【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】STREP-TAG特异性结合蛋白及其用途相关申请的交叉引用本申请要求2017年9月6日提交的美国专利申请No.62/555,017的优先权权益，该专利申请出于所有目的通过引用结合到本文中，如同在此完整阐述。关于序列表的声明与本申请相关联的序列表以文本格式代替纸质副本提供，并且在此通过引用结合到说明书中。包含序列表的文本文件的名称为360056_451WO_SEQUENCE_LISTING.txt。文本文件为28.9KB，创建于2018年9月3日，正在通过EFS-Web进行电子提交。
技术介绍
重组蛋白和表达相同蛋白的细胞通常使用与重组蛋白融合的合成标记肽进行检测、分选和纯化。例如，合成的肽可以很容易地与目标蛋白融合，并以高亲和力与工程化的链霉亲和素衍生物结合。系统可通过与含的底物(通常是磁性纳米珠或树脂)结合而分离和亲和纯化Strep-tag标记的蛋白和细胞。但是，需要具有附加功能的结合试剂，以便更充分地利用标记目标分子在体外和体内应用中的潜力，例如检测和操纵免疫疗法中使用的标记蛋白和细胞。本公开的实施例解决了这些需求并提供了其他相关的优点。附图说明图1A和图1B示出了结合STII标记的CART细胞的鼠抗(STII)单克隆抗体的特征。(A)流式细胞术数据显示抗STII单克隆抗体与STII标记的CART细胞特异性结合。(B)IsoStripTM表示5G2mAb和4E2mAb的同种型。图2A-图2D示出了来自体内实验的数据，其中向接受STII标记的抗CD19CART细胞的B细胞耗...
【技术保护点】
1.一种免疫球蛋白结合蛋白，其中，所述结合蛋白包含与标记肽特异性结合的结合结构域，所述标记肽包含SEQ ID NO：19的氨基酸序列或由其组成，并且所述结合结构域包含：/n(a)V
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170906 US 62/555,0171.一种免疫球蛋白结合蛋白，其中，所述结合蛋白包含与标记肽特异性结合的结合结构域，所述标记肽包含SEQIDNO：19的氨基酸序列或由其组成，并且所述结合结构域包含：
(a)VL结构域，包含：
i.SEQIDNO：31所示的CDR1氨基酸序列或其变体、SEQIDNO：32所示的CDR2氨基酸序列或其变体、以及SEQIDNO：33所示的CDR3氨基酸序列或其变体；
ii.SEQIDNO：25所示的CDR1氨基酸序列或其变体、SEQIDNO：26所示的CDR2氨基酸序列或其变体、以及SEQIDNO：27所示的CDR3氨基酸序列或其变体；或者
iii.SEQIDNO：37所示的CDR1氨基酸序列或其变体、SEQIDNO：38所示的CDR2氨基酸序列或其变体、SEQIDNO：39所示的CDR3氨基酸序列或其变体、以及VH结构域；或者
(b)VH结构域，包含：
i.SEQIDNO：28所示的CDR1氨基酸序列或其变体、SEQIDNO：29所示的CDR2氨基酸序列或其变体、以及SEQIDNO：30所示的CDR3氨基酸序列或其变体；
ii.SEQIDNO：22所示的CDR1氨基酸序列或其变体，SEQIDNO：23所示的CDR2氨基酸序列或其变体、以及SEQIDNO：24所示的CDR3氨基酸序列或其变体；或者
iii.SEQIDNO：34所示的CDR1氨基酸序列或其变体、SEQIDNO：35所示的CDR2氨基酸序列或其变体、以及SEQIDNO：36所示的CDR3氨基酸序列或其变体，和VL结构域；或者
(c)(a)的VL结构域以及(b)的VH结构域。
