一种脂肪组织的单细胞悬液的制备方法技术

本发明专利技术涉及细胞技术领域，特别涉及一种脂肪组织的单细胞悬液的制备方法。本发明专利技术将中性蛋白酶、胶原蛋白酶I、胶原蛋白酶II、胶原蛋白酶Ⅳ、胰蛋白酶和DNAse六种酶组合，对脂肪组织进行酶解用于制备单细胞悬液。该方法步骤简单，获得的细胞数量多，细胞活率高，其中，活细胞总数为9.13×10

A preparation method of fat tissue single cell suspension

【技术实现步骤摘要】
一种脂肪组织的单细胞悬液的制备方法
本专利技术涉及细胞
，尤其涉及一种脂肪组织的单细胞悬液的制备方法。
技术介绍
随着高通量测序技术的迅猛发展和普及，走在生命科学前沿的研究者们几乎都在谈论Single-CellSequencing对于整个生命科学研究的意义以及价值。单细胞转录组测序一个非常重要的研究方向就是单细胞分辨率下重新定义细胞类型，挖掘得到新的细胞亚群和marker基因。基于10xGenomics平台最新的ChromiumSingleCell3'系统，可快速进行单细胞的标记、测序和分析，高效获得多达10000个细胞的单细胞水平数字化基因表达谱，实现对复杂细胞群体深入分析，完美攻克了测序样本稀少、细胞异质性等难题，而到广泛应用。单细胞测序的主要应用领域为人类医学、神经生物学、遗传生殖、干细胞等研究领域，涉及到的主要样品类型十分广泛，但根据其来源，可分为如下几个大类：1)肿瘤组织，如脑肿瘤、肝癌、胃癌、乳腺癌等；2)实体组织来源的原代分离细胞，如脂肪细胞、脑神经元、肠道组织来源的上皮及干性细胞等；3)血液来源的某些细胞亚群(一般本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种脂肪组织的单细胞悬液的制备方法，其特征在于，包括：/n步骤1：取脂肪组织，以复合酶解液酶解；/n步骤2：将所述酶解后的产物过滤，离心，取细胞沉淀清洗后加红细胞裂解液裂解；/n步骤3：将所述裂解后的产物离心，取细胞沉淀清洗、重悬，获得单细胞悬液；/n所述复合酶解液含有中性蛋白酶、胶原蛋白酶I、胶原蛋白酶II、胶原蛋白酶Ⅳ、胰蛋白酶和DNAse。/n

【技术特征摘要】
1.一种脂肪组织的单细胞悬液的制备方法，其特征在于，包括：
步骤1：取脂肪组织，以复合酶解液酶解；
步骤2：将所述酶解后的产物过滤，离心，取细胞沉淀清洗后加红细胞裂解液裂解；
步骤3：将所述裂解后的产物离心，取细胞沉淀清洗、重悬，获得单细胞悬液；
所述复合酶解液含有中性蛋白酶、胶原蛋白酶I、胶原蛋白酶II、胶原蛋白酶Ⅳ、胰蛋白酶和DNAse。


2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1中，所述复合酶中，胶原蛋白酶I的工作浓度为200-400u/mL或1.0～2.0mg/mL；胶原蛋白酶II的工作浓度为100-200u/mL或0.5～1.0mg/mL；胶原蛋白酶IV的工作浓度为50-200u/mL或0.25～1.0mg/mL；中性蛋白酶的工作浓度为0.25～0.5mg/mL；胰蛋白酶的工作浓度为0.25～0.5mg/mL；DNAse的工作浓度为5-20u/mL或0.01～0.02mg/mL。


3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1中，所述复合酶解液的溶媒为基础培养基或PBS缓冲液。


4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1中，所述复合酶解液中，复合酶的浓度为0.5～5mg/ml。


5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1中，所述脂肪组织与复合酶...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈东煌，陈海佳，葛啸虎，姜交华，
申请(专利权)人：广东国科细胞科技有限公司，广东省康琪莱精准医疗研究院，
类型：发明
国别省市：广东;44