一种可视化的非细胞体外显色体系及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于快速检测领域，公开了一种可视化的非细胞体外显色体系及其制备方法和应用，包括如下步骤：(1)工程菌的制备：利用Red重组法敲除大肠杆菌菌株中β‑半乳糖苷酶基因，获得工程菌；(2)工程菌裂解液的制备：测定上述工程菌的生长曲线，制备工程菌裂解液；(3)显色体系的配制：配制显色体系，包括工程菌裂解液、能量供应体系、氨基酸混合液和其他蛋白质合成所需的底物混合液；所述能量供应体系含磷酸烯醇式丙酮酸。此非细胞显色体系可应用于病原微生物快速检测。本发明专利技术所建立的非细胞显色体系，操作简便，耗时短，成本低，微量化并可肉眼观察反应情况。以该体系为基础，可实现通过肉眼观察来判断反应情况，在可视化快速检测方面具有广泛的应用前景。

A visualized non cell color system in vitro and its preparation and Application

【技术实现步骤摘要】
一种可视化的非细胞体外显色体系及其制备方法和应用
本专利技术涉及基因工程和合成生物学检测领域，具体涉及一种可视化的微量非细胞体外显色体系建立及应用。
技术介绍
非细胞表达体系是一种以细胞裂解液为基础的体外表达体系，一直被广泛应用于在体内较难表达的蛋白质的合成如膜蛋白、毒性蛋白，以及体外遗传网络的研究(JessicaG.Perez,JessicaC.Stark,andMichaelC.Jewett.Cell-FreeSyntheticBiology:EngineeringBeyondtheCell[J]ColdSpringHarbPerspectBiol.2016；1:8(12))。目前，已开发出原核和真核两大类非细胞表达系统，其中原核表达系统尤其是大肠杆菌表达系统，由于产率高、稳定性好和成本低的优势，一直备受青睐。在大肠杆菌非细胞表达体系中，大肠杆菌裂解液含有基因表达所需的最基本的物质。该体系的基因的转录一般由外源添加的T7RNA聚合酶调控，此外还需外源添加氨基酸、NTP及能量物质等蛋白质合成所需的底物。实验室常用的非细胞表达体系中涉及本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种可视化的非细胞体外显色体系的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：/n(1)工程菌的制备：/n利用Red重组法敲除大肠杆菌菌株中β-半乳糖苷酶基因，获得工程菌；/n(2)工程菌裂解液的制备：/n测定上述工程菌的生长曲线，制备工程菌裂解液；/n(3)显色体系的配制：/n配制显色体系，包括工程菌裂解液、能量供应体系、氨基酸混合液和其他蛋白质合成所需的底物混合液；所述能量供应体系含磷酸烯醇式丙酮酸。/n

【技术特征摘要】
1.一种可视化的非细胞体外显色体系的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)工程菌的制备：
利用Red重组法敲除大肠杆菌菌株中β-半乳糖苷酶基因，获得工程菌；
(2)工程菌裂解液的制备：
测定上述工程菌的生长曲线，制备工程菌裂解液；
(3)显色体系的配制：
配制显色体系，包括工程菌裂解液、能量供应体系、氨基酸混合液和其他蛋白质合成所需的底物混合液；所述能量供应体系含磷酸烯醇式丙酮酸。


2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述能量供应体系的浓度为20～28mM；所述氨基酸混合液的浓度为40～60mM。


3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述大肠杆菌菌株为BL21(DE3)；所述工程菌裂解液为敲除β-半乳糖苷酶基因的BL21(DE3)裂解液，即BL21(DE3)ΔlacZ裂解液，浓度为20～30％。


4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述氨基酸混合液为用亮氨酸、甲硫氨酸、缬氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、苏氨酸、甘氨酸、精氨酸、组氨酸、丙氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、异亮氨酸、脯氨酸、酪氨酸、丝氨酸、半胱氨酸、谷氨酸和谷氨酰胺加入水配成的等摩尔浓度的混合液。


5.根据权利要求1～...

【专利技术属性】
技术研发人员：王菊芳，孙秋丽，马毅，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：广东;44