【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包封的多核苷酸和使用方法相关申请的交叉引用本申请要求2017年7月14日提交的美国临时申请号62/532,886和2018年3月27日提交的美国临时申请号62/648,651的优先权，所述申请的公开内容各自以引用的方式整体并入本文。关于序列表的声明与本申请相关的序列表以文本格式代替纸质副本提供，并且特此以引用的方式并入本说明书中。含有序列表的文本文件的名称是ONCR_005_03WO_ST25.txt。所述文本文件是23KB，于2018年7月13日创建，并且经由EFS-Web以电子方式提交。
本公开总体上涉及免疫学、炎症和癌症治疗剂的领域。更具体地，本公开涉及颗粒包封的编码具有复制能力的病毒基因组的多核苷酸。本公开还涉及诸如癌症的增生性病症的治疗和预防。
技术介绍
溶瘤病毒是能够感染并溶解肿瘤细胞的具有溶解生命周期的具有复制能力的病毒。直接肿瘤细胞溶解不仅导致细胞死亡，而且导致产生针对由局部抗原呈递细胞吸收并呈递的肿瘤抗原的适应性免疫应答。因此，溶瘤病毒通过直接细胞溶解和通过促进能够在病毒清除...
【技术保护点】
1.一种包含重组DNA分子的脂质纳米颗粒(LNP)，所述重组DNA分子包含编码具有复制能力的病毒基因组的多核苷酸序列，其中所述多核苷酸序列可操作地连接至能够结合哺乳动物RNA聚合酶II(Pol II)的启动子序列并且由3'核酶编码序列和5'核酶编码序列侧接，/n其中所述编码所述具有复制能力的病毒基因组的多核苷酸是非病毒来源的。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170714 US 62/532,886;20180327 US 62/648,6511.一种包含重组DNA分子的脂质纳米颗粒(LNP)，所述重组DNA分子包含编码具有复制能力的病毒基因组的多核苷酸序列，其中所述多核苷酸序列可操作地连接至能够结合哺乳动物RNA聚合酶II(PolII)的启动子序列并且由3'核酶编码序列和5'核酶编码序列侧接，
其中所述编码所述具有复制能力的病毒基因组的多核苷酸是非病毒来源的。
2.如权利要求1所述的LNP，其中所述具有复制能力的病毒基因组是单链RNA(ssRNA)病毒。
3.如权利要求1所述的LNP，其中所述具有复制能力的病毒基因组是单链RNA(ssRNA)病毒，是正义((+)-义)或负义((-)-义)ssRNA病毒。
4.如权利要求3所述的LNP，其中所述具有复制能力的病毒基因组是(+)-义ssRNA病毒，并且所述(+)-义ssRNA病毒是小核糖核酸病毒。
5.如权利要求4所述的LNP，其中所述小核糖核酸病毒是塞内卡谷病毒(SVV)或柯萨奇病毒。
6.如权利要求1-5中任一项所述的LNP，其中使所述LNP与细胞接触使得所述细胞产生病毒颗粒，并且其中所述病毒颗粒是感染性且溶解性的。
7.如权利要求1-6中任一项所述的LNP，其中所述重组DNA分子还包含编码外源性有效负载蛋白的多核苷酸序列。
8.如权利要求7所述的LNP，其中所述外源性有效负载蛋白是荧光蛋白、酶蛋白、细胞因子、趋化因子或能够结合至细胞表面受体的抗原结合分子。
9.如权利要求8所述的LNP，其中所述细胞因子选自Flt3配体和IL-18。
10.如权利要求8所述的LNP，其中所述趋化因子选自CXCL10和CCL4。
11.如权利要求8所述的LNP，其中所述抗原结合分子能够结合至并且抑制免疫检查点受体。
12.如权利要求11所述的LNP，其中所述免疫检查点受体是PD1。
13.如权利要求1-12中任一项所述的LNP，其中微小RNA(miRNA)靶序列(miR-TS)盒被插入所述编码所述具有复制能力的病毒基因组的核酸序列中，其中所述miR-TS盒包含一个或多个miRNA靶序列，并且其中一种或多种所述相应miRNA在细胞中的表达抑制所述具有复制能力的病毒基因组在所述细胞中的复制。
14.如权利要求13所述的LNP，其中所述一种或多种miRNA选自miR-124、miR-1、miR-143、miR-128、miR-219、miR-219a、miR-122、miR-204、miR-217、miR-137和miR-126。
15.如权利要求14所述的LNP，其中所述miR-TS盒包含miR-124靶序列的一个或多个拷贝、miR-1靶序列的一个或多个拷贝以及miR-143靶序列的一个或多个拷贝。
