using nucleotide target recognition

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用核苷酸靶识别的靶序列特异性改变技术
本专利技术涉及用于靶向靶核苷酸序列的方法、用于特异性改变靶核苷酸序列的方法和用于抑制靶基因表达的方法，其中利用CRISPR（规律成簇间隔短回文重复）I-D型系统的核苷酸靶识别，以及涉及在所述方法中使用的包含Cas（CRISPR相关）蛋白和引导RNA的复合物。
技术介绍
细菌和古细菌具有CRISPR系统作为针对病毒和异源外源质粒的适应性免疫系统。CRISPR系统使用与入侵的DNA序列互补的低分子RNA（称为引导RNA或gRNA），以促进靶外源DNA的靶向和降解。此时，需要与gRNA结合以形成复合物的Cas蛋白。CRISPR系统包括I型、II型、III型和V型系统。在任何系统中，Cas蛋白-gRNA复合物作用于靶序列，以引起病毒和外源质粒的干扰。在II型和V型系统中，干扰机制涉及通过整合蛋白在靶蛋白上的DNA双链断裂，所述整合蛋白具有保留gRNA结合的蛋白质结构域和RuvC样DNA切割蛋白质结构域。对于III型系统，已在体外和体内证实与II型系统不同，干扰由通过5至8种Cas蛋白和gRNA的复合物切割靶RNA本文档来自技高网...

【技术保护点】
1. 一种用于靶向靶核苷酸序列的方法，所述方法包括将以下引入细胞内：/n（i）CRISPR I-D型相关蛋白Cas5d、Cas6d和Cas7d，或者编码该蛋白质的核酸，和/n（ii）引导RNA或编码引导RNA的DNA，所述引导RNA包含与靶核苷酸序列互补的序列、以及在互补序列之前和之后的衍生自CRISPR基因座的共同重复序列。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170821 JP 2017-158876;20171208 JP 2017-2365181.一种用于靶向靶核苷酸序列的方法，所述方法包括将以下引入细胞内：
（i）CRISPRI-D型相关蛋白Cas5d、Cas6d和Cas7d，或者编码该蛋白质的核酸，和
（ii）引导RNA或编码引导RNA的DNA，所述引导RNA包含与靶核苷酸序列互补的序列、以及在互补序列之前和之后的衍生自CRISPR基因座的共同重复序列。


2.一种用于改变靶核苷酸序列的方法，所述方法包括将以下引入细胞内：
（i）CRISPRI-D型相关蛋白Cas3d、Cas5d、Cas6d、Cas7d和Cas10d，或者编码该蛋白质的核酸，和
（ii）引导RNA或编码引导RNA的DNA，所述引导RNA包含与靶核苷酸序列互补的序列、以及在互补序列之前和之后的衍生自CRISPR基因座的共同重复序列。


3.一种用于抑制靶基因表达的方法，所述方法包括将以下引入细胞内：
（i）CRISPRI-D型相关蛋白Cas5d、Cas6d和Cas7d或者编码该蛋白的核酸，和
（ii）引导RNA或编码引导RNA的DNA，所述引导RNA包含与靶基因序列的至少一部分互补的序列、以及在互补序列之前和之后的衍生自CRISPR基因座的共同重复序列。


4.根据权利要求1至3中任一项的方法，其中所述引导RNA包含与靶核苷酸序...

【专利技术属性】
技术研发人员：刑部敬史，刑部祐里子，
申请(专利权)人：国立大学法人德岛大学，
类型：发明
国别省市：日本;JP