单纯疱疹病毒抗体IgG化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种单纯疱疹病毒抗体IgG化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法，属于免疫检测技术领域。解决现有技术中检测单纯疱疹病毒IgG抗体的方法存在的试剂有效期短、操作繁琐、灵敏度低、检测成本高的技术问题。本发明专利技术的试剂盒包括R1试剂、R2试剂和项目稀释液，R1试剂包括磁珠包被抗原，抗原为HSV‑1抗原或HSV‑2抗原；R2试剂包括化学发光标记物标记的抗人IgG抗体；项目稀释液为pH6.0～8.0的含有盐、表面活性剂、防腐剂及蛋白的缓冲液。该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、稳定性好、重复性好、检测范围广、检测时间短、成本相对较低的优点，可广泛用于临床检测。

Immunoassay kit and preparation method of HSV IgG

【技术实现步骤摘要】
单纯疱疹病毒抗体IgG化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法
本专利技术属于免疫检测
，具体涉及一种单纯疱疹病毒抗体IgG化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
单纯疱疹病毒I和II型(HSV-1和HSV-2)是疱疹病毒家族的两个成员。形态上与疱疹病毒科的其它成员相似，具有衣壳和DNA核。普通人群中HSV-1感染率约为70-80％，HSV-2感染率约为17-25％。HSV-1和HSV-2通过血清阴性个体和分泌病毒个体之间的密切接触进行传播。HSV-1和HSV-2感染的临床表现较多样，如粘膜和皮肤损害以及眼部、内脏和中枢神经系统(CNS)的疾病。免疫抑制的病人感染HSV可表现为严重广泛的损害。尽管HSV-1和HSV-2常通过不同的途径传播并且感染机体的不同部位，但这两种病毒之间流行病学特征和临床表现仍有许多相同之处。通常HSV-1主要引起黏膜感染，如眼、口腔及嘴角黏膜处的感染，它也是引起成人严重散发性脑炎的重要原因之一。HSV-2主要引起生殖器部位的皮肤及粘膜的损伤：生殖器疱疹现已是常见的性接触传播疾病之一。但HSV病毒的种类与感染部位的关系并不是绝对的。一旦发生HSV病毒感染，病毒将潜伏在人体的感官神经中枢，多种刺激都会导致病毒周期性复发，可能会带来临床损伤。免疫抑制性病人更容易出现反复感染，这说明血清抗体及病毒特异性细胞介质免疫有助于疾病康复。感染生殖道疱疹的孕妇流产或早产的概率是正常孕妇的2～3倍。孕妇生殖道病毒活跃可导致生产时婴儿与感染的生殖道接触而引起严重的HSV病毒感染，若孕妇生产时感染了HSV，40％～60％的婴儿也会被感染，如果不及时治疗，会引发婴儿的高发病率和高死亡率。35％的儿童到5岁时具有HSV-1病毒的抗体，80％的成人到25岁时特异性抗HSV-1病毒的抗体。由于HSV-1和HSV-2具有相同的抗原决定簇，这两种病毒的抗体可能会发生交叉反应。尽管体内有抗病毒抗体，这两种类型的病毒也会经常复发。快速准确地诊断HSV感染有助于及早采用抗病毒治疗，减少感染传播。感染HSV后，人体免疫系统会马上合成特异性抗HSVIgM抗体，一周后即可被检测到。一般HSVIgM抗体的存在表示近期感染或复发感染。原发性感染病人2～3周后，体内一般会出现特异性IgG抗体，但几个月后其滴度会下降，而复发感染的病人滴度不会增高。通过对IgG的检测可评估患者的免疫状态并且提供HSV既往感染的血清学证据。结合HSV-1或HSV-2抗体血清转化的结果可帮助诊断近期(原发性或继发性)HSV感染。现有技术中，常用的检测单纯疱疹病毒IgG抗体的方法有放射免疫技术(RIA)、酶联免疫分析技术(ELISA)及免疫印迹法(WB)，但RIA具有存在放射性污染、标记物半衰期短、对操作者具有放射性损伤、操作繁琐、检测时间长等缺点；ELISA具有灵敏度低、检测范围窄、检测时间长、重复性差等缺点；WB具有免疫印迹法试剂需要低温保存等缺点。
技术实现思路
有鉴于此，为解决现有技术中检测单纯疱疹病毒IgG抗体的方法存在的试剂有效期短、操作繁琐、灵敏度低、检测成本高的技术问题，本专利技术提供一种单纯疱疹病毒抗体IgG化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法。本专利技术解决上述技术问题采取的技术方案如下。单纯疱疹病毒抗体IgG化学发光免疫检测试剂盒，包括R1试剂、R2试剂和项目稀释液；R1试剂包括磁珠包被抗原，抗原为HSV-1抗原或HSV-2抗原；R2试剂包括化学发光标记物标记的抗人IgG抗体；项目稀释液为pH6.0～8.0的含有盐、表面活性剂、防腐剂及蛋白的缓冲液。优选的是，所述R1试剂中，磁珠包被抗原的浓度为0.05wt％～0.2wt％。优选的是，所述磁珠包被抗原采用的磁珠的粒径为0.5～3.0μm。优选的是，所述磁珠与包被抗原的质量比为10mg:(50～500)μg。优选的是，所述R2试剂中，化学发光标记物标记的抗人IgG抗体的浓度为0.1～1.0μg/ml。优选的是，所述化学发光标记物标记的抗人IgG抗体，抗人IgG抗体与化学发光标记物的标记摩尔比为1:(3～10)；化学发光标记物为吖啶酯或三联吡啶钌；抗人IgG为鼠抗人IgG或羊抗人IgG。优选的是，所述项目稀释液中，盐为50～200mM的磷酸盐、柠檬酸盐或Bistris丙烷；表面活性剂为0.02％～0.05％的吐温20或0.05％～0.1％氯化胆碱；防腐剂为0.01～0.03％的迭氮钠和0.01～0.03％的PC300，蛋白为0.1％～3％牛血清蛋白和0.01％～0.2％牛γ球蛋白。优选的是，该试剂盒还包括校准品、化学发光激发液和清洗液中的一种或多种；所述校准品包括阳性校准品和阴性校准品，阳性校准品为单纯疱疹病毒IgG阳性血清灭活、过滤后，经缓冲液稀释而成；阴性校准品为单纯疱疹病毒IgG阴性血清灭活、过滤后经缓冲液稀释而成；所述化学发光激发液包括A液和B液，A液为过氧化氢溶液和硝酸溶液，B液为氢氧化钠溶液；所述清洗液为PB缓冲液。上述单纯疱疹病毒IgG的化学发光免疫检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：步骤一、制备R1试剂将磁珠溶液混匀，磁分离移除上清液，清洗液清洗多次后重悬，加入包被抗原，混匀，并在持续旋转混匀下，37℃孵育2～4h，磁分离去上清液，清洗液清洗多次后，用赖氨酸封闭液进行封闭，磁分离去上清，留取磁珠包被抗原，用缓冲液重悬至所需浓度，得到R1试剂；步骤二、制备R2试剂先将抗人IgG单克隆抗体放入离心管中，保证抗人IgG单克隆抗体位于离心管底部位置后加入碳酸缓冲液，充分混匀，混匀后加入化学发光标记物的N，N-二甲基甲酰胺溶液，用离心机室温条件下离心20～40s；然后将离心管用封口膜密封后放入避光暗盒中，将暗盒放入气浴恒温振荡器中混匀，加入赖氨酸封闭液，放入气浴恒温振荡器中混匀，封闭0.5～2h；再将封闭好的抗人IgG单克隆抗体上葡聚糖凝胶G250柱纯化，用磷酸缓冲液洗脱，分别收集；最后将收集好的抗人IgG单克隆抗体溶液用缓冲液稀释，即为R2试剂；步骤三、根据项目稀释液的配方配制项目稀释液；步骤四、将R1试剂、R2试剂和项目稀释液分装，完成单纯疱疹病毒IgG的化学发光免疫检测试剂盒的制备。优选的是，所述步骤一中，重悬使用的缓冲液为25M的pH7.2的Tris缓冲液；所述步骤二中，稀释用的缓冲液与项目稀释液相同。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：1、本专利技术的单纯疱疹病毒IgG抗体化学发光免疫检测试剂盒采用化学发光免疫分析法检测，该方法具有种操作简单，无放射性风险及检测时间短，并且可以对抗原、抗体类目标物质进行检测的优点。2、本专利技术的单纯疱疹病毒IgG的化学发光免疫检测试剂盒选择吖啶酯等化学发光标记物为化学发光免疫分析法的标记材料，该类标记材料由激发态回到基态时产生的能量跃迁为直接化学发光，不需要酶的参与，节约时间及成本。3、本专利技术的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.单纯疱疹病毒抗体IgG化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，包括R1试剂、R2试剂和项目稀释液；/nR1试剂包括磁珠包被抗原，抗原为HSV-1抗原或HSV-2抗原；/nR2试剂包括化学发光标记物标记的抗人IgG抗体；/n项目稀释液为pH6.0～8.0的含有盐、表面活性剂、防腐剂及蛋白的缓冲液。/n

