【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】溶瘤病毒载体及其用途相关申请的引用本申请要求2017年7月26日提交的美国临时申请号62/537,359和2018年6月19日提交的美国临时申请号62/686,802的优先权，所述临时申请的公开内容各自以引用的方式整体并入本文。关于序列表的声明与本申请相关的序列表以文本格式代替纸质副本提供，并且特此以引用的方式并入本说明书中。含有序列表的文本文件的名称是ONCR_010_02WO_ST25.txt。所述文本文件是500KB，于2018年7月26日创建，并且经由EFS-Web以电子方式提交。
本公开涉及用于治疗和预防癌症的重组病毒载体。特别地，本公开涉及溶瘤病毒载体。
技术介绍
由于肿瘤蛋白表达谱的异质性，当前的靶向癌症治疗剂仅在小范围的癌症中有效。此外，许多癌症治疗(包括现有的病毒载体、化学疗法、放射和外科手术)缺乏选择性地治疗癌性细胞、同时维持正常非癌性细胞的健康和存活力的特异性，并且可产生不合乎需要的脱靶效应。因此，在本领域中需要在多种癌症中广泛有效并且能够选择性地消除癌性细胞的癌症疗法。...
【技术保护点】
1.一种重组溶瘤单纯疱疹病毒(HSV)，所述重组溶瘤单纯疱疹病毒包含插入一种或多种必需病毒基因的基因座中的至少两个微小RNA(miRNA)靶序列，其中所述一种或多种病毒基因选自由以下组成的组：ICP4、ICP27、ICP8、ICP22、ICP34.5、UL5、UL8、UL9、UL30、UL39/40和UL42，/n其中非癌性细胞中所述重组HSV的复制与相同细胞类型的癌性细胞中所述重组HSV的复制相比减少。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170726 US 62/537,359;20180619 US 62/686,8021.一种重组溶瘤单纯疱疹病毒(HSV)，所述重组溶瘤单纯疱疹病毒包含插入一种或多种必需病毒基因的基因座中的至少两个微小RNA(miRNA)靶序列，其中所述一种或多种病毒基因选自由以下组成的组：ICP4、ICP27、ICP8、ICP22、ICP34.5、UL5、UL8、UL9、UL30、UL39/40和UL42，
其中非癌性细胞中所述重组HSV的复制与相同细胞类型的癌性细胞中所述重组HSV的复制相比减少。
2.如权利要求1所述的溶瘤病毒，其中所述一种或多种病毒基因选自由以下组成的组：ICP8、ICP22、ICP34.5、UL5、UL8、UL9、UL30、UL39/40和UL42。
3.如权利要求2所述的溶瘤病毒，其中所述一种或多种病毒基因选自由以下组成的组：UL8、ICP8和UL30。
4.如权利要求1所述的溶瘤病毒，其中所述一种或多种病毒基因选自由以下组成的组：ICP27和ICP4。
5.如权利要求1所述的溶瘤病毒，其中所述一种或多种病毒基因选自由以下组成的组：ICP4、ICP27、UL8、UL42和ICP34.5。
6.如权利要求1所述的溶瘤病毒，其中所述细胞选自由以下组成的组：神经元细胞、心脏细胞、肌肉细胞和肝细胞。
7.如权利要求6所述的溶瘤病毒，其中所述神经元细胞是中枢神经系统细胞、外周神经系统细胞、脑细胞或脊髓细胞。
8.如权利要求6所述的溶瘤病毒，其中所述肌肉细胞是横纹肌细胞或平滑肌细胞。
9.如权利要求1所述的溶瘤病毒，其中所述非癌性细胞和所述癌性细胞是脑细胞，并且其中所述至少两个miRNA靶序列是选自由以下组成的组的miRNA的靶序列：miR-137、miR-219a、miR-124、miR-9、miR-487b和miR-128。
10.如权利要求9所述的溶瘤病毒，其中所述至少两个miRNA靶序列是选自由以下组成的组的miRNA的靶序列：miR-137、miR-219a、miR-124和miR-128。
11.如权利要求1所述的溶瘤病毒，其中所述非癌性细胞和所述癌性细胞是心脏细胞或横纹肌细胞，并且其中所述至少两个miRNA靶序列是选自由以下组成的组的miRNA的靶序列：miR-208b、miR-1、miR-208a、miR-133a、miR-4284、miR-499a、miR-126、miR-30e、miR-378i、miR-30b和miR-378。
12.如权利要求11所述的溶瘤病毒，其中所述至少两个miRNA靶序列是选自由以下组成的组的miRNA的靶序列：miR-208b、miR-1和miR-208a。
13.如权利要求1所述的溶瘤病毒，其中所述非癌性细胞和所述癌性细胞是脊髓细胞，并且其中所述至少两个miRNA靶序列是选自由以下组成的组的miRNA的靶序列：miR-219a、miR-9、miR-204、miR-577、miR-99a、miR-100、miR-132和miR-135。
