免疫受体全长序列的检测方法及应用技术

本发明专利技术提供一种免疫受体全长序列的检测方法，至少包括如下步骤：1）获得免疫受体的全长，所述免疫受体的全长的一端连接有第一接头序列；不同的免疫受体的全长对应的第一接头序列不同；2）将步骤1）得到的序列进行片段化，获得片段化免疫受体；3）利用所述片段化免疫受体建立高通量测序文库；4）利用高通量测序仪对步骤3）获得的高通量测序文库进行高通量双端测序，所述高通量测序仪的读长不大于200bp；5）利用生物信息学拼接高通量测序数据，获得免疫受体全长的序列。本发明专利技术可以高效并且低成本地获得免疫受体的全长序列，基因重排碱基序列以及各种序列的丰度。在鉴定免疫治疗新靶标和开发新型免疫治疗药物领域，具有广阔的应用前景。

Detection method and application of immunoreceptor full-length sequence

【技术实现步骤摘要】
免疫受体全长序列的检测方法及应用
本专利技术涉及生物
，特别是涉及一种免疫受体全长序列的检测方法及应用。
技术介绍
B细胞受体(Bcellreceptor，BCR)是动物体内的B细胞抗原识别决定性表面分子，BCR的重链(heavychain，H)由65～100种可变区(VH)、27种多变区(DH)、6种结合区(JH)和恒定区(CH)四部分基因片段组成；轻链(lightchain，L)由可变区、结合区和恒定区三部分基因片段组成。B淋巴细胞发育成熟过程中，通过V(D)J基因组合、连接多样性，以及体细胞高频突变、基因转换和类别转换等途径形成数量庞大且种类多样的B细胞受体(BCR)文库，其多样性可以多达1014种。BCR包含重链和轻链，人的BCR全长序列长度在700bp以上，获得全长序列能够帮助我们理解BCR的种类，丰度，来源等关键信息，用于评价各种免疫相关疾病和遗传性突变引起的某个物种所有B细胞或特定B细胞激活介导的细胞免疫反应中BCR基因重排碱基序列，以及各序列的丰度，用于研究不同B细胞克隆的转录情况和相互间关系，从而揭示更深层次的B细胞功能本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种免疫受体全长序列的检测方法，至少包括如下步骤：/n1)获得免疫受体的全长，所述免疫受体的全长的一端连接有第一接头序列；不同的免疫受体的全长对应的第一接头序列不同；/n2)将步骤1)得到的序列进行片段化，获得片段化免疫受体；/n3)利用所述片段化免疫受体建立高通量测序文库；/n4)利用高通量测序仪对步骤3)获得的高通量测序文库进行高通量双端测序，所述高通量测序仪的读长不大于200bp；/n5)利用生物信息学拼接高通量测序数据，获得免疫受体全长的序列。/n

【技术特征摘要】
1.一种免疫受体全长序列的检测方法，至少包括如下步骤：
1)获得免疫受体的全长，所述免疫受体的全长的一端连接有第一接头序列；不同的免疫受体的全长对应的第一接头序列不同；
2)将步骤1)得到的序列进行片段化，获得片段化免疫受体；
3)利用所述片段化免疫受体建立高通量测序文库；
4)利用高通量测序仪对步骤3)获得的高通量测序文库进行高通量双端测序，所述高通量测序仪的读长不大于200bp；
5)利用生物信息学拼接高通量测序数据，获得免疫受体全长的序列。


2.如权利要求1所述的免疫受体全长序列的检测方法，其特征在于，所述免疫受体选自BCR或TCR。


3.如权利要求1所述的免疫受体全长序列的检测方法，其特征在于，还包括以下特征中的一项或多项：
a)所述免疫受体全长的待测样本来源为人的RNA样本；
b)所述第一接头序列包括UMI片段，所述第一接头序列包括UMI片段，不同的免疫受体对应的UMI片段不同；
c)步骤1)中，利用多重PCR反应引物对待测样本的DNA进行多重PCR扩增，获得免疫受体全长。


4.如权利要求3所述的免疫受体全长序列的检测方法，其特征在于，还包括以下特征中的一项或多项：
e)所述第一接头序列的核苷酸序列如SEQIDNO：1所示；
f)多重PCR反应引物包括上游引物和下游引物，所述上游引物的核苷酸序列如SEQIDNO：2所示，下游引物由第一引物组和第二引物组构成，所述第一引物组包括的核苷酸序列如SEQIDNO：3-8所示，所述第二引物组包括的核苷酸序列如SEQIDNO：9-13所示。


5.如权利要求1所述的免疫受体全长序列的检测方法，其特征在于，步骤3)中，建立高通量测序文库的方法为：
31)给所述片段化免疫受体装载第二接头和标签，同时进行扩增；
32)利用PCR富集引物进行富集，获得高通量测序文库。


6.如权利要求5所述的免疫受体全长序列的检测方法，其特征在于，步骤1)中，利用...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖腾飞，杨冠骅，刘慧珠，陈垚文，
申请(专利权)人：上海寻百会生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31