【技术实现步骤摘要】
一种检测靶核酸的试剂盒及方法
本专利技术提供了一种检测靶核酸的试剂盒及方法。
技术介绍
结核病是全世界由单一致病菌引起死亡人数最多的疾病。目前我国仍是全球30个结核病高负担国家之一,每年新发结核病患者约90万例,位居全球第3位。目前应用于结核分枝杆菌复合群诊断的技术有很多种。其中,传统的涂片抗酸染色和细菌培养方法在一些结核病人中可能造成误诊或漏诊。分子检测技术的灵敏度在理论上可达一个结核分枝杆菌,灵敏度高,且短时间即可出报告,可以对结核病人早期诊断,并可以鉴别诊断肺结核和肺癌,但是普通PCR扩增或等温扩增反应容易产生非特异性扩增产物而导致假阳性判读结果,而且在实验室环境有限时极易由核酸扩增产物污染造成检测结果的假阳性;而荧光定量PCR虽然实现了不开盖的检测,提高了检测的特异性,但是由于检测仪器和检测试剂昂贵,限制了其在基层单位上的使用;等温胶体金试纸条使得基因检测更加简便,但是不能解决基因的非特异扩增问题而且目前市场上几乎所有的基因检测试剂盒的质控体系不完整不全面,一般只包含扩增质控,信号剂显示质控,而对于样本采集质量和样本核酸提取质量均缺乏质控。
技术实现思路
本专利技术之一提供了一种试剂盒,其包括:试纸条、第一探针,以及用于特异性PCR扩增靶核酸的第一上游引物和第一下游引物;其中,所述第一上游引物用于扩增所述靶核酸的第一正义片段,所述第一下游引物用于扩增所述靶核酸的第一反义片段,所述第一上游引物或所述第一下游引物标记有第一抗原,所述第一探针标记有第二抗原;当所述第一上游引物标记 ...
【技术保护点】
1.一种试剂盒,其包括:试纸条、第一探针,以及用于特异性PCR扩增靶核酸的第一上游引物和第一下游引物;其中,/n所述第一上游引物用于扩增所述靶核酸的第一正义片段,所述第一下游引物用于扩增所述靶核酸的第一反义片段,所述第一上游引物或所述第一下游引物标记有第一抗原,所述第一探针标记有第二抗原;当所述第一上游引物标记有第一抗原时,所述第一探针能够与所述第一正义片段特异性配对,并且在所述第一探针与所述第一正义片段特异性配对后得到第一正义配对片段;当所述第一下游引物标记有第一抗原时,所述第一探针能够与所述第一反义片段特异性配对,并且在所述第一探针与所述第一反义片段特异性配对后得到第一反义配对片段;/n所述试纸条用于检测所述第一正义配对片段或所述第一反义配对片段,所述试纸条上由近及远的载有所述第一抗原的第一抗体和包被有能够在反应后形成检测线第二抗原的第二抗体,所述第一抗体标记有信号剂。/n
【技术特征摘要】
1.一种试剂盒,其包括:试纸条、第一探针,以及用于特异性PCR扩增靶核酸的第一上游引物和第一下游引物;其中,
所述第一上游引物用于扩增所述靶核酸的第一正义片段,所述第一下游引物用于扩增所述靶核酸的第一反义片段,所述第一上游引物或所述第一下游引物标记有第一抗原,所述第一探针标记有第二抗原;当所述第一上游引物标记有第一抗原时,所述第一探针能够与所述第一正义片段特异性配对,并且在所述第一探针与所述第一正义片段特异性配对后得到第一正义配对片段;当所述第一下游引物标记有第一抗原时,所述第一探针能够与所述第一反义片段特异性配对,并且在所述第一探针与所述第一反义片段特异性配对后得到第一反义配对片段;
所述试纸条用于检测所述第一正义配对片段或所述第一反义配对片段,所述试纸条上由近及远的载有所述第一抗原的第一抗体和包被有能够在反应后形成检测线第二抗原的第二抗体,所述第一抗体标记有信号剂。
2.根据权利要求1所述的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒中还包括第二探针,和用于特异性PCR扩增质控核酸的第二上游引物和第二下游引物,其中,
所述第二上游引物用于扩增所述质控核酸的第二正义片段,所述第二下游引物用于扩增所述质控核酸的第二反义片段,所述第二上游引物或所述第二下游引物标记有第一抗原,所述第二探针标记有第三抗原;当所述第二上游引物标记有所述第一抗原时,所述第二探针能够与所述第二正义片段特异性配对,并且在所述第二探针与所述第二正义片段特异性配对后得到第二正义配对片段;当所述第二下游引物标记有第一抗原时,所述第二探针能够与所述第二反义片段特异性配对,并且在所述第二探针与所述第二反义片段特异性配对后得到第二反义配对片段;
所述第一抗原、第二抗原和第三抗原两两不同;
所述试纸条还用于检测所述第二正义配对片段或所述第二反义配对片段;所述试纸条上还包被有在反应后形成第一质控线的第三抗原的第三抗体,且所述检测线与所述第一质控线间隔平行排列;
优选地,所述质控核酸为用于监测待测样品的质量的内参质控核酸;
优选地,所述试纸条上还包被有在反应后形成第二质控线的第一抗体的第四抗体,且所述第二质控线与所述检测线以及所述第一质控线分别间隔平行排列。
3.根据权利要求1或2所述的试剂盒,其特征在于,所述第一探针的3’端和所述第二探针的3’端独立地修饰有ddATP、ddTTP、ddCTP和ddGTP中的一种;和/或
所述第一抗原、第二抗原和所述第三抗原独立地为生物素、异硫氰酸荧光素、羧基荧光素、地高辛和羧基四甲基罗丹明中的至少一种,且所述FITC和FAM不同时使用;和/或
所述信号剂选自胶体金、荧光化合物、化学发光化合物中的一种;优选地,所述信号剂选自胶体金、FITC和吖啶酯中的一种。
4.根据权利要求1至3中任意一项所述的试剂盒,其特征在于,所述试纸条包括支撑底板、吸水纸、硝酸纤维素膜、金垫和样品垫;其中,所述样品垫、所述金垫、所述硝酸纤维素膜和所述吸水纸依次从近端到远端固定在所述支撑底板的同一面上;
所述第二抗体以及任选地第四抗体包被在所述硝酸纤维素膜上,优选地,所述第三抗体也包被在所述硝酸纤维素膜上;
所述第一抗体载于在所述金垫上;
优选地,所述样品垫和金垫独立地为玻璃纤维膜;
优选地,所述试纸条还包括背胶和隔离纸,所述背胶贴和隔离纸依次覆盖于在所述支撑底板的另一面,所述隔离纸上标有所述吸水纸、所述硝酸纤维素膜、所述金垫和所述样品垫...
【专利技术属性】
技术研发人员:杨华卫,吴雨萌,林思琦,
申请(专利权)人:江苏猎阵生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:江苏;32
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