14.如权利要求13所述的溶瘤病毒，其中所述至少两个miRNA靶序列是选自由以下组成的组的miRNA的靶序列：miR-219a、miR-9和miR-204。
15.如权利要求1所述的溶瘤病毒，其中所述非癌性细胞和所述癌性细胞是外周神经系统细胞，并且其中所述至少两个miRNA靶序列是选自由以下组成的组的miRNA的靶序列：miR-204、miR-1、miR-206、miR-9、miR-99a、miR-199b、miR-145、miR-100、miR-574。
16.如权利要求1所述的溶瘤病毒，其中所述非癌性细胞和所述癌性细胞是肝细胞，并且其中所述至少两个miRNA靶序列是选自由以下组成的组的miRNA的靶序列：miR-122和miR-126。
17.如权利要求1所述的溶瘤病毒，其中所述非癌性细胞和所述癌性细胞是平滑肌细胞，并且其中所述至少两个miRNA靶序列是选自由以下组成的组的miRNA的靶序列：miR-143和miR-145。
18.如权利要求1-17中任一项所述的溶瘤病毒，其中所述两个或更多个miR靶序列被并入miR-T盒中，所述miR-T盒被插入所述一种或多种必需病毒基因的5'非翻译区(UTR)或3'UTR中。
19.如权利要求18所述的溶瘤病毒，其中所述miR-T盒包含少于1000个核苷酸的长度。
20.如权利要求19所述的溶瘤病毒，其中所述miR-T盒包含约25与约500个核苷酸之间的长度。
21.如权利要求18所述的溶瘤病毒，其中所述miR-T盒包含约100与约500个核苷酸之间的长度。
22.一种重组溶瘤单纯疱疹病毒(HSV)，所述重组溶瘤单纯疱疹病毒包含：
(i)第一微小RNA(miRNA)靶序列盒(miR-TS盒)，所述第一微小RNA靶序列盒插入第一病毒基因中并且包含miR-124、miR-1和miR-143中的每一者的至少2个靶序列；
(ii)第二miR-TS盒，所述第二miR-TS盒插入第二病毒基因中并且包含miR-128、miR-219a和miR-122中的每一者的至少2个靶序列；以及
(iii)第三miR-TS盒，所述第三miR-TS盒插入第三病毒基因中并且包含miR-219a、miR-204和miR-128中的每一者的至少2个靶序列。
23.如权利要求22所述的重组HSV，所述重组HSV还包含插入第三病毒基因中的第三miR-TS盒，其中所述第三miR-TS盒包含：
(a)miR-137、miR-208b-3p和miR-126中的每一者的至少2个靶序列；或
(b)miR-137、miR-217和miR-126中的每一者的至少2个靶序列。
24.如权利要求22或23所述的重组HSV，其中所述miR-TS盒中的每一者包含所述各自miRNA中的每一者的4个靶序列。
25.如权利要求22-23中任一项所述的重组HSV，其中所述第一病毒基因是ICP4。
26.如权利要求22-23中任一项所述的重组HSV，其中所述第二病毒基因是ICP27。
27.如权利要求22-23中任一项所述的重组HSV，其中所述第三病毒基因是ICP34.5。
28.如权利要求23所述的重组HSV，其中所述第四病毒基因是UL8。
29.如权利要求22-28中任一项所述的重组HSV，其中非癌性细胞中所述重组HSV的复制与相同细胞类型的癌性细胞中所述重组HSV的复制相比减少，其中所述细胞选自由以下组成的组：神经元细胞、心脏细胞、肌肉细胞和肝细胞。
30.如权利要求22-29中任一项所述的重组HSV，其中所述第一miR-TS盒包含与SEQIDNO:852至少95％相同的核酸序列。
31.如权利要求30所述的重组HSV，其中所述第一miR-TS盒包含SEQIDNO:852的核酸序列或由SEQIDNO:852的核酸序列组成。
32.如权利要求22-29中任一项所述的重组HSV，其中所述第二miR-TS盒包含与SEQIDNO:853至少95％相同的核酸序列。
33.如权利要求32所述的重组HSV，其中所述第二miR-TS盒包含SEQIDNO:853的核酸序列或由SEQIDNO:853的核酸序列组成。
34.如权利要求22-29中任一项所述的重组HSV，其中所述第三miR-TS盒包含与SEQIDNO:854至少95％相同的核酸序列。
35.如权利要求34所述的重组HSV，其中所述第三miR-TS盒包含SEQIDNO:854的核酸序列或由SEQIDNO:854的核酸序列组成。
36.如权利要求23-29中任一项所述的重组HSV，其中所述第四miR-TS盒包含与SEQIDNO:855至少95％相同的核酸序列。
37.如权利要求36所述的重组HSV，其中所述第四miR-TS盒包含SEQIDNO:855的核酸序列或由SEQIDNO:855的核酸序列组成。
