一种检测鸡OASL启动子活性方法技术

本发明专利技术涉及一种检测鸡OASL启动子活性方法，设计扩增出OASL启动子片段的引物，利用限制性内切酶对OASL启动子部分基因片段和pGL3‑basic载体进行双酶切，用T4连接酶连接，转化大肠杆菌，经PCR和测序验证后，获得pGL3‑basic‑OASL报告基因质粒，并用双荧光素酶报告基因试剂盒验证其功能。此发明专利技术可检测鸡OASL启动子活性，其具有快速简便、准确灵敏、便于高通量检测等显著优势，对监控禽源病毒对OASL启动子活性影响，以及OASL在不同类型禽源病毒致病过程所起作用具有重要应用价值，填补国内外空白。

A method for detecting the activity of chicken's oasl promoter

【技术实现步骤摘要】
一种检测鸡OASL启动子活性方法
本专利技术涉及一种检测鸡OASL启动子活性方法，属于生物

技术介绍
先天性免疫系统在病毒感染早期起着至关重要的作用。机体感染病毒后，其免疫系统中的模式识别受体识别非己核酸并激活相应的信号通路，从而释放干扰素，激活并上调其下游的ISG分子表达，ISG分子发挥抗病毒作用。OASL(寡腺苷酸合成酶样蛋白)属于ISGs家族中的重要成员，可合成双链RNA活化酶，抑制蛋白质合成，进而发挥抗病毒作用。OASL在宿主抗流感病毒，脑心肌炎病毒，丙型肝炎病毒等病毒中发挥重要作用。本专利技术克隆了鸡OASL启动子区域部分序列插入pGL3-basic载体中，构建了pGL3-basic-OASL报告基因质粒，并验证了该启动子被Ⅰ型干扰素以及双链RNA刺激后的活性变化，为进一步探究病毒对OASL的影响，以及OASL在不同类型禽源病毒感染过程做所起作用提供了有力的工具。
技术实现思路
本专利技术的目的是在于提供一种检测鸡OASL启动子活性方法，本专利技术的原理和最核心的关键技术是科学地设计扩增出鸡OASL启动子本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测鸡OASL启动子活性方法，其特征是：设计扩增鸡OASL启动子部分片段的引物与pGL3-basic连接,构建荧光素酶报告质粒pGL3-basic-OASL,并用双荧光素酶报告基因试剂盒验证其功能；包括以下步骤：/n1）利用下述扩增鸡OASL启动子部分片段的引物，以CEF的基因组为模板，PCR扩增出鸡OASL启动子部分基因；/n上游引物：5‘ CCGCTCGAGcttgatggcatgagtcctcctgcc 3’；/n下游引物：5‘GGGAAGCTTgctccgccgccgctcgctgcag 3’；/n2）用XhoI和HindⅢ限制性内切酶对上述鸡OASL启动子部分基因和荧光素酶报...

【技术特征摘要】
1.一种检测鸡OASL启动子活性方法，其特征是：设计扩增鸡OASL启动子部分片段的引物与pGL3-basic连接,构建荧光素酶报告质粒pGL3-basic-OASL,并用双荧光素酶报告基因试剂盒验证其功能；包括以下步骤：
1）利用下述扩增鸡OASL启动子部分片段的引物，以CEF的基因组为模板，PCR扩增出鸡OASL启动子部分基因；
上游引物：5‘CCGCTCGAGcttgatggcatgagtcctcctgcc3’；
下游引物：5‘GGGAAGCTTgctccgccgccgctcgctgcag3’；
2）用XhoI和HindⅢ限制性内切酶对上述鸡OASL启动子部分基因和荧光素酶报告载体pGL3-basic分别进行双酶切，得到酶切产物；
3）酶切产物纯化后经T...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶建强，姚晓慧，李拓凡，李春平，万志敏，邵红霞，秦爱建，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32