一种蛋白延时表达开关及其在葡萄糖二酸生产中应用制造技术

本发明专利技术公开了一种蛋白延时表达开关，通过组合使用生长期启动子P

A protein delay expression switch and its application in the production of gluconic acid

【技术实现步骤摘要】
一种蛋白延时表达开关及其在葡萄糖二酸生产中应用
本专利技术涉及一种蛋白延时表达开关及其应用，具体涉及一种由启动子和C末端降解标签组合控制的蛋白延时表达开关及其在葡萄糖二酸生产中的应用，属于生物工程

技术介绍
为满足全球范围内对可持续发展的需求。过去十年，微生物细胞工厂是生产高价值化合物(如生物燃料，可再生材料和医药中间体)的重要工具。代谢工程改造微生物细胞工厂是调节代谢流的重要手段。使用传统基因敲除和基因过表达等静态调控策略可能会损害细胞活力并降低细胞的发酵参数，如生产强度、得率和产量。相反，动态调控策略正在成为提高微生物合成效率的新策略，例如蛋白延时表达开关。目前常用的蛋白延时表达开关设计主要由两种思路：第一种思路需要借助异源群体感应QS系统，即细胞在低密度时，由于自诱导物AHL的积累浓度较低，受体蛋白LuxR难以结合到启动子PLux上行使激活转录的功能，而当细胞密度持续增加，AHL浓度积累到一定阈值时，AHL会与LuxR结合，并进一步结合到启动子PLux上，激活转录活动，实现针对靶蛋白的延时表达(ACSSynthBiol,本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种蛋白延时表达开关，其特征在于，通过组合使用生长期启动子P

【技术特征摘要】
1.一种蛋白延时表达开关，其特征在于，通过组合使用生长期启动子PrpsL和C末端降解标签SsrA，可以自动控制靶蛋白在细胞培养后期开启表达；所述SsrA包括LAA、DAS、DAS+4、DAS+8或GSD；所述PrpsL的核苷酸序列分别如SEQIDNO.1所示；所述LAA、DAS、DAS+4、DAS+8或GSD的氨基酸序列分别如SEQIDNO.2-SEQIDNO.6所示。


2.如权利要求1所述的蛋白延时表达开关，其特征在于，所述靶蛋白为红色荧光蛋白mKate2或肌醇-1-磷酸合成酶INO1,由Ptet启动子控制表达。


3.一种基因工程菌，其特征在于，以大肠杆菌为宿主菌，引入权利要求1所述蛋白延时表达开关控制靶蛋白的表达，优选地，所述大肠杆菌敲除了D-半乳糖醛酸异构酶基因uxaC和D-葡糖二酸脱水酶基因gudD，更优选地，所述大肠杆菌为敲除了基因uxaC和gudD的E.coliMG1655。


4.如权利要求3所述的基因工程菌的构建方法，其特征在于，包括(1)构建重组表达载体，所述表达载体为p15A-PrpsL-tetR-SsrA-Ptet-INO1-PTrc-MIOX-Udh，优选p15A-PrpsL-tetR-DAS+8-Ptet-INO1-PTrc-MIOX-Udh；(2)将所述表达载体转化至大肠杆菌；(3)培养转化的大肠杆菌得到基因工程菌。


5.如权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(1)中表达载体p15A-PrpsL-tetR-SsrA-Ptet-INO1-PTrc-MIOX-Udh的构建方法为：
(a)合成生长期启动子PrpsL序列，替换载体pTet-1中原有的Ptet启...

【专利技术属性】
技术研发人员：郝之奎，李建宋，王继栋，杨仲毅，游学秋，宋云平，张超，詹小远，高影，
申请(专利权)人：台州职业技术学院，
类型：发明
国别省市：浙江;33