38.如权利要求1-37中任一项所述的重组HSV，所述重组HSV还包含编码有一种或多种有效负载分子的异源多核苷酸序列。
39.如权利要求38所述的重组HSV，其中所述异源多核苷酸序列编码选自由IL-12、CCL4和CXCL10组成的组的有效负载。
40.如权利要求38所述的重组HSV，其中所述异源多核苷酸序列编码两种或更多种选自由IL-12、CCL4和CXCL10组成的组的有效负载。
41.如权利要求38所述的重组HSV，其中所述异源多核苷酸序列编码三种包括IL-12、CCL4和CXCL10的有效负载。
42.一种重组溶瘤病毒，所述重组溶瘤病毒包含插入病毒复制所需的一种或多种病毒基因的基因座中的一个或多个微小RNA(miR)靶序列，其中所述病毒是单纯疱疹病毒(HSV)，并且其中所述一种或多种病毒基因选自由以下组成的组：UL8、ICP34.5、UL42、UL19、ICP4和ICP27。
43.如权利要求42所述的溶瘤病毒，其中所述一个或多个miR靶序列被并入病毒复制所需的所述一种或多种病毒基因的5'非翻译区(UTR)或3'UTR中。
44.如权利要求42或43所述的溶瘤病毒，其中所述miR靶序列是选自由以下组成的组的miR的靶序列：miR-122、miR-184、miR-34a、let7a、miR-145-5p、miR-199a-5p、miR-451a、miR-125a、miR-125a-5p、miR-126-3p、miR-233-3p、miR-143-3p、miR-1-3p、miR-133a-3p、miR-127a-3p、miR-133b、miR-134-3p、miR-124、miR-101、miR-125b、miR-145、miR-559、miR-213、miR-31-5p和miR-205p。
45.如权利要求42-44中任一项所述的溶瘤病毒，其中所述一个或多个miR靶序列的一个或多个拷贝被插入一种或多种病毒基因的基因座中。
46.如权利要求45所述的溶瘤病毒，其中所述一个或多个miR靶序列的两个、三个、四个或更多个拷贝被插入一种或多种病毒基因的基因座中。
47.如权利要求42-46中任一项所述的溶瘤病毒，其中与第二细胞中所述病毒的复制相比，第一细胞中所述病毒的复制减少或减弱，其中与所述第二细胞中能够结合至所述一个或多个miR靶序列的miR的表达相比，所述第一细胞具有增加的所述miR的表达。
48.如权利要求47所述的溶瘤病毒，其中所述第一细胞中所述miR的表达水平比所述第二细胞中所述miR的表达水平高至少5％。
49.如权利要求47所述的溶瘤病毒，其中所述第一细胞是非癌性细胞。
50.如权利要求47所述的溶瘤病毒，其中与所述第一细胞中能够结合至所述一个或多个miR靶序列的miR的表达相比，所述第二细胞具有降低的所述miR的表达。
51.如权利要求50所述的溶瘤病毒，其中所述第二细胞中所述miR的表达水平比所述第一细胞中所述miR的表达水平低至少5％。
52.如权利要求47所述的溶瘤病毒，其中所述第二细胞是癌性细胞。
53.如权利要求42所述的溶瘤病毒，其中miR-122靶序列的一个拷贝被插入病毒复制所需的一种或多种病毒基因的所述基因座中。
54.如权利要求53所述的溶瘤病毒，其中所述miR-122靶序列的四个拷贝被插入病毒复制所需的一种或多种病毒基因的所述基因座中。
55.如权利要求53或54所述的溶瘤病毒，其中所述一种或多种病毒基因是ICP27。
56.如权利要求53所述的溶瘤病毒，所述溶瘤病毒还包含插入病毒复制所需的一种或多种病毒基因的所述基因座中的miR-125a靶序列的一个拷贝。
57.如权利要求56所述的溶瘤病毒，其中所述miR-125a靶序列的四个拷贝被插入病毒复制所需的一种或多种病毒基因的所述基因座中。
58.如权利要求56或58所述的溶瘤病毒，其中所述一种或多种病毒基因是UL42。
59.如权利要求42-52中任一项所述的溶瘤病毒，其中miR-122靶序列的四个拷贝被插入ICP27的所述基因座中，并且miR-125a靶序列的一个拷贝被插入UL42的所述基因座中。
60.如权利要求42-52中任一项所述的溶瘤病毒，其中miR-122靶序列的一个拷贝被插入ICP27的所述基因座中，并且miR-125a靶序列的一个拷贝被插入UL42的所述基因座中。
61.如权利要求42-52中任一项所述的溶瘤病毒，其中miR-122靶序列的一个拷贝被插...
【专利技术属性】
技术研发人员：米切尔·H·菲尼尔，洛伦娜·勒纳，克里斯托夫·奎瓦，爱德华·肯尼迪，
申请(专利权)人：昂克诺斯公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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