本发明专利技术涉及一种组合物及含有其的干细胞培养基及应用。本发明专利技术提供的将激活素A和维生素B1搭配，并进一步与适量的抗坏血酸倍半镁盐搭配，形成特定的组合物，将该组合物与碳酸氢钠、亚硒酸钠等一起添加至基础培养基，从而形成特定配方的无血清、无饲养层的干细胞培养基，采用该干细胞培养基培养胚胎干细胞，能够很好地维持胚胎干细胞的多能性。并且，采用本发明专利技术的干细胞培养基培养干细胞特别是胚胎干细胞的过程中，细胞增殖快、活率高，细胞多能性维持效果好。维持效果好。维持效果好。
【技术实现步骤摘要】
L
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谷氨酰胺、10μM～500μM非必需氨基酸、0.1mg/mL～12.96mg/mL植物源重组人血清白蛋白、0.1mL/L～10mL/L CD lipids、0.5ng/mL～15ng/mL激活素A、2μg/mL～10μg/mL维生素B1以及基础培养基。
[0014]在其中一个实施例中，所述干细胞培养基包含100mg/L～1000mg/L碳酸氢钠、1μg/L～50μg/L亚硒酸钠、50μM～200μM乙二胺四乙酸铁、5μg/L～100μg/L重组人碱性成纤维细胞生长因子、1μg/L～20μg/L硫酸锌、80mg/L～115mg/L抗坏血酸倍半镁盐、100μM～1000μM L
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谷氨酰胺、10μM～500μM非必需氨基酸、0.1mg/mL～12.96mg/mL植物源重组人血清白蛋白、0.1mL/L～10mL/L CD lipids、4ng/mL～6ng/mL激活素A、6μg/mL～8μg/mL维生素B1以及基础培养基。
[0015]在其中一个实施例中，所述干细胞培养基包含400mg/L～600mg/L碳酸氢钠、15μg/L～30μg/L亚硒酸钠、80μM～130μM乙二胺四乙酸铁、30μg/L～50μg/L重组人碱性成纤维细胞生长因子、2μg/L～5μg/L硫酸锌、80mg/L～115mg/L抗坏血酸倍半镁盐、350μM～450μM L
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谷氨酰胺、50μM～150μM非必需氨基酸、1mg/mL～5mg/mL植物源重组人血清白蛋白、1.6mL/L～2.5mL/L CD lipids、4ng/mL～6ng/mL激活素A、6μg/mL～8μg/mL维生素B1以及基础培养基。
[0016]在其中一个实施例中，所述基础培养基为DMEM/F12基础培养基。
[0017]在其中一个实施例中，所述植物源重组人血清白蛋白为经过脱毒处理的植物源重组人血清白蛋白。
[0018]一种干细胞的培养方法，所述培养方法包括采用干细胞培养基培养干细胞的步骤；所述干细胞培养基添加有如上所述的组合物，或者所述干细胞培养基选用如上所述的干细胞培养基。
[0019]在其中一个实施例中，培养为原代培养或/和传代培养。
[0020]在其中一个实施例中，所述干细胞为胚胎干细胞或者诱导多能干细胞。
[0021]与现有技术相比，本专利技术具有如下技术效果：
[0022]本专利技术提供的将激活素A和维生素B1搭配，并进一步与适量的抗坏血酸倍半镁盐搭配，形成特定的组合物，将该组合物与碳酸氢钠、亚硒酸钠等一起添加至基础培养基，从而形成特定配方的无血清、无饲养层的干细胞培养基，采用该干细胞培养基培养胚胎干细胞，能够很好地维持胚胎干细胞的多能性。并且，采用本专利技术的干细胞培养基培养干细胞特别是胚胎干细胞的过程中，细胞增殖快、活率高，细胞多能性维持效果好。同时，本专利技术培养基成分稳定，以无机盐和维生素类为主要添加成分，细胞因子使用浓度低，且采用低浓度植物源重组白蛋白对细胞因子具有一定保护作用，避免使用过程中效价降低造成的培养基性能下降；本专利技术提供的培养基没有引入动物源成分、成分简单明确，易于配制，批次间的稳定性可以得到有效保证，且成本低。
附图说明
[0023]图1为分别采用实施例及对比例提供的干细胞培养基培养得到的第48代胚胎干细胞的形态图像；
[0024]图2为分别采用实施例及对比例提供的干细胞培养基培养得到的胚胎干细胞的多能性基因Oct4的相对表达量统计图；
[0025]图3为分别采用实施例及对比例提供的干细胞培养基培养得到的胚胎干细胞的多能性基因Sox2的相对表达量统计图；
[0026]图4为分别采用实施例及对比例提供的干细胞培养基培养得到的胚胎干细胞的多能性基因Nanog的相对表达量统计图。
具体实施方式
[0027]为了便于理解本专利技术，下面将对本专利技术进行更详细的描述。但是，应当理解，本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施方式或实施例。相反地，提供这些实施方式或实施例的目的是使对本专利技术的公开内容的理解更加透彻全面。
[0028]除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施方式或实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术。本文所使用的术语“和/或”的可选范围包括两个或两个以上相关所列项目中任一个，也包括相关所列项目的任意的和所有的组合，所述任意的和所有的组合包括任意的两个相关所列项目、任意的更多个相关所列项目、或者全部相关所列项目的组合。第一方面，本专利技术提供一种组合物，所述组合物包含激活素A和维生素B1。
[0029]在其中一个示例中，所述激活素A与所述维生素B1的质量比为(0.5～15)
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‑3：(2～10)。
[0030]在其中一个示例中，所述激活素A和所述维生素B1的质量比为(4～6)
