多肽及其应用制造技术

本发明专利技术提出了一种多肽。所述多肽与具有下列氨基酸序列的多肽相比，其N端具有修饰，所述修饰包括选自N端氨基酸的增加、甲基化、甲酰化、氨甲酰化、琥珀酰化、环化、丙酰化、十六烷酰化、十四烷化和乙酰化的至少之一，(1)具有SEQ ID NO：1‑6所示氨基酸序列的多肽；或(2)与(1)相比具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少99％同一性的多肽；或(3)与(1)相比具有一个或者多个氨基酸的取代、缺失和/或添加的多肽。根据本发明专利技术实施例的多肽既保持了BefA蛋白促进β细胞增殖的活性，又具有更高的稳定性，不易降解的特性，并且具有降糖、减重及保护肝脏的潜能。

【技术实现步骤摘要】
多肽及其应用优先权信息本专利技术请求于2020年1月2日向中国国家知识产权局提交的、专利申请号CN202010003240.2、申请名称为“多肽及其应用”的中国专利申请的优先权，并且其全部内容通过引用并入本专利技术。
本专利技术涉及生物医药领域，具体地，本专利技术涉及多肽及其应用，更具体地，本专利技术涉及多肽、提高BefA蛋白稳定性或制备BefA蛋白突变体的方法、融合蛋白、核酸、重组细胞和药物组合物及其在糖尿病等代谢疾病领域的应用。
技术介绍
胰岛素分泌细胞的缺失一直被认为是I型糖尿病的病因之一。在I型糖尿病中，免疫系统错误地攻击和破坏β细胞。近年来，研究者发现，缺乏具有功能的β细胞也是II型糖尿病的一个重要诱因，II型糖尿病病人晚期胰岛功能逐渐下降。因此，开发能够增加健康β细胞数量的药物对于解决I型糖尿病或II型糖尿病晚期是非常重要的，是糖尿病研究的主要重点。同时，糖尿病病人常伴随着肥胖、脂肪肝、肝功能受损等代谢综合征，所以，开发临床获益更多的药物，如减重，保护肝功等的药物，也是非常必要的。目前市场上的降糖生物药主要包括：胰岛素及其类似物、GLP-1和GLP-1类似物，如利拉鲁肽，杜拉糖肽。胰岛素及其类似物作用机制是一个针对I型糖尿病的直接补充胰岛素(或类似物)作用，达到胰岛素降糖的作用，但是存在低血糖风险，且其没有降低2型糖尿病患者体重，保护肝功能的作用。GLP-1及其类似物，是GLP-1的受体激动剂，通过激动GLP-1的受体而发挥降糖作用。GLP-1的作用方式是增加胰岛素的分泌，抑制高血糖素的分泌、延缓胃排空，减少进食量。但该类药物半衰期短，有恶心、呕吐等消化道不良反应。以上药物，虽能起到降糖作用，但是无法完全逆转受损的胰岛，患者往往需要长期给药，增加了医药支出和降低了患者用药体验，长期服药也有可能导致药物耐受现象。为了改善现有降糖药物的治疗效果，减少副作用，开发出具有改善或者逆转受损胰岛组织的药物，从根本上逆转糖尿病的发展，显得尤为关键，治疗糖尿病的药物仍需要进一步开发。JenniferHamptonHill等在研究斑马鱼早期幼虫发育过程中，发现胰腺β细胞群的正常扩增需要肠道微生物群，而特定的细菌可以恢复β细胞数量到正常水平。经过实验筛查发现这些细菌共享一类以前未被描述的蛋白质，命名为BefA(β细胞增殖因子A)。BefA蛋白可以促进斑马鱼幼虫发育过程中β细胞增殖的活性，故对BefA蛋白进行研究。
技术实现思路
本申请是基于专利技术人对以下事实和问题的发现和认识作出的：现有技术中，体外原核细胞表达的BefA蛋白具有促进β细胞增殖的活性，但BefA容易降解，难以得到高纯度的完整分子量的BefA蛋白，因此大大限制了BefA蛋白的体内外药效研究以及临床应用。本申请的研发人员在BefA蛋白药物的开发过程中意外而惊喜地发现，对BefA蛋白的N端进行修饰，包括在N端增加氨基酸，或使N端氨基酸甲基化、甲酰化、氨甲酰化、琥珀酰化、环化、丙酰化、十六烷酰化、十四烷化和乙酰化，可大幅提高BefA蛋白的稳定性，纯化后BefA蛋白纯度可达95％以上，且获得的该BefA蛋白突变体具有促进β细胞增殖的活性。为此，在本专利技术的第一方面，本专利技术提出了一种多肽。根据本专利技术的实施例，所述与具有下列氨基酸序列的多肽相比，其N端具有修饰，所述修饰包括选自N端氨基酸的增加、甲基化、甲酰化、氨甲酰化、琥珀酰化、环化、丙酰化、十六烷酰化、十四烷化和乙酰化的至少之一。(1)具有SEQIDNO：1-6所示氨基酸序列的多肽；或(2)与(1)相比具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少99％同一性的多肽；或(3)与(1)相比具有一个或者多个氨基酸的取代、缺失和/或添加的多肽。DWAKVKAAATELGNAVSDTSKEAWQSVTDFSKATWASVSQWGSEAFNTAGAWTDKSVATGKEWLAVADKKLDEMLEPKTADEARLALNTMADTALVRLFNEQPSAKLLFDKAYGYAVFDSRