一种DF-1细胞的微载体悬浮培养方法及应用技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种DF‑1细胞的微载体悬浮培养方法及应用，本发明专利技术通过优化DF‑1细胞微载体悬浮培养接种和培养工艺，建立了DF‑1细胞的悬浮培养方法，可实现DF‑1细胞的大规模增殖，该方法兼具平板培养和悬浮培养的优点，使得细胞处于相对均一的环境，温度、pH、CO2等培养条件可控，较传统的单层细胞培养，大大增加了细胞贴壁的表面积，便于控制放大和高密度细胞培养，可获得比原来多20～50倍的高密度细胞，同时降低劳动强度和生产成本，相比与传统培养具有明显优势。

A suspension culture method of DF-1 cells with microcarriers and its application

【技术实现步骤摘要】
一种DF-1细胞的微载体悬浮培养方法及应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一种DF-1细胞的微载体悬浮培养方法及应用。
技术介绍
DF-1细胞系来源于10日龄的ELL-0(来航)鸡胚成纤维细胞(CEF)，是一株成熟的传代细胞系，表现为典型的成纤维细胞形态，能形成明显的细胞病变现象。该细胞系最早于1998年美国明尼苏达大学的DouglasFoster博士改良而成(Himlyetal.,1998)。DF-1细胞有很强的增殖能力，其细胞的密度能够达到鸡胚成纤维细胞(CEF)的4倍以上，该细胞属于逆转录酶阴性、非致瘤性细胞，经美国食品与药物管理局(FDA)授权该细胞已成为全球化商业细胞系。当前，DF-1细胞广泛应用于重组蛋白表达、禽类病毒增殖、重组蛋白表达、肿瘤病毒研究及人类和动物疫苗的生产。现在，DF-1细胞系在实验检测和病毒培养中已经得到了一定程度的应用，许多研究结果表明，DF-1细胞能够适应多种禽类病毒的增殖，并且有明显的细胞病变现象。目前培养DF-1细胞的方法主要是采取传统转瓶或细胞工厂的培养方式，此种培养方式具有如下缺陷：(1)培养数量本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种DF-1细胞的微载体悬浮培养方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)将Cytodex1微载体用不含Ca

【技术特征摘要】
1.一种DF-1细胞的微载体悬浮培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将Cytodex1微载体用不含Ca2+和Mg2+的PBS洗涤后高压灭菌，再用含FBS的DMEM/F12培养基浸泡处理，得到灭菌Cytodex1微载体；
(2)将灭菌Cytodex1微载体加入至转瓶中，然后将消化后的DF-1细胞接种至转瓶中，加入细胞培养液，采用搅拌培养的方式于培养箱中进行培养；
(3)每隔一段时间检测培养液中的糖耗，根据糖耗情况进行补糖或换液，使培养液中葡萄糖浓度保持1.0～1.5g/L；
(4)培养至DF-1细胞密度达到最高。


2.根据权利要求1所述的一种DF-1细胞的微载体悬浮培养方法，其特征在于，步骤(2)中DF-1细胞的接种密度为每个微载体接种25～100个细胞。


3.根据权利要求2所述的一种DF-1细胞的微载体悬浮培养方法，其特征在于，步骤(2)中DF-1细胞的接种密度为每个微载体接种50个细胞。


4.根据权利要求1所述的一种DF-1细胞的微载体悬浮培养方法，其特征在于，步骤(2)中转瓶中Cytodex1微载体浓度为1～10g/L。


5.根据权利要求4所述的一种D...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈瑞爱，温良海，李延鹏，张爱国，董楠，叶俊贤，
申请(专利权)人：华农肇庆生物产业技术研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44