沙门氏菌的快速恒温检测方法、引物组及应用技术

本发明专利技术公开了一种针对沙门氏菌的快速恒温检测方法、引物组及试剂盒。所述方法为：从待测样品中提取基因组DNA；以所述基因组DNA为模板，以能扩增沙门氏菌特异性序列的引物组为引物，在酶反应体系下进行恒温扩增反应；通过判断反应结果是否为阳性，确定待测样品中是否存在沙门氏菌。本发明专利技术检测方法具有高灵敏度和高特异性，检测时间短，结果判定简单，操作便捷，成本低，具广泛应用前景。

Rapid and constant temperature detection method, primer set and application of Salmonella

【技术实现步骤摘要】
沙门氏菌的快速恒温检测方法、引物组及应用本申请是2016年8月30日提交的、申请号为201610767608.6、专利技术名称为：“快速恒温检测沙门氏菌的方法、引物及应用”的中国专利技术专利申请的分案申请。
本专利技术属于生物
，具体涉及一种快速恒温检测沙门氏菌的方法、引物及试剂盒。
技术介绍
沙门氏菌(Salmonellaspp.)是一类革兰氏染色阴性杆菌，主要栖息于人和动物的肠道中，由粪便排出体外，并通过被污染的水和食物进一步传播，能引起人胃肠炎、伤寒和副伤寒等症状。近年来，沙门氏菌在全球范围内引起的危害呈不断上升趋势，是公共卫生领域的重要致病菌。因此，对于该菌的检测和预防都具有重要意义。传统沙门氏菌检测方法由于检测周期较长，操作相对复杂，检测效率较低，难以满足现代社会对于食源性致病菌检测过程高通量、高灵敏度、高特异性、快速、便捷的要求。近年来随着核酸分子检测技术的发展，研究人员陆续开发出了PCR和荧光PCR技术的检测手段，但是这两种方法都需要专门的检测仪器，因此，并不适合广泛应用于基层检测部门尤其是企业生产线内部进行本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种针对沙门氏菌的快速恒温检测方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)从待测样品中提取基因组DNA；/n(2)以所述基因组DNA为模板，以能扩增沙门氏菌基因组特异性碱基序列的引物组作为引物，在酶反应体系下进行恒温扩增反应；/n(3)通过判断反应结果是否为阳性，确定待测样品中是否存在沙门氏菌；/n其中，所述沙门氏菌基因组特异性碱基序列为GI号为194447306的沙门氏菌基因组的4188946～4189180bp位序列；/n其中，所述能扩增沙门氏菌基因组特异性碱基序列的引物组选自引物组B或B’；/n引物组B：/n上游外引物F3_B：5’-AAAAACTCGGTTCCATCG-3’(SEQ ...

【技术特征摘要】
1.一种针对沙门氏菌的快速恒温检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)从待测样品中提取基因组DNA；
(2)以所述基因组DNA为模板，以能扩增沙门氏菌基因组特异性碱基序列的引物组作为引物，在酶反应体系下进行恒温扩增反应；
(3)通过判断反应结果是否为阳性，确定待测样品中是否存在沙门氏菌；
其中，所述沙门氏菌基因组特异性碱基序列为GI号为194447306的沙门氏菌基因组的4188946～4189180bp位序列；
其中，所述能扩增沙门氏菌基因组特异性碱基序列的引物组选自引物组B或B’；
引物组B：
上游外引物F3_B：5’-AAAAACTCGGTTCCATCG-3’(SEQIDNO：5)；
下游外引物B3_B：5’-AACACTAACAGCAGTTCG-3’(SEQIDNO：6)；
上游内引物FIP_B：5’-GACTGGTTTTATCCTGTTTGGCGCGTCTATCAAAGGCTTT-3’(SEQIDNO：7)；
下游内引物BIP_B：5’-GCTAAATCTATCGCGGATAAGCAACGGATTATACCTGCTCTT-3’(SEQIDNO：8)；
引物组B’：
上游外引物F3_B：5’-AAAAACTCGGTTCCATCG-3’；
下游外引物B3_B：5’-AACACTAACAGCAGTTCG-3’；
上游内引物FIP_B：5’-GACTGGTTTTATCCTGTTTGGCGCGTCTATCAAAGGCTTT-3’；
下游内引物BIP_B：5’-GCTAAATCTATCGCGGATAAGCAACGGATTATACCTGCTCTT-3’；
下游环引物LB_B：5’-GGCGAAGCGAAAAAGGAAGA-3’(SEQIDNO：10)。


