促进脐带间充质干细胞向成软骨定向分化的方法技术

本发明专利技术提供了一种促进脐带间充质干细胞向成软骨定向分化的方法，其包括以下步骤：取出脐带组织并剪碎清洗，加入组织消化液消化，消化终止后过滤移去上清，得到脐带间充质干细胞；用脐带间充质干细胞选择性培养基培养所述脐带间充质干细胞；待细胞达到80‑90％汇合度时，用低毒性消化液消化细胞，然后用脐带间充质干细胞冻存液进行冻存，放置于液氮中；从液氮中去除细胞，在37℃水浴锅中快速解冻，离心去上清，加入细胞复苏液对细胞进行复苏；移去复苏液，更换诱导前激动液培养；待细胞长至80‑90％汇合度时，用所述低毒性消化液消化细胞；接种细胞，培养过夜，移去上清，加入成软骨诱导培养基，以2％氧气浓度的低氧培养箱中培养。与现有技术相比，本发明专利技术的方法能够以较短诱导时间稳定、有效地促进脐带间充质干细胞向成软骨定向分化。

The method of promoting the differentiation of umbilical cord mesenchymal stem cells into chondrogenic cells

【技术实现步骤摘要】
促进脐带间充质干细胞向成软骨定向分化的方法
本专利技术属于干细胞与再生医学领域，具体涉及一种促进脐带间充质干细胞向成软骨定向分化的方法及培养基。
技术介绍
脐带间充质干细胞具有多向分化能力。间充质干细胞分化效果主要由干细胞自身活性和诱导条件决定的。间充质干细胞软骨发生是个多步骤的细胞事件，先由特殊亚群的间充质干细胞的聚集，进而向软骨分化。常用的脐带间充质干细胞获取方法如下：将华通氏胶剪碎，在完全培养基(10％FBS的DMEM)中贴壁培养16天。常规的冻存方法如下：含10％DMSO完全培养基中程序降温后冻存在液氮中。常规的复苏方法如下：在37℃水浴中快速解冻，用完全培养基培养。常规的成软骨诱导方法如下：细胞种板后添加诱导分化培养基为高糖DMEM加入100μg/ml丙酮酸钠、10ng/mlTGF-β3、100μM地塞米松、25μg/ml维生素C、40μg/ml脯氨酸、1×ITS+1premix，并需要在定的固体介质或成球生长。3天一换液，在37℃细胞培养箱中培养20天。最后用1％甲苯胺蓝染色，软骨组织外基质中的糖胺聚糖能被染成蓝色。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种促进脐带间充质干细胞向成软骨定向分化的方法，其特征在于包括以下步骤：/n(1)取出脐带组织并剪碎清洗，加入组织消化液消化，消化终止后过滤移去上清，得到脐带间充质干细胞；/n(2)用脐带间充质干细胞选择性培养基培养所述脐带间充质干细胞；/n(3)待细胞达到80-90％汇合度时，用低毒性消化液消化细胞，然后用脐带间充质干细胞冻存液进行冻存，放置于液氮中；/n(4)从液氮中取出细胞，在37℃水浴锅中快速解冻，离心去上清，加入细胞复苏液对细胞进行复苏；/n(5)移去复苏液，更换诱导前激动液培养；/n(6)待细胞长至80-90％汇合度时，用所述低毒性消化液消化细胞；/n(7)接种细胞，培养过夜，...

【技术特征摘要】
1.一种促进脐带间充质干细胞向成软骨定向分化的方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)取出脐带组织并剪碎清洗，加入组织消化液消化，消化终止后过滤移去上清，得到脐带间充质干细胞；
(2)用脐带间充质干细胞选择性培养基培养所述脐带间充质干细胞；
(3)待细胞达到80-90％汇合度时，用低毒性消化液消化细胞，然后用脐带间充质干细胞冻存液进行冻存，放置于液氮中；
(4)从液氮中取出细胞，在37℃水浴锅中快速解冻，离心去上清，加入细胞复苏液对细胞进行复苏；
(5)移去复苏液，更换诱导前激动液培养；
(6)待细胞长至80-90％汇合度时，用所述低毒性消化液消化细胞；
(7)接种细胞，培养过夜，移去上清，加入成软骨诱导培养基，以2％氧气浓度的低氧培养箱中培养。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述脐带组织是人脐带组织。


3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述组织消化液包括DMEM、终浓度为3mg/ml的I型胶原酶和终浓度为0.3mg/ml的DNA酶。


4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述脐带组织的重量与所述组织消化液的体积之比为1：1。


5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述脐带间充质干细胞选择性培养基包括：40％汇合度的脐带间充质干细胞使用无血清培养基培养2-3天得到的培养上清离心后过滤得到的产物，与间充质干细胞无血清培养基以1：1的体积混合。


6.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙灿兴，李静静，赵蓝，刘小翠，
申请(专利权)人：广东唯泰生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44