2.根据权利要求1的免疫球蛋白结合蛋白，其中，所述VL结构域包含与SEQIDNO：3、SEQIDNO：10和SEQIDNO：16中任一个所示的氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列，并且所述VH结构域包含与SEQIDNO：2、SEQIDNO：8和SEQIDNO：14中任一个所示的氨基酸序列至少80％相同的氨基酸序列。
3.根据权利要求1或2的免疫球蛋白结合蛋白，其中，所述VL包含SEQIDNOS：10、SEQIDNOS：3和SEQIDNOS：16中任一项所示的氨基酸序列或由其组成，并且所述VH包含SEQIDNOS：8、SEQIDNOS：2和SEQIDNOS：14中的任何一个所示的氨基酸序列或由其组成。
4.根据权利要求3的免疫球蛋白结合蛋白，其中，所述VL包含SEQIDNO：10所示的氨基酸序列或由其组成，并且所述VH包含SEQIDNO：8所示的氨基酸序列或由其组成。
5.根据权利要求3的免疫球蛋白结合蛋白，其中，所述VL包含SEQIDNO：3所示的氨基酸序列或由其组成，并且所述VH包含SEQIDNO：2所示的氨基酸序列或由其组成。
6.根据权利要求3的免疫球蛋白结合蛋白，其中，所述VL包含SEQIDNO：16所示的氨基酸序列或由其组成，并且所述VH包含SEQIDNO：14所示的氨基酸序列或由其组成。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的免疫球蛋白结合蛋白，其中所述免疫球蛋白结合蛋白包含抗体或其抗原结合部分。
8.根据权利要求7的免疫球蛋白结合蛋白，其中，所述抗体或其抗原结合部分包含单克隆抗体5G2。
9.根据权利要求7的免疫球蛋白结合蛋白，其中，所述抗体或其抗原结合部分包含单克隆抗体3E8。
10.根据权利要求7的免疫球蛋白结合蛋白，其中，所述抗体或其抗原结合部分包含单克隆抗体4E2。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的免疫球蛋白结合蛋白，其中，所述免疫球蛋白结合蛋白是嵌合的、人源化的或者人的抗体或其抗原结合部分。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的免疫球蛋白结合蛋白，其中，所述结合结构域包含scFv、串联scFv、scFv-Fc、串联scFv-Fc、scFv二聚体、scFv拉链、双特异抗体、双特异抗体-Fc、双特异抗体-CH3、sc双特异抗体、sc双特异抗体-Fc、sc双特异抗体-CH3、纳米抗体、微型抗体、微抗体、三抗体、四抗体、Fab、F(ab)'2、scFab、Fab-scFv、Fab-scFv-Fc、scFv-CH-CL-scFv、F(ab')2-scFv2、双特异性T细胞衔接器(BiTE)分子、DART、旋钮入孔(KIH)装配体、scFv-CH3-KIH装配体、KIH通用轻链抗体、TandAb、三抗体、TriBi微型抗体、Fab-scFv、scFv-CH-CL-scFv、F(ab')2-scFv2、四价HCab、体内抗体、CrossMab、双重作用Fab(DAF)(二合一或四合一)、DutaMab、DT-IgG、电荷对、Fab-臂交换、SEED抗体、Triomab、LUZ-Y、Fcab、κλ-抗体、正交Fab、DVD-IgG、IgG(H)-scFv、scFv-(H)IgG、IgG(L)-scFv、scFv-(L)IgG、IgG(L、H)-Fv、IgG(H)-V、V(H)-IgG、IgG(L)-V、V(L)-IgG、KIHIgG-scFab、2scFv-IgG、IgG-2scFv、scFv4-Ig、Zybody或DVI-IgG(四合一)。
13.根据权利要求12的免疫球蛋白结合蛋白，其中，所述结合结构域包含scFv，并且所述该scFv包含单克隆抗体3E8的VL和VH。
14.根据权利要求13的免疫球蛋白结合蛋白，其中，所述scFv包含SEQIDNO：5或SEQIDNO：6的氨基酸序列或由其组成。