2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述酶反应体系包括：1×BstDNA聚合酶反应缓冲液，2-9mmol/LMg2+，1.0-1.6mmol/LdNTP，0.8-2.0μmol/L的FIP和BIP引物，0.15-0.3μmol/L的F3和B3引物，0.16-0.64U/μLBstDNA聚合酶，0-1.5mol/L的甜菜碱，包括或不包括0.4-1.0μmol/L的LF或LB引物。


3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述恒温扩增反应的反应程序为：①60～65℃孵育10～90min；②80℃终止反应2～20min。


4.用于针对沙门氏菌的快速恒温检测的引物，其特征在于，所述引物包括能扩增沙门氏菌基因组特异性碱基序列的引物组，其序列为GI号为194447306的沙门氏菌基因组的4188946～4189180bp位的核酸序列的一部分或其互补链的一部分；
其中，所述能扩增沙门氏菌基因组特异性碱基序列的引物组选自引物组B或B’；
引物组B：
上游外引物F3_B：5’-AAAAACTCGGTTCCATCG-3’(SEQIDNO：5)；
下游外引物B3_B：5’-AACACTAACAGCAGTTCG-3’(SEQIDNO：6)；
上游内引物FIP_B：5’-GACTGGTTTTATCCTGTTTGGCGCGTCTATCAAAGGCTTT-3’(SEQIDNO：7)；
下游内引物BIP_B：5’-GCTAAATCTATCGCGGATAAGCAACGGATTATACCTGCTCTT-3’(SEQIDNO：8)；
引物组B’：
上游外引物F3_B：5’-AAAAACTCGGTTCCATCG-3’；
下游外引物B3_B：5’-AACACTAACAGCAGTTCG-3’；
上游内引物FIP_B：5’-GACTGGTTTTATCCTGTTTGGCGCGTCTATCAAAGGCTTT-3’；
下游内引物BIP_B：5’-GCTAAATCTATCGCGGATAAGCAACGGATTATACCTGCTCTT-3’；
下游环引物LB_B：5’-GGCGAAGCGAAAAAGGAAGA-3’(SEQIDNO：10)。


5.一种针对沙门氏菌的快速恒温检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括能扩增沙门氏菌基因组特异性碱基序列的引物组；其中，所述能扩增沙门氏菌基因组特异性碱基序列的引物组选自引物组A、A’、B、B’之任意一组；
引物组A：
上游外引物F3_A：5’-AGGCTTTAAAAAGGCCATG-3’(SEQIDNO：1)；
下游外引物B3_A：5’-TAACGAACACTAACAGCAG-3’(SEQIDNO：2)；
上游内引物FIP_A：5’-TTTTCGCTTCGCCTTGCTTAATGCCAAACAGGATAAAACC-3’(SEQIDNO：3)；
下游内引物BIP_A：5’-AGGAAGACGCTAAAAGCCAACGCTAAAACCGATATCAAAC-3’(SEQIDNO：4)；
引物组A’：
上游外引物F3_A：5’-AGGCTTTAAAAAGGCCATG-3’；
下游外引物B3_A：5’-TAACGAACACTAACAGCAG-3’；
上游内引物FIP_...

【专利技术属性】
技术研发人员：李园园，李雪玲，刘伟，韦朝春，贾犇，陆长德，李亦学，
申请(专利权)人：上海生物信息技术研究中心，
类型：发明
国别省市：上海;31