一种葛根多糖提取物的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种葛根多糖提取物的制备方法，先将葛根药材粉碎成丝状，用冷水揉洗后过滤出丝状葛根，丝状葛根再经水煎煮提取后过滤，滤液浓缩后经吸附剂除杂、脱蛋白、醇沉、离心出沉淀、烘干即得含量达40％以上的葛根多糖提取物。本发明专利技术的提取纯化方法操作简单、便捷，葛根多糖收率高。

A preparation method of Pueraria polysaccharide extract

【技术实现步骤摘要】
一种葛根多糖提取物的制备方法
本专利技术涉及一种提取物的制备方法，具体涉及一种葛根多糖提取物的制备方法，属于中药提取物制备领域。
技术介绍
葛根是豆科属(Pueraria.DC)多年生落叶藤本植物的肥大块根。葛属植物在全球范围内有近18种，主要分布在亚热带和温带地区，我国约有9种和2个变种，集中分布在云南及其邻近省区。葛根的主要成分为葛根淀粉、纤维素和异黄酮类化合物。葛根淀粉是葛根的主要成分，新鲜的葛根中含葛根淀粉约20％-25％，葛根淀粉营养独特，是一种药食兼优的绿色保健食品。葛根淀粉具有清热解毒、滋补营养、防暑降温、养颜护肤、清除体内垃圾之功效，对风火牙疼、口腔溃疡、咽喉肿痛、热咳、高热、头痛、疤疹、皮肤瘤痒、痔疮、热痢、泄泻、醉酒、前列腺炎等有明显疗效，对预防和治疗高血压、高血脂、冠心病、心绞痛、糖尿病、癌症等有特殊功效。除葛根淀粉而外，国内外目前对葛根提取物的研究主要集中在葛根黄酮、异黄酮这一类有效成分上，对葛根多糖的研究报道较少。传统方法一般采用乙醇为溶剂提取葛根，其提取物的产率在8％以上，醇提取物中黄酮的含量在40％以上，而葛根多糖含量在5％以上，此提取物以黄酮的药理作用为主。多糖类化合物主要是增强人体免疫功能、抵抗衰老、抑制肿瘤、活血抗栓、降低血压、血脂、血糖以及对肝肾等主要脏器的保护作用等。葛根多糖由于独特的生理活性也备受人们青睐，葛根多糖主要用作食品、保健品等，在抗击肿瘤方面有良好的疗效，相关报道显示，葛根多糖对嗜铬细胞瘤细胞PC12的增殖具有损伤作用。目前的葛根多糖的提取方法比较复杂，步骤繁琐，因此成本较高，得到的成品量较少，且容易混入新的杂质，从而限制了批量生产和使用。
技术实现思路
本专利技术提供一种葛根多糖提取物的制备方法，其包括以下步骤：(1)将葛根药材粉碎成丝状后用冷水揉洗，然后过滤出丝状葛根；(2)丝状葛根用水煎煮后过滤，得滤液；(3)滤液浓缩后用吸附剂除杂；(4)Sevag法除蛋白；(5)醇沉，离心出沉淀；(6)沉淀烘干，即得葛根多糖提取物。进一步地：所述步骤(2)中，加水量为所述葛根药材重量的8-10倍，第一次煎煮0.5-1.5h，第2次煎煮0.5-1h；所述步骤(3)中浓缩为浓缩至葛根药材重量的2-3倍，所述吸附剂除杂为：量取浓缩液体积15-30％的吸附剂倒入浓缩后的煎煮液中，搅拌均匀后，放于80-82℃恒温水浴锅中保温40-50min，趁热抽滤后将滤液冷却至室温；所述步骤(4)中sevag法除蛋白为：将所述浓缩液与氯仿、正丁醇按体积比12～20:3～6:0.5～2混合，振荡15-30min，静置后保留水层，重复1-3次，静置后保留水层；所述步骤(5)中醇沉为：向步骤(4)所得水层加入乙醇使其中乙醇质量百分含量达30-40％，搅拌后静置、离心，收集沉淀；上清液再加入乙醇，使其中乙醇质量百分含量达45-55％，搅拌后静置、离心，收集沉淀；上清液继续加入乙醇，使其中乙醇质量百分含量达60-80％，搅拌后静置、离心，收集沉淀；所述步骤(6)为：合并收集的沉淀，烘干即得葛根多糖提取物。在一实施方案中，所述步骤(2)中，加水量为所述葛根药材重量的8倍，第一次煎煮0.5h，第2次煎煮0.5h；所述步骤(3)中，浓缩为浓缩至葛根药材重量的2倍。进一步地，步骤(3)中所述吸附剂选自硅藻土和活性炭中的至少一种。在一实施方案中，步骤(3)中所述吸附剂为硅藻土，其体积取用量为浓缩液体积的20％。在一实施方案中，所述步骤(4)为：将所述浓缩液与氯仿、正丁醇按体积比15:4:1混合，振荡20min，静置后保留水层，重复2次，静置后保留水层。在一实施方案中，所述步骤(4)为：将所述浓缩液与氯仿、正丁醇按体积比15:4:1混合，振荡25min，静置后保留水层，重复1次，静置后保留水层。在一实施方案中，所述步骤(5)为：向步骤(4)所得水层加入乙醇使其中乙醇质量百分含量达30％，搅拌后静置、离心，收集沉淀；上清液再加入乙醇，使其中乙醇质量百分含量达45％，搅拌后静置、离心，收集沉淀；上清液继续加入乙醇，使其中乙醇质量百分含量达70％，搅拌后静置、离心，收集沉淀。在一实施方案中，所述步骤(5)为：向步骤(4)所得水层加入乙醇使其中乙醇质量百分含量达35％，搅拌后静置、离心，收集沉淀；上清液再加入乙醇，使其中乙醇质量百分含量达50％，搅拌后静置、离心，收集沉淀；上清液继续加入乙醇，使其中乙醇质量百分含量达75％，搅拌后静置、离心，收集沉淀。在一实施方案中，所述步骤(5)为：向步骤(4)所得水层加入乙醇使其中乙醇质量百分含量达40％，搅拌后静置、离心，收集沉淀；上清液再加入乙醇，使其中乙醇质量百分含量达55％，搅拌后静置、离心，收集沉淀；上清液继续加入乙醇，使其中乙醇质量百分含量达80％，搅拌后静置、离心，收集沉淀。本专利技术葛根多糖含量采用如下方法测定：采用苯酚－硫酸法绘制葡萄糖标准曲线，以葡萄糖浓度x为横坐标(μg/mL)，光吸收值Y为纵坐标，在490nm处测定葡萄糖和硫酸苯酚溶液反应后的吸光度，拟合回归方程为Y＝0.0088x+0.0071，R2＝0.9980，在0～50μg/mL范围内线性良好。取上述实施例和对比例的葛根多糖的成品0.1g，加水3ml，研磨成匀浆，转入三角烧瓶中，并用12ml的蒸馏水冲洗研钵3次，洗出液转入三角烧瓶中。向三角烧瓶中加入6mol/L盐酸10ml，搅拌均匀后在沸水浴中水解30min，冷却后用10％NaOH溶液中和，pH呈中性。然后用蒸馏水定容至100ml，过滤，取滤液10ml，用蒸馏水定容100ml，稀释成1000倍的总糖水解液。取1ml总糖水解液，测定其还原糖含量：吸取1ml总糖类溶液置于试管中，浸于冰浴中冷却，再加入4ml蒽酮试剂，沸水浴中准确加热10min，取出冷却后比色，测得的吸光度值由标准曲线查算除样品液的糖含量。还原糖质量＝(C1V1/m)×100％总糖＝(C2V2/m)×0.9×100％其中，C1：还原糖的质量浓度(mg/mL)；C2：水解后还原糖的质量浓度(mg/mL)；V1：样品中还原糖提取液的体积(mL)；V2：样品中总糖提取液的体积(mL)；m：样品质量(mg)。本专利技术的有益效果为：(1)本专利技术首先葛根药材粉碎成丝状后用冷水揉洗，有利于预先除掉其水溶性黄酮、蛋白以及单糖等杂质，得到的丝状葛根更有利于葛根多糖的提取，缩短了提取时间，避免了过多杂质被提取出。(2)使用吸附剂进行脱色处理，可显著改善成品多糖的颜色。(3)Sevag法除蛋白，可有效去除多糖中的游离蛋白，避免蛋白过敏体质的人群服用葛根多糖带来的过敏反应，经过专利技术人研究发现，重复一次的除蛋白操作，可以减少多糖的损耗，同时减少蛋白的含量。(4)本专利技术采用的多级梯度醇沉法，实现了葛根多糖的最大范围的提取，从而提高了产量。综上所本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种葛根多糖提取物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：/n(1)将葛根药材粉碎成丝状后用冷水揉洗，然后过滤出丝状葛根；/n(2)丝状葛根用水煎煮后过滤，得滤液；/n(3)滤液浓缩后用吸附剂除杂；/n(4)Sevag法除蛋白；/n(5)醇沉，离心出沉淀；/n(6)沉淀烘干，即得葛根多糖提取物。/n