15.根据权利要求12的免疫球蛋白结合蛋白，其中，所述结合结构域包含scFv，并且该scFv包含单克隆抗体5G2的VL和VH。
16.根据权利要求15的免疫球蛋白结合蛋白，其中，所述scFv包含SEQIDNO：11或SEQIDNO：12的氨基酸序列或由其组成。
17.根据权利要求12的免疫球蛋白结合蛋白，其中，所述结合结构域包含scFv，并且该scFv包含单克隆抗体4E2的VL和VH。
18.根据权利要求17的免疫球蛋白结合蛋白，其中，所述scFv包含SEQIDNO：17或SEQIDNO：18的氨基酸序列或由其组成。
19.根据权利要求1至18中任一项所述的免疫球蛋白结合蛋白，其中，所述免疫球蛋白结合蛋白包含多特异性结合蛋白，其中所述多特异性结合蛋白包含与所述标记肽特异性结合的结合域以及与并非所述标记肽的至少一个靶标特异性结合的结合域。
20.根据权利要求19的免疫球蛋白结合蛋白，其中，所述多特异性结合蛋白包含双特异性结合蛋白。
21.根据权利要求19或20的免疫球蛋白结合蛋白，其中，并非所述标记肽的所述至少一个靶标是免疫细胞标志物。
22.根据权利要求21所述的免疫球蛋白结合蛋白，其中，所述免疫细胞标志物是CD3或CD16。
23.根据权利要求19-22中任一项所述的免疫球蛋白结合蛋白，其中，所述结合域包含双特异性scFv。
24.根据权利要求1至23中任一项所述的免疫球蛋白结合蛋白，其中，所述免疫球蛋白结合蛋白是多价的。
25.根据权利要求24所述的免疫球蛋白结合蛋白，其中，所述免疫球蛋白结合蛋白是二价的。
26.一种融合蛋白，其包括包含权利要求1-25中任一项所述的结合结构域的细胞外组分以及包含效应子结构域的细胞内组分，其中所述细胞外组分和细胞内组分通过跨膜结构域连接。
27.根据权利要求26所述的融合蛋白，其中，所述结合结构域包含scFv，并且所述细胞外组分还包含具有铰链的连接区。
28.根据权利要求26或27所述的融合蛋白，其中，所述融合蛋白包含嵌合抗原受体。
29.根据权利要求1-25中任一项所述的免疫球蛋白结合蛋白，或权利要求26-28中任一项所述的融合蛋白，还包含细胞毒性剂、放射性同位素、放射性金属或可检测剂。
30.一种组合物，包含(a)权利要求1-25和29中任一项所述的免疫球蛋白结合蛋白或(b)权利要求26-29中任一项所述的融合蛋白、以及药学上可接受的载体或赋形剂。
31.一种分离的多核苷酸，编码(a)权利要求1-25和29中任一项所述的免疫球蛋白结合蛋白或(b)权利要求26-29中任一项所述的融合蛋白。
32.根据权利要求31所述的多核苷酸，其包含：
(a)多核苷酸，与SEQIDNOS：1、SEQIDNOS：7和SEQIDNOS：13中的任一者中所述的核苷酸序列具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％的同一性；和/或
(b)多核苷酸，与SEQIDNOS：4、SEQIDNOS：9和SEQIDNOS：15中的任一者中所述的核苷酸序列具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％的同一性。
33.根据权利要求31或32所述的多核苷酸，其中，所述多核苷酸针对包含所述多核苷酸的宿主细胞进行了密码子优化。
34.一种表达构建体，包含与表达控制序列可操作连接的权利要求31-33中任一项所述的多核苷酸。
35.一种载体，其包含权利要求3所述4的表达构建体。
36.根据权利要求35所述的载体，其中，所述载体是质粒载体或病毒载体。
37.根据权利要求36所述的载体，其中，所述载体是病毒载体，并且所述病毒载体选自慢病毒载体或γ-逆转录病毒载体。
