【技术实现步骤摘要】
一种生产二氢青蒿酸的酿酒酵母工程菌及其构建方法和应用
本专利技术涉及微生物
，更具体的说是涉及一种生产二氢青蒿酸的酿酒酵母工程菌及其构建方法和应用。
技术介绍
青蒿素是一种有效抗疟疾药物，其众多的衍生物都被世界卫生组织于2002年认定为一线抗疟疾药物。目前，青蒿素的获得方式主要是从植物青蒿中直接提取。青蒿在世界各地均有分布，但绝大数青蒿中青蒿素含量都很低(≤1‰)，且提取成本较高。而化学合成法从头合成青蒿素，因青蒿素分子本身结构复杂，导致合成难度高，成本高，在经济上不可行。而生物半合成方法获得青蒿素成为最佳的选择，即通过基因工程改造微生物使其生产青蒿素前体青蒿二烯、青蒿酸或二氢青蒿酸等，再通过几步简单的化学合成方法合成青蒿素。其中，二氢青蒿酸是合成青蒿素的最直接的前体物质，所有其他的前体物质(如青蒿酸等)都需要用化学方法先合成到二氢青蒿酸，才能进一步合成青蒿素。如PaddonCJ等人在2013年利用酿酒酵母先异源合成大量青蒿酸，再通过化学法合成二氢青蒿酸，进而合成青蒿素。但是，这种先用生物法合成青蒿酸再...
【技术保护点】
1.一种生产二氢青蒿酸的酿酒酵母工程菌，其特征在于，通过二氢青蒿酸酿酒酵母异源合成途径改造的酿酒酵母底盘菌株，其原有表达ALDH1的序列为表达突变的ALDH1
【技术特征摘要】
1.一种生产二氢青蒿酸的酿酒酵母工程菌，其特征在于，通过二氢青蒿酸酿酒酵母异源合成途径改造的酿酒酵母底盘菌株，其原有表达ALDH1的序列为表达突变的ALDH1H194R的序列或表达突变的ALDH1V247F的序列。
2.根据权利要求1所述酿酒酵母工程菌，其特征在于，所述酿酒酵母底盘菌株为市售CEN.PK2系酿酒酵母。
3.根据权利要求1所述酿酒酵母工程菌，其特征在于，所述表达突变的ALDH1H194R的序列为表达ALDH1H194R的序列或表达DBR2和ALDH1H194R的融合蛋白的序列。
4.根据权利要求1所述酿酒酵母工程菌，其特征在于，所述表达突变的ALDH1V247F的序列为表达ALDH1V247F的序列或表达DBR2和ALDH1V247F的融合蛋白的序列。
5.根据权利要求1-4任意一项所述酿酒酵母工程菌，其特征在于，还包括，原有表达DBR2的序列为表达DBR2和ADH1的融合蛋白的序列。
6.权利要求1-5任意一项所述酿酒酵母工程菌在生产二氢青蒿酸或以二氢青蒿酸为中间产物的产品中的应用。
7.ALDH1H194R及其编码序列或ALDH1V247F及其编码序列在构建生产二氢青蒿酸的酿酒酵母工程菌中的应用。
8.DBR2和ALDH1H194R的融合蛋白及其编码序列或DBR2和ALDH1V247F的融合蛋白及其编码序列在构建生产二氢青蒿酸的酿酒酵母工程菌中的应用。
9.权利要求1所述酿酒酵母工程菌的构建方法，其特征在于，包括：
步骤1、以根据二氢青蒿酸酿酒酵母异源合成途径改造的底盘菌株作为出发菌株，所述底盘菌株通过基因整合和/或质粒导入的方式至少将ADS、CYP71AV1、CPR1、CYB5、ADH1、DBR2和ALDH1的编码序列转入；
步骤2、若原有表达ALDH1的序列预通过质粒导入的方式转入底盘菌株，则利用质粒上原有表达ALDH1的序列的两端酶切位点，对表达突变的ALDH1H19...
【专利技术属性】
技术研发人员：元英进，曾薄轩，肖文海，姚明东，王颖，
申请(专利权)人：天津大学，
类型：发明
国别省市：天津;12
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