【技术特征摘要】
1.一种葛根多糖提取物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)将葛根药材粉碎成丝状后用冷水揉洗，然后过滤出丝状葛根；
(2)丝状葛根用水煎煮后过滤，得滤液；
(3)滤液浓缩后用吸附剂除杂；
(4)Sevag法除蛋白；
(5)醇沉，离心出沉淀；
(6)沉淀烘干，即得葛根多糖提取物。


2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：
所述步骤(2)中，加水量为所述葛根药材重量的8-10倍，第一次煎煮0.5-1.5h，第2次煎煮0.5-1h；
所述步骤(3)中浓缩为浓缩至葛根药材重量的2-3倍，所述吸附剂除杂为：量取浓缩液体积15-30％的吸附剂倒入浓缩后的煎煮液中，搅拌均匀后，放于80-82℃恒温水浴锅中保温40-50min，趁热抽滤后将滤液冷却至室温；
所述步骤(4)中sevag法除蛋白为：将所述浓缩液与氯仿、正丁醇按体积比12～20:3～6:0.5～2混合，振荡15-30min，静置后保留水层；重复1-3次，保留水层；
所述步骤(5)中醇沉为：向步骤(4)所得水层加入乙醇使其中乙醇质量百分含量达30-40％，搅拌后静置、离心，收集沉淀；上清液再加入乙醇，使其中乙醇质量百分含量达45-55％，搅拌后静置、离心，收集沉淀；上清液继续加入乙醇，使其中乙醇质量百分含量达60-80％，搅拌后静置、离心，收集沉淀；
所述步骤(6)为：合并收集的沉淀，烘干即得葛根多糖提取物。


3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中，加水量为所述葛根药材重量的8倍，第一次煎煮0.5h，第2次煎煮0.5h；所述步骤(3)中，浓缩为浓缩至葛根药材重量的2倍。


4.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于：步骤(3)中所述吸...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴宪君，谢相林，
申请(专利权)人：四川健腾生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51