一种高产丁酸乙酯酿酒酵母菌株及其构建方法与用途技术

本发明专利技术属于生物工程技术领域，涉及工业微生物的育种，尤其是构建一种高产丁酸乙酯酿酒酵母菌株的方法及其应用。通过在出发菌株中过表达乙酰辅酶A酰基转移酶基因Erg10、3‑羟基丁酰辅酶A脱氢酶基因Hbd、3‑羟基丁酰辅酶A脱水酶基因Crt、反式‑2‑烯酰辅酶A还原酶基因Ter、以及醇酰基转移酶基因AAT，以获得一株具有产丁酸乙酯能力的酵母菌株EST，与出发菌不产丁酸乙酯相比，其丁酸乙酯产量达到了77.33±3.79mg/L。在对Ter基因和AAT基因进行二拷贝表达后获得菌株EDST，丁酸乙酯的产量达到了99.65±7.32mg/L，与EST菌株相比产量提高了28.9％，同时还产生了40.93±3.18mg/L的巴豆酸乙酯，取得了预料不到的技术效果，为酿造出风味优良且更有利于健康的白酒奠定了理论基础，具有广阔的市场前景。

A strain of Saccharomyces cerevisiae with high yield of ethyl butyrate and its construction method and Application

【技术实现步骤摘要】
一种高产丁酸乙酯酿酒酵母菌株及其构建方法与用途
：本专利技术属于生物工程
，特别涉及一种高产丁酸乙酯酿酒酵母菌株及其构建方法与用途。
技术介绍
：中国白酒的主要成分是水和乙醇，二者在白酒中的比重高达97％-98％，其余的风味物质仅占2％-3％，然而随着风味化学的不断发展，人们发现正是这些含量极少的风味物质决定了白酒的香型与特征。在众多的微量成分中，酯是最重要的一类化合物，具有令人愉悦的果香味，适量的酯能够增加酒的风味。对于中国白酒而言,乙酸乙酯、己酸乙酯、乳酸乙酯和丁酸乙酯是我国白酒的四大主要香气成分,直接决定了白酒产品质量。丁酸乙酯作为白酒的四大香气成分之一，具有类似猕猴桃、菠萝果香气味，是浓香型白酒中老窖香气成分之一，此外，丁酸乙酯还广泛应用于日化香精、食用香精配方中，可调配多种果香型及其他香型的香精。酿酒酵母虽具有极强的酒精发酵效率，但由于其自身缺乏相应的酰基辅酶A，以及缺乏特异性强的醇酰基转移酶，因而产酯能力低。虽然从20世纪60年代开始，许多企业采用添加产酯酵母使其与酿酒酵母共发酵或者延长发酵期和窖藏时间等方式以改进白酒本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高产丁酸乙酯的酿酒酵母基因工程菌株，其特征在于：所述菌株以酿酒酵母为出发菌株，通过过表达乙酰辅酶A酰基转移酶基因Erg10，同时过表达3-羟基丁酰辅酶A脱氢酶基因Hbd、3-羟基丁酰辅酶A脱水酶基因Crt、反式-2-烯酰辅酶A还原酶基因Ter，同时过表达醇酰基转移酶基因AAT构建而成。/n

【技术特征摘要】
1.一种高产丁酸乙酯的酿酒酵母基因工程菌株，其特征在于：所述菌株以酿酒酵母为出发菌株，通过过表达乙酰辅酶A酰基转移酶基因Erg10，同时过表达3-羟基丁酰辅酶A脱氢酶基因Hbd、3-羟基丁酰辅酶A脱水酶基因Crt、反式-2-烯酰辅酶A还原酶基因Ter，同时过表达醇酰基转移酶基因AAT构建而成。


2.如权利要求1所述一种高产丁酸乙酯的酿酒酵母基因工程菌株，其特征在于：所述基因Ter和基因AAT中至少一个基因为双拷贝表达。


3.如权利要求1所述一种高产丁酸乙酯的酿酒酵母基因工程菌株，其特征在于：所述乙酰辅酶A酰基转移酶基因Erg10，其核苷酸序列如核苷酸序列表中SEQIDNO:1所示；
所述3-羟基丁酰辅酶A脱氢酶基因Hbd，其核苷酸序列如核苷酸序列表中SEQIDNO:2所示；
所述3-羟基丁酰辅酶A脱水酶基因Crt，其核苷酸序列如核苷酸序列表中SEQIDNO:3所示；
所述反式-2-烯酰辅酶A还原酶基因Ter，其核苷酸序列如核苷酸序列表中SEQIDNO:4所示；
所述醇乙酰基转移酶基因AAT，其核苷酸序列如核苷酸序列表SEQIDNO:5所示。


4.如权利要求1所述一种高产丁酸乙酯的酿酒酵母基因工程菌株，其特征在于：所述出发酵母菌株为酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)CICC32315。


5.如权利要求1、2、3或4所述一种高产丁酸乙酯的酿酒酵母基因工程菌株，其特征在于：通过强启动子过表达所述乙酰辅酶A酰基转移酶基因Erg10，同时所述3-羟基丁酰辅酶A脱氢酶编码基因Hbd和3-羟基丁酰辅酶A脱水酶编码基因Crt通过串...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈叶福，马艳蕊，江森，任津莹，郑鹏，肖冬光，郭学武，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：天津;12