16.如权利要求14所述的LNP，其中所述miR-TS盒包含miR-128靶序列的一个或多个拷贝、miR-219a靶序列的一个或多个拷贝以及miR-122靶序列的一个或多个拷贝。
17.如权利要求14所述的LNP，其中所述miR-TS盒包含miR-128靶序列的一个或多个拷贝、miR-204靶序列的一个或多个拷贝以及miR-219靶序列的一个或多个拷贝。
18.如权利要求14所述的LNP，其中所述miR-TS盒包含miR-217靶序列的一个或多个拷贝、miR-137靶序列的一个或多个拷贝以及miR-126靶序列的一个或多个拷贝。
19.如权利要求1-18中任一项所述的LNP，其中所述重组DNA分子是包含所述编码具有复制能力的病毒基因组的多核苷酸序列的质粒。
20.如权利要求1-19中任一项所述的LNP，其中所述LNP包含阳离子脂质、胆固醇和中性脂质。
21.如权利要求20所述的LNP，其中所述阳离子脂质是1,2-二油酰基-3-三甲基铵-丙烷(DOTAP)，并且其中所述中性脂质是1,2-二月桂酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(DLPE)或1,2-二油酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺(DOPE)。
22.如权利要求20或21所述的LNP，所述LNP还包含磷脂-聚合物缀合物，其中所述磷脂-聚合物缀合物是1,2-二硬脂酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺-聚(乙二醇)(DSPE-PEG)或1,2-二硬脂酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺-N-[氨基(聚乙二醇)](DSPE-PEG-胺)。
23.如权利要求1-22中任一项所述的LNP，其中透明质酸缀合至所述LNP的表面。
24.一种治疗性组合物，所述治疗性组合物包含多个根据权利要求1-23中任一项的脂质纳米颗粒，其中所述多个LNP具有约150nm至约500nm的平均大小。
25.如权利要求24所述的治疗性组合物，其中所述多个LNP具有约200nm至约500nm、约300nm至约500nm、约350nm至约500nm、约400nm至约500nm、约425nm至约500nm、约450nm至约500nm或约475nm至约500nm的平均大小。
26.如权利要求24或25所述的治疗性组合物，其中所述多个LNP具有小于约-20mV、小于约-30mV、小于约35mV或小于约-40mV的平均ζ电位。
27.如权利要求26所述的治疗性组合物，其中所述多个LNP具有介于约-50mV至约-20mV、约-40mV至约-20mV或约-30mV至约-20mV之间的平均ζ电位。
28.如权利要求26或27所述的治疗性组合物，其中所述多个LNP具有约-30mV、约-31mV、约-32mV、约-33mV、约-34mV、约-35mV、约-36mV、约-37mV、约-38mV、约-39mV或约-40mV的平均ζ电位。
29.如权利要求24-28中任一项所述的治疗性组合物，其中向受试者施用所述治疗性组合物将所述重组DNA多核苷酸递送至所述受试者的靶细胞，并且其中所述重组DNA多核苷酸产生能够溶解所述受试者的所述靶细胞的感染性病毒。
30.如权利要求29所述的治疗性组合物，其中静脉内或肿瘤内递送所述组合物。
31.如权利要求29所述的治疗性组合物，其中所述靶细胞是癌性细胞。
32.一种抑制有需要的受试者的癌性肿瘤的生长的方法，所述方法包括向所述有需要的受试者施用根据权利要求24-31中任一项的治疗性组合物，其中施用所述组合物抑制所述肿瘤的生长。
33.如权利要求32所述的方法，其中所述施用是肿瘤内或静脉内的。
34.如权利要求32或33所述的方法，其中所述癌症是肺癌或肝癌。
35.一种重组DNA分子，所述重组DNA分子包含编码具有复制能力的病毒基因组的多核苷酸序列，其中所述多核苷酸序列可操作地连接至能够结合哺乳动物RNA聚合酶II(PolII)的启动子序列并且由3'核酶编码序列和5'核酶编码序列侧接，
其中所述编码所述具有复制能力的病毒基因组的多核苷酸是非病毒来源的。