【技术特征摘要】
1.单纯疱疹病毒抗体IgG化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，包括R1试剂、R2试剂和项目稀释液；
R1试剂包括磁珠包被抗原，抗原为HSV-1抗原或HSV-2抗原；
R2试剂包括化学发光标记物标记的抗人IgG抗体；
项目稀释液为pH6.0～8.0的含有盐、表面活性剂、防腐剂及蛋白的缓冲液。


2.根据权利要求1所述的单纯疱疹病毒抗体IgG化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述R1试剂中，磁珠包被抗原的浓度为0.05wt％～0.2wt％。


3.根据权利要求1所述的单纯疱疹病毒抗体IgG化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述磁珠包被抗原采用的磁珠的粒径为0.5～3.0μm。


4.根据权利要求1所述的单纯疱疹病毒抗体IgG化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述磁珠与包被抗原的质量比为10mg:(50～500)μg。


5.根据权利要求1所述的单纯疱疹病毒抗体IgG化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述R2试剂中，化学发光标记物标记的抗人IgG抗体的浓度为0.1～1.0μg/ml。


6.根据权利要求1所述的单纯疱疹病毒抗体IgG化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述化学发光标记物标记的抗人IgG抗体，抗人IgG抗体与化学发光标记物的标记摩尔比为1:(3～10)；化学发光标记物为吖啶酯或三联吡啶钌；抗人IgG为鼠抗人IgG或羊抗人IgG。


7.根据权利要求1所述的单纯疱疹病毒抗体IgG化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述项目稀释液中，盐为50～200mM的磷酸盐、柠檬酸盐或Bistris丙烷；表面活性剂为0.02％～0.05％的吐温20或0.05％～0.1％氯化胆碱；防腐剂为0.01～0.03％的迭氮钠和0.01～0.03％的PC300，蛋白为0.1％～3％牛血清蛋白和0.01％～0.2％牛γ球蛋白。


8.根据权利要求1所述的单纯疱疹病毒抗体IgG化学...

【专利技术属性】
技术研发人员：高智玲，翟涛，李冬梅，韩美玉，高威，孙成艳，何浩会，
申请(专利权)人：迪瑞医疗科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林;22