基于多酶恒温快速扩增技术检测结核分枝杆菌复合群及rpoB突变的引物探针组及其应用制造技术

本发明专利技术涉及分子生物学及临床检测技术领域，具体涉及基于多酶恒温快速扩增技术检测结核分枝杆菌复合群及rpoB突变的引物探针组及其应用。本发明专利技术以rpoB基因第1296位碱基突变作为分子标记鉴别结核分枝杆菌复合群菌株，针对该位点以及rpoB的516位点、526位点和531位点氨基酸突变设计了特异性引物探针组，开发了基于多酶恒温快速扩增技术检测结核分枝杆菌复合群菌株及rpoB突变的方法。本发明专利技术的引物探针组检测灵敏度高、特异性强；该方法对设备的依赖性低，检测耗时短，可实现快速、准确的检测，结合侧向流动试纸条可实现可视化检测，对结核分枝杆菌复合群菌株的感染检测及结核分枝杆菌耐药性检测具有重要的应用价值。

Detection of Mycobacterium tuberculosis complex group and rpoB mutation with primer probe group based on multi enzyme thermostatic rapid amplification technology and its application

【技术实现步骤摘要】
基于多酶恒温快速扩增技术检测结核分枝杆菌复合群及rpoB突变的引物探针组及其应用
本专利技术涉及分子生物学及临床检测
，具体涉及基于多酶恒温快速扩增技术检测结核分枝杆菌复合群及rpoB突变的引物探针组及其应用。
技术介绍
结核病主要是由结核分枝杆菌复合群菌株（MycobacteriumtuberculosisComplex，MTBC）所引起的一种严重危害人类健康的慢性传染病，其中由结核分枝杆菌（Mycobacteriumtuberculosis，MTB）感染导致的病例占绝大多数。结核分枝杆菌复合群主要包括结核分枝杆菌、牛结核分枝杆菌、非洲分枝杆菌和田鼠分枝杆菌等多种亲缘关系相近的菌株；其中，除田鼠分枝杆菌已明确对人无致病力外，大多数结核分枝杆菌复合群菌株对人可致病；且产生大致相同的临床表现。非结核分枝杆菌（NonTuberculosismycobacteria，NTM）是指除结核杆菌复合群菌株及麻风分枝杆菌以外的所有分枝杆菌。NTM感染症状与结核病症状类似、易造成误诊、漏诊，增加了结核病诊断和治疗的难度。因此，迅速、准确的检测、鉴本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.rpoB突变位点在作为结核分枝杆菌复合群菌株的特异性分子标记中的应用，所述rpoB突变位点位于如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列的第1296位，结核分枝杆菌复合群菌株的该位点为A，非结核分枝杆菌的该位点为G。/n

【技术特征摘要】
1.rpoB突变位点在作为结核分枝杆菌复合群菌株的特异性分子标记中的应用，所述rpoB突变位点位于如SEQIDNO.1所示的核苷酸序列的第1296位，结核分枝杆菌复合群菌株的该位点为A，非结核分枝杆菌的该位点为G。


2.rpoB突变位点或所述rpoB突变位点的检测试剂在鉴别结核分枝杆菌复合群菌株与非结核分枝杆菌或制备用于检测结核分枝杆菌复合群菌株感染或检测结核病的试剂中的应用，所述rpoB突变位点位于如SEQIDNO.1所示的核苷酸序列的第1296位，结核分枝杆菌复合群菌株的该位点为A，非结核分枝杆菌的该位点为G。


3.基于多酶恒温扩增技术检测结核分枝杆菌复合群菌株及rpoB突变的特异性引物探针组，其特征在于，所述引物探针组包括上游引物和探针组，所述上游引物的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示，所述探针组包含选自核苷酸序列如SEQIDNO.4~7所示的探针中的一个或多个。


4.根据权利要求3所述的引物探针组，其特征在于，所述上游引物和所述探针的末端采用生物标记。


5.根据权利要求4所述的引物探针组，其特征在于，所述上游引物和所述探针之间以及所述探针之间采用不同的生物标记。


6.用于结核分枝杆菌复合群菌株的鉴定及rpoB突变检测的试剂盒，其特征在于，其包含权利要求3~5任一项所述的引物探针组。


7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括选自dNTPs、重组酶、恒温聚合酶、辅助蛋白、核酸外切酶、聚乙二醇、Tris-HCl、醋酸镁和单链结合蛋白...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵丽丽，万康林，李马超，刘海灿，
申请(专利权)人：中国疾病预防控制中心传染病预防控制所，
类型：发明
国别省市：北京;11