36.如权利要求35所述的重组DNA分子，其中所编码的病毒是单链RNA(ssRNA)病毒。
37.如权利要求36所述的重组DNA分子，其中所述ssRNA病毒是正义((+)-义)或负义((-)-义)ssRNA病毒。
38.如权利要求37所述的重组DNA分子，其中所述(+)-义ssRNA病毒是小核糖核酸病毒。
39.如权利要求38所述的重组DNA分子，其中所述小核糖核酸病毒是塞内卡谷病毒(SVV)或柯萨奇病毒。
40.如权利要求35-39中任一项所述的重组DNA分子，其中当通过非病毒递送媒介物引入细胞时，所述重组DNA分子能够产生感染性、溶解性病毒。
41.如权利要求35-39中任一项所述的重组DNA分子，其中所述重组DNA分子还包含编码外源行有效负载蛋白的多核苷酸序列。
42.如权利要求41所述的重组DNA分子，其中所述外源性有效负载蛋白是荧光蛋白、酶蛋白、细胞因子、趋化因子、细胞表面受体的配体或能够结合至细胞表面受体的抗原结合分子。
43.如权利要求42所述的重组DNA分子，其中所述细胞因子是IL-18。
44.如权利要求42所述的重组DNA分子，其中所述细胞表面受体的配体是Flt3配体。
45.如权利要求42所述的重组DNA分子，其中所述趋化因子选自CXCL10和CCL4。
46.如权利要求42所述的重组DNA分子，其中所述抗原结合分子能够结合至并且抑制免疫检查点受体。
47.如权利要求46所述的重组DNA分子，其中所述免疫检查点受体是PD1。
48.如权利要求35-47中任一项所述的重组DNA分子，其中微小RNA(miRNA)靶序列(miR-TS)盒被插入所述编码所述具有复制能力的病毒基因组的核酸序列中，其中所述miR-TS盒包含一个或多个miRNA靶序列，并且其中一种或多种所述相应miRNA在细胞中的表达抑制所述具有复制能力的病毒基因组在所述细胞中的复制。
49.如权利要求48所述的重组DNA分子，其中所述一种或多种miRNA选自miR-124、miR-1、miR-143、miR-128、miR-219、miR-219a、miR-122、miR-204、miR-217、miR-137和miR-126。
50.如权利要求49所述的重组DNA分子，其中所述miR-TS盒包含miR-124靶序列的一个或多个拷贝、miR-1靶序列的一个或多个拷贝以及miR-143靶序列的一个或多个拷贝。
51.如权利要求49所述的重组DNA分子，其中所述miR-TS盒包含miR-128靶序列的一个或多个拷贝、miR-219a靶序列的一个或多个拷贝以及miR-122靶序列的一个或多个拷贝。
52.如权利要求49所述的重组DNA分子，其中所述miR-TS盒包含miR-128靶序列的一个或多个拷贝、miR-204靶序列的一个或多个拷贝以及miR-219靶序列的一个或多个拷贝。
53.如权利要求49所述的重组DNA分子，其中所述miR-TS盒包含miR-217靶序列的一个或多个拷贝、miR-137靶序列的一个或多个拷贝以及miR-126靶序列的一个或多个拷贝。
54.如权利要求35-53中任一项所述的重组DNA分子，其中所述重组DNA分子是包含所述编码具有复制能力的病毒基因组的多核苷酸序列的质粒或NanoV。
55.一种重组DNA分子，所述重组DNA分子包含编码具有复制能力的病毒基因组的多核苷酸序列，
其中所述编码所述具有复制能力的病毒的多核苷酸序列是非病毒来源的，并且
其中当通过非病毒递送媒介物引入细胞时，所述重组DNA分子能够产生具有复制能力的病毒。
56.如权利要求55所述的重组DNA分子，其中所述具有复制能力的病毒基因组是DNA病毒的基因组或RNA病毒的基因组。
57.如权利要求56所述的重组DNA分子，其中所述DNA基因组或RNA基因组是双链或单链病毒。
58.如权利要求57所述的重组DNA分子，其中所述单链基因组是正义((+)-义)或负义((-)-义)基因组。
59.如权利要求55所述的重组DNA分子，其中所述细胞是哺乳动物细胞。
60.如权利要求59所述的重组DNA分子，其中所述细胞是哺乳动物受试者中存在的哺乳动物细胞。
61.如权利要求55所述的重组DNA分子，其中所述具有复制能力的病毒选自由以下组成的组：腺病毒、柯萨奇病毒、脊髓灰质炎病毒、塞内卡谷病毒、马疱疹病毒、1型单纯疱疹病毒(HSV-1)、拉沙病毒、鼠白血病病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、新城疫病毒、麻疹病毒、细小病毒、呼肠孤病毒、辛德毕斯病毒、痘苗病毒、粘液瘤病毒、水疱性口炎病毒(VSV)、马拉巴病毒。