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‑3：(6～8)。
[0031]在其中一个示例中，所述组合物还包括抗坏血酸倍半镁盐。优选地，所述激活素A、所述维生素B1和所述抗坏血酸倍半镁盐的质量比为(0.5～15)
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‑3：(2～10)：(1～200)。更优选地，所述激活素A、所述维生素B1和所述抗坏血酸倍半镁盐的质量比为(4～6)
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‑3：(6～8)：(80～115)。
[0032]第二方面，本专利技术提供一种无血清、无饲养层的干细胞培养基，所述干细胞培养基包含如上所述的组合物，还包含碳酸氢钠、亚硒酸钠、乙二胺四乙酸铁、重组人碱性成纤维细胞生长因子、硫酸锌、L
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谷氨酰胺、非必需氨基酸、植物源重组人血清白蛋白、CD lipids以及基础培养基。
[0033]本专利技术提供的干细胞培养基可以是一种稳定的无血清、无饲养层含低浓度脱毒植物源重组白蛋白的人胚胎干细胞培养基，添加了激活素A(activin A)以及适量的硫胺素(维生素B1)。硫胺素是一种酶的辅助因子，参与细胞基本的能量代谢，同时硫胺素在降低氧化应激、蛋白质加工、过氧化物酶体功能、钙储存控制和基因表达等方面发挥相关作用。Activin A作为TGF
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β超家族的重要成员，可以有效诱导OCT4、Nanog、Nodal、Wnt3和FGF2的表达，抑制BMP信号，进而维持胚胎干细胞的多能性。avtivin A和硫胺素组合应用于多能干无血清培养基中，可以更好的稳定维持胚胎干细胞的多能性。
[0034]本专利技术可以解决胚胎干细胞/诱导多能干细胞培养基的高成本、产品不稳定、容易引入动物源成分等问题，本专利技术提供一种无血清、无饲养层的含低浓度脱毒植物源重组白蛋白的人胚胎干细胞培养基，添加的activin A和硫胺素可以更好的维持胚胎干细胞的多能性。该培养基成分明确、无动物源，引入的植物源重组白蛋白经过脱毒处理，能够实现
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【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种组合物，其特征在于，所述组合物包含激活素A和维生素B1。2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述激活素A与所述维生素B1的质量比为(0.5～15)
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‑3：(2～10)；优选地，所述激活素A和所述维生素B1的质量比为(4～6)
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‑3：(6～8)。3.根据权利要求1或者2所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包括抗坏血酸倍半镁盐；优选地，所述激活素A、所述维生素B1和所述抗坏血酸倍半镁盐的质量比为(0.5～15)
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‑3：(2～10)：(1～200)；更优选地，所述激活素A、所述维生素B1和所述抗坏血酸倍半镁盐的质量比为(4～6)
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‑3：(6～8)：(80～115)。4.一种无血清、无饲养层的干细胞培养基，其特征在于，所述干细胞培养基包含权利要求1至3任一项所述的组合物，还包含碳酸氢钠、亚硒酸钠、乙二胺四乙酸铁、重组人碱性成纤维细胞生长因子、硫酸锌、L
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谷氨酰胺、非必需氨基酸、植物源重组人血清白蛋白、CD lipids以及基础培养基；优选地，所述激活素A浓度为0.5ng/mL～15ng/mL，所述维生素B1浓度为2μg/mL～10μg/mL；更优选地，所述抗坏血酸倍半镁盐的浓度为1mg/L～200mg/L。5.根据权利要求4所述的无血清、无饲养层的干细胞培养基，其特征在于，所述干细胞培养基包含100mg/L～1000mg/L碳酸氢钠、1μg/L～50μg/L亚硒酸钠、50μM～200μM乙二胺四乙酸铁、5μg/L～100μg/L重组人碱性成纤维细胞生长因子、1μg/L～20μg/L硫酸锌、1mg/L～200mg/L抗坏血酸倍半镁盐、100μM～1000μM L
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谷氨酰胺、10μM～500μM非必需氨基酸、0.1mg/mL～12.96mg/mL植物源重组人血清白蛋白、0.1mL/L～10mL/LCD lipids、0.5ng/mL～15ng/mL激活素A、2μg/mL～10μg/mL维...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈东煌，陈海佳，姜交华，张兆清，李学家，
申请(专利权)人：广东国科细胞科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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