一种重组人Betacellulin的制备方法技术

本发明专利技术涉及基因工程领域，具体涉及一种重组人Betacellulin的制备方法。该方法首先构建含有GB1标签的重组表达质粒，然后转化大肠杆菌构建工程菌株，通过IPTG诱导重组工程菌在无动物源培养基中高效表达融合蛋白，镍填料捕获融合蛋白并利用肠激酶在目的蛋白的N端的酶切位点进行特异性切割去除标签蛋白，切割后的蛋白具有与人天然Betacellulin保持一致的序列，最后采用反相精纯的方法得到目的蛋白。该制备方法简单快捷，生产条件温和、分离提取方便、整个过程工艺简单，具有明显的产业化应用前景，且制备得到的重组人Betacellulin纯度和活性均较高，为重组人Betacellulin的制备提供了一种新的思路。

A preparation method of recombinant human betacellulin

【技术实现步骤摘要】
一种重组人Betacellulin的制备方法
本专利技术涉及基因工程领域，具体涉及一种重组人Betacellulin的制备方法。
技术介绍
β细胞素蛋白(Betacellulin，也称为BTC蛋白)是一种来源于转基因小鼠的胰腺β肿瘤细胞产生的多肽因子，通过cDNA分析已清楚它的全长氨基酸序列。虽然，最初发现BTC蛋白是一种小鼠3T3细胞生长的促进因子，随后又发现它对血管平滑肌细胞和视网膜色素上皮细胞具有促进生长的活性(Shing等，Science，259：1604(1993年))。生理条件下人的BTC蛋白数量非常少，由于受到各种限制从组织中提取也非常困难。近年来，通过基因工程技术已经成功地生产了数量较多，价格也相对低廉的人BTC蛋白。而且已有报道BTC蛋白可用于治疗一些疾病如创伤、肿瘤和血管畸形，还可制备成诸如抗体或假性肽的竞争剂用于治疗一些由于平滑肌生长导致的疾病，如动脉粥样硬化和糖尿病视网膜病变。现有技术中，多采用基因工程方法制备BTC蛋白，主要是采用大肠杆菌和哺乳动物细胞进行表达。已有报道中，采用哺乳动物细胞表达B本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组人Betacellulin的制备方法，其特征在于，构建的重组表达质粒包含编码GB1标签蛋白的核苷酸序列SEQ ID NO:1。/n

【技术特征摘要】
1.一种重组人Betacellulin的制备方法，其特征在于，构建的重组表达质粒包含编码GB1标签蛋白的核苷酸序列SEQIDNO:1。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，构建的重组表达质粒还包含编码其他标签蛋白、蛋白酶识别位点和人Betacellulin的核苷酸序列SEQIDNO:2。


3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的其他标签蛋白是His-tag标签蛋白。


4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的蛋白酶识别位点是肠激酶酶切位点。


5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，还包含重组蛋白的表达过程，在无动物源培养基中进行种子培养和发酵表达...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡育龙，李利佳，古想娣，吴都，欧晓涛，蒋鹏，李晓平，陈小锋，
申请(专利权)人：东莞市东阳光生物药研发有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44