62.如权利要求55-61中任一项所述的重组DNA分子，所述重组DNA分子还包含插入所述编码所述具有复制能力的病毒基因组的多核苷酸中的一个或多个微小RNA(miRNA)靶序列(miR-TS)盒，其中所述miR-TS盒包含一个或多个miRNA靶序列，并且其中一种或多种所述相应miRNA在细胞中的表达抑制所编码病毒在所述细胞中的复制。
63.如权利要求62所述的重组DNA分子，其中所述一个或多个miR-TS盒被并入一种或多种必需病毒基因的5'非翻译区(UTR)或3'UTR中。
64.如权利要求63所述的重组DNA分子，其中所述一种或多种必需病毒基因选自由以下组成的组：UL1、UL5、UL6、UL7、UL8、UL9、UL11、UL12、UL14、UL15、UL17、UL18、UL19、UL20、UL22、UL25、UL26、UL26.5、UL27、UL28、UL29、UL30、UL31、UL32、UL33、UL34、UL35、UL36、UL37、UL38、UL39、UL40、UL42、UL48、UL49、UL50、UL52、UL53、UL54、US1、US3、US4、US5、US6、US7、US8、US12、ICP0、ICP4、ICP22、ICP27、ICP47、PB、F、B5R、SERO-1、Cap、Rev、VP1-4、核蛋白(N)、磷蛋白(P)、基质蛋白(M)、糖蛋白(G)、聚合酶(L)、E1、E2、E3、E3、VP1、VP2、VP3、VP4、2A、2B、2C、3A、3B、3C以及3D。
65.如权利要求62所述的重组DNA分子，其中所述一个或多个miR-TS盒被并入一种或多种非必需基因的5'非翻译区(UTR)或3'UTR中。
66.如权利要求55-65中任一项所述的重组DNA分子，其中所述多核苷酸被插入选自复制子、质粒、粘粒、噬菌粒、转座子、细菌人工染色体、酵母人工染色体或末端封闭的线性双链溶瘤病毒(Ov)DNA分子的核酸载体中。
67.如权利要求55所述的重组DNA分子，其中所述多核苷酸是DNA多核苷酸，并且还包含在所述编码所述具有复制能力的病毒基因组的核酸序列的5'端上的第一AAV来源的反向末端重复序列(ITR)和在所述编码所述具有复制能力的病毒基因组的核酸序列的3'端上的第二AAV来源的ITR。
68.如权利要求55所述的重组DNA分子，其中所述多核苷酸是DNA多核苷酸，并且还包含紧邻所述编码所述具有复制能力的病毒基因组的核酸序列的3'的第一核酶编码序列和紧邻所述编码所述具有复制能力的病毒基因组的核酸序列的5'的第二核酶编码序列。
69.如权利要求68所述的重组DNA分子，其中所述第一核酶编码序列和所述第二核酶编码序列编码锤头状核酶或丁型肝炎病毒核酶。
70.如权利要求55所述的重组DNA分子，其中所述启动子序列能够结合真核RNA聚合酶。
71.如权利要求55所述的重组DNA分子，其中所述启动子序列能够结合哺乳动物RNA聚合酶。
72.如权利要求55所述的重组DNA分子，其中所述多核苷酸是DNA多核苷酸，并且所述哺乳动物聚合酶驱动感染性、具有复制能力的RNA病毒的转录。
73.如权利要求55所述的重组DNA分子，其中所述多核苷酸是DNA多核苷酸，并且所述哺乳动物聚合酶驱动感染性、具有复制能力的DNA病毒的转录。
74.如权利要求55所述的重组DNA分子，其中所述启动子序列选择性地驱动所述多核苷酸在癌细胞中的转录。
75.如权利要求55-76中任一项所述的重组DNA分子，其中所述启动子序列源自选自由以下组成的组的基因：hTERT、HE4、CEA、OC、ARF、CgA、GRP78、CXCR4、HMGB2、INSM1、间皮素、OPN、RAD51、TETP、H19、uPAR、ERBB2、MUC1、Frz1或IGF2-P4。
76.如权利要求55-75中任一项所...
【专利技术属性】
技术研发人员：米切尔·H·菲尼尔，爱德华·肯尼迪，洛伦娜·勒纳，
申请(专利权)人：昂克诺斯公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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