胚胎干细胞培养基及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种胚胎干细胞培养基及其制备方法和应用，所述培养基包含基础培养基和如下用量的添加剂组分：1μg/L～50μg/L亚硒酸钠、100μM～400μM乙二胺四乙酸铁、5μg/L～100μg/L重组人碱性成纤维细胞生长因子、1nM～50nM类胰岛素一号生长因子、1mg/L～10mg/L还原型谷胱甘肽、1mg/L～100mg/L抗坏血酸、1μg/L～20μg/L重组人转化生长因子β1、0.1ng/mL～5ng/mL重组人调节蛋白β

【技术实现步骤摘要】
胚胎干细胞培养基及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及细胞培养
，特别涉及一种胚胎干细胞培养基及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]胚胎干细胞(ESCs)具有无限自我更新、多能性蛋白表达、高端粒酶活性，以及向三胚层分化的能力。ESCs在疾病建模和药物筛选等方面具有广泛的应用前景。然而，体外培养胚胎干细胞的过程中，常常面临着细胞分化、异质化等问题。因此，如何维持胚胎干细胞的多能性成为急需解决的问题。

技术实现思路

[0003]基于上述
技术介绍
，本专利技术的主要目的是提供一种胚胎干细胞培养基及其制备方法和应用。采用本专利技术的胚胎干细胞培养基培养胚胎干细胞，能够有效维持胚胎干细胞的多能性。
[0004]本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：
[0005]一种组合物，所述组合物包含N
‑
草酰甘氨酸、重组人调节蛋白β
‑
1和己糖激酶。
[0006]在其中一个实施例中，所述的N
‑
草酰甘氨酸、重组人调节蛋白β
‑
1和己糖激酶的摩尔用量比为(0.1～10)：(1.333
×
10
‑5～6.667
×
10
‑4)：(1
×
10
‑3～100
×
10
‑3)。
[0007]在其中一个实施例中，所述的N
‑
草酰甘氨酸、重组人调节蛋白β
‑
1和己糖激酶的摩尔用量比为(1～10)：(1.333
×
10
‑4～6.667
×
10
‑4)：(10
×
10
‑3～100
×
10
‑3)。
[0008]一种胚胎干细胞培养基，所述胚胎干细胞培养基包含所述的组合物，还包含以下培养基组分：基础培养基、亚硒酸钠、乙二胺四乙酸铁、重组人碱性成纤维细胞生长因子、类胰岛素一号生长因子、还原型谷胱甘肽、抗坏血酸和重组人转化生长因子β1。
[0009]在其中一个实施例中，所述胚胎干细胞培养基包含0.1μM～10μM所述N
‑
草酰甘氨酸、13.33pM～666.7pM所述重组人调节蛋白β
‑
1和1nM～100nM所述己糖激酶。
[0010]在其中一个实施例中，所述胚胎干细胞培养基包含1μM～10μM所述N
‑
草酰甘氨酸、133.3pM～666.7pM所述重组人调节蛋白β
‑
1和10nM～100nM所述己糖激酶。
[0011]在其中一个实施例中，所述培养基包含基础培养基、1μg/L～50μg/L亚硒酸钠、100μM～400μM乙二胺四乙酸铁、5μg/L～100μg/L重组人碱性成纤维细胞生长因子、1nM～50nM类胰岛素一号生长因子、1mg/L～10mg/L还原型谷胱甘肽、1mg/L～100mg/L抗坏血酸、1μg/L～20μg/L重组人转化生长因子β1、13.33pM～666.7pM重组人调节蛋白β
‑
1、1nM～100nM己糖激酶和0.1μM～10μM N
‑
草酰甘氨酸。
[0012]在其中一个实施例中，所述培养基包含基础培养基和如下用量的添加剂组分：1μg/L～50μg/L亚硒酸钠、100μM～400μM乙二胺四乙酸铁、5μg/L～100μg/L重组人碱性成纤维细胞生长因子、1nM～50nM类胰岛素一号生长因子、1mg/L～10mg/L还原型谷胱甘肽、1mg/L～100mg/L抗坏血酸、1μg/L～20μg/L重组人转化生长因子β1、133.3pM～666.7pM重组人调
节蛋白β
‑
1、10nM～100nM己糖激酶和1μM～10μM N
‑
草酰甘氨酸。
[0013]在其中一个实施例中，所述培养基包含基础培养基和如下用量的添加剂组分：20μg/L～40μg/L亚硒酸钠、250μM～350μM乙二胺四乙酸铁、30μg/L～50μg/L重组人碱性成纤维细胞生长因子、5nM～20nM类胰岛素一号生长因子、1mg/L～5mg/L还原型谷胱甘肽、50mg/L～70mg/L抗坏血酸、1μg/L～5μg/L重组人转化生长因子β1、133.3pM～666.7pM重组人调节蛋白β
