一种软骨祖细胞培养基及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供一种软骨祖细胞培养基，由DMEM培养基、F12培养基、脯氨酸、丙酮酸钠、维生素C、胰岛素生长因子、FGF2、转铁蛋白、ROCK抑制剂、p38抑制剂和GSK‑3α/β抑制剂组成。通过混合各组分，再调节混合物pH和渗透压后灭菌处理制得。本发明专利技术为培养细胞提供足够的营养物质和稳定的生存环境，使其具有优异的自我更新能力。因未使用动物源成分，有效规避因此而造成污染的发生，完全避免诱发免疫反应的发生。培养基制备方法步骤简单、原料易得，不含血清，可保持CPCs的未分化、多能状态，专用于软骨祖细胞培养与扩增。本发明专利技术是一个长久持续高效的CPCs培养系统，使体外稳定繁殖功能性小鼠和人软骨祖细胞成为可能。

A culture medium for chondroprogenitor cells and its preparation and Application

【技术实现步骤摘要】
一种软骨祖细胞培养基及其制备方法和应用
本专利技术属于培养基领域，具体地，涉及一种软骨祖细胞培养基及其制备方法和应用。
技术介绍
透明关节软骨作为滑膜关节的重要组成部分，具有维持骨骼的灵活性和关节的平滑性的功能。成年后，关节软骨细胞作为软骨细胞的一个亚群，缓慢维持着软骨组织的稳定。肥大软骨细胞与关节软骨细胞不同，其存在于生长板中，其功能是骨形成过程中产生新的软骨。为了治疗退行性关节疾病，用体外产生的细胞或组织替代关节软骨细胞或关节软骨为目前的主要治疗选择——全关节置换提供了一个全新的可选方案。而对于不同的细胞治疗而言，确保干细胞或祖细胞的良好来源是解决这一问题的关键。迄今为止，针对退行性关节疾病的组织工程解决方案的研究主要集中在成熟的关节软骨细胞、间充质干细胞和多能干细胞(PSCs)，软骨祖细胞(CPC)的相关研究较少。PSCs为软骨细胞的产生提供了一个有吸引力的细胞来源。胚胎干细胞(ESCs)已经在诸多文献中证明可以通过生长因子的调控，先向中胚层细胞分化，进而分化为软骨细胞分。然而，这些分化方案所产生的软骨细胞样细胞数量非常少需要进一本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种软骨祖细胞培养基，其特征在于，所述培养基由DMEM培养基、F12培养基、脯氨酸、丙酮酸钠、维生素C、胰岛素生长因子、碱性成纤维细胞生长因子2(FGF2)、转铁蛋白、ROCK抑制剂、p38抑制剂和GSK-3α/β抑制剂组成，其中DMEM培养基与F12培养基的体积比为1：0.5-2。/n

【技术特征摘要】
1.一种软骨祖细胞培养基，其特征在于，所述培养基由DMEM培养基、F12培养基、脯氨酸、丙酮酸钠、维生素C、胰岛素生长因子、碱性成纤维细胞生长因子2(FGF2)、转铁蛋白、ROCK抑制剂、p38抑制剂和GSK-3α/β抑制剂组成，其中DMEM培养基与F12培养基的体积比为1：0.5-2。


2.根据权利要求1所述的一种软骨祖细胞培养基，其特征在于，以所述培养基的总体积为基准，所述培养基维生素C的浓度为50-200μg/mL，所述胰岛素生长因子的浓度为1-150ng/mL，所述FGF2的浓度为1-150ng/mL，所述GSK-3α/β抑制剂的浓度为1-30uM，所述转铁蛋白的浓度为5-100μg/mL，所述ROCK抑制剂的浓度为1-50uM，所述p38抑制剂的浓度为1-20uM，所述脯氨酸的浓度为0-10mM，所述丙酮酸钠的浓度为1-15mM。


3.根据权利要求1或2所述的一种软骨祖细胞培养基的制备方法，替特征在于，通过以下步骤实现：
(1)将DMEM培养基、F12培养基、脯氨酸、丙酮酸钠、维生素C、胰岛素生长因子、碱性成纤维细胞生长因子2、转铁蛋白、ROCK抑制剂、GS...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁成振，夏楷顺，李中伟，李荣辉，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33