38.一种宿主细胞，包含权利要求31-33中任一项所述的多核苷酸或权利要求34的表达构建体，其中，所述多核苷酸或所述表达构建体编码所述免疫球蛋白结合蛋白或所述融合蛋白，并且所述宿主细胞表达编码的所述免疫球蛋白结合蛋白或编码的所述融合蛋白。
39.一种鉴定标记细胞或标记细胞群的方法，所述标记细胞或标记细胞群在细胞表面上表达包含SEQIDNO：19中所示氨基酸序列或由其组成的标记肽，该方法包括：
(i)使来自包含一种或更多种标记细胞的受试者的样品与权利要求1-25和29中任一项所述的免疫球蛋白结合蛋白或权利要求26-29中任一项所述的融合蛋白接触；和
(ii)检测所述免疫球蛋白结合蛋白或所述融合蛋白与所述一种或更多种标记细胞的特异性结合，从而鉴定出表达所述标记肽的一种或更多种细胞。
40.一种从受试者富集或分离标记细胞或标记细胞群的方法，该方法包括：
(i)使来自包含一种或更多种细胞的受试者的样品与权利要求1-25和29中任一项所述的免疫球蛋白结合蛋白或权利要求26-29中任一项所述的融合蛋白接触，所述一种或更多种细胞在细胞表面上表达包含SEQIDNO：19所示氨基酸序列或由其组成的标记肽；和
(ii)选择或分选与所述免疫球蛋白结合蛋白或所述融合蛋白特异性结合的一种或更多种标记细胞，从而富集或分离表达所述标记肽的一种或更多种细胞。
41.根据权利要求39或40所述的方法，其中，所述细胞表面标记肽包含在细胞表面蛋白中。
42.根据权利要求41所述的方法，其中，所述细胞表面蛋白包含嵌合抗原受体(CAR)、T细胞受体(TCR)、标志物或其组合。
43.根据权利要求41或42所述的方法，其中，所述细胞表面蛋白包含标志物。
44.根据权利要求43所述的方法，其中，所述标志物包括EGFRt、CD19t、CD34t或NGFRt。
45.根据权利要求39-44中任一项所述的方法，其中，所述免疫球蛋白结合蛋白或融合蛋白包含可检测部分。
46.根据权利要求45所述的方法，其中，所述可检测部分包含酶、染料、荧光标签或肽标记中的一种或更多种，条件是所述肽标记不包含SEQIDNO：19中所述的氨基酸序列或由其组成。
47.根据权利要求46所述的方法，其中，所述可检测部分包含所述酶，并且所述酶包含生色报告酶。
48.根据权利要求47所述的方法，其中，所述生色报告酶包含辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶。
49.根据权利要求46所述的方法，其中，所述可检测部分包含所述染料。
50.根据权利要求46所述的方法，其中，所述可检测部分包含所述荧光标签。
51.根据权利要求50所述的方法，其中，所述荧光标签物包含花青染料、香豆素、若丹明、氧杂蒽、荧光素或其磺化衍生物、荧光蛋白或其任意组合。
52.根据权利要求46所述的方法，其中，所述可检测部分包含肽标记，并且所述肽标记包含His标记或Myc标记。
53.根据权利要求46所述的方法，其中，所述可检测部分包含荧光部分。
54.根据权利要求53所述的方法，其中，所述荧光部分是PE、太平洋蓝、Alexafluor、APC或FITC。
55.根据权利要求39-54中任一项所述的方法，其中，使用流式细胞术对所述标记细胞或标记细胞群进行鉴定、检测或分类。
56.根据权利要求39-55中任一项所述的方法，其中，通过磁柱色谱法从所述样品的其他组分富集或分离与所述免疫球蛋白结合蛋白或所述融合蛋白特异性结合的标记细胞或标记细胞群。
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【专利技术属性】
技术研发人员：刘凌峰，S·R·里德尔，B·霍夫斯特龙，
申请(专利权)人：弗雷德哈钦森癌症研究中心，
类型：发明
国别省市：美国;US
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