‑
1、10nM～100nM己糖激酶和1μM～10μM N
‑
草酰甘氨酸。
[0014]在其中一个实施例中，所述基础培养基为DMEM/F12基础培养基。
[0015]如上所述的胚胎干细胞培养基的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：混合所述培养基组分和所述组合物。
[0016]一种胚胎干细胞的培养方法，所述培养方法包括将胚胎干细胞接种于胚胎干细胞培养基中培养的步骤，所述胚胎干细胞培养基为如上所述的胚胎干细胞培养基。
[0017]在其中一个实施例中，所述培养方法还包括：培养的过程中更换新鲜的所述胚胎干细胞培养基。
[0018]在其中一个实施例中，所述培养方法还包括：培养的过程中采用传代培养试剂进行传代培养。
[0019]在其中一个实施例中，每培养4d～6d采用所述传代培养试剂进行传代培养。
[0020]在其中一个实施例中，所述胚胎干细胞为huES(H9)细胞。
[0021]在其中一个实施例中，所述胚胎干细胞为培养至第25代～35代的胚胎干细胞。
[0022]与现有技术相比，本专利技术具备如下有益效果：
[0023]本专利技术将己糖激酶、N
‑
草酰甘氨酸、重组人调节蛋白β
‑
1三种组分与亚硒酸钠、乙二胺四乙酸铁、重组人碱性成纤维细胞生长因子、类胰岛素一号生长因子、还原型谷胱甘肽、抗坏血酸和重组人转化生长因子β1搭配作为添加剂组分，添加至基础培养基，形成特定配方的胚胎干细胞培养基，采用该胚胎干细胞培养基培养胚胎干细胞，能够有效维持胚胎干细胞的多能性。并且，专利技术人还发现，采用该胚胎干细胞培养基培养胚胎干细胞，还能明显提升胚胎干细胞的扩增倍数，胚胎干细胞存活率也较高。同时，本专利技术的胚胎干细胞培养基是无血清培养基，添加剂成分明确，无动物源成分，避免血清对细胞的毒性作用和血清源性污染。
附图说明
[0024]为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0025]图1为第42代huES(H9)细胞形态图；
[0026]图2为第42代huES(H9)细胞扩增倍数；
[0027]图3为第42代huES(H9)细胞细胞活率；
[0028]图4为第42代huES(H9)细胞Oct4基因表达图本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种组合物，其特征在于，所述组合物包含N
‑
草酰甘氨酸、重组人调节蛋白β
‑
1和己糖激酶。2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述的N
‑
草酰甘氨酸、重组人调节蛋白β
‑
1和己糖激酶的摩尔用量比为(0.1～10)：(1.333
×
10
‑5～6.667
×
10
‑4)：(1
×
10
‑3～100
×
10
‑3)；优选地，所述的N
‑
草酰甘氨酸、重组人调节蛋白β
‑
1和己糖激酶的摩尔用量比为(1～10)：(1.333
×
10
‑4～6.667
×
10
‑4)：(10
×
10
‑3～100
×
10
‑3)。3.一种胚胎干细胞培养基，其特征在于，所述胚胎干细胞培养基包含权利要求1至2任一项所述的组合物，还包含以下培养基组分：基础培养基、亚硒酸钠、乙二胺四乙酸铁、重组人碱性成纤维细胞生长因子、类胰岛素一号生长因子、还原型谷胱甘肽、抗坏血酸和重组人转化生长因子β1；优选地，所述胚胎干细胞培养基包含0.1μM～10μM所述N
‑
草酰甘氨酸、13.33pM～666.7pM所述重组人调节蛋白β
‑
1和1nM～100nM所述己糖激酶；进一步优选地，所述胚胎干细胞培养基包含1μM～10μM所述N
‑
草酰甘氨酸、133.3pM～666.7pM所述重组人调节蛋白β
‑
1和10nM～100nM所述己糖激酶。4.根据权利要求3所述的胚胎干细胞培养基，其特征在于，所述胚胎干细胞培养基包含基础培养基、1μg/L～50μg/L亚硒酸钠、100μM～400μM乙二胺四乙酸铁、5μg/L～100μg/L重组人碱性成纤维细胞生长因子、1nM～50nM类胰岛素一号生长因子、1mg/L～10mg/L还原型谷胱甘肽、1mg/L～100mg/L抗坏血酸、1μg/L～2...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈东煌，陈海佳，姜交华，张兆清，李学家，王悦萌，
申请(专利权)人：广东国科细胞科技有限公司，
类型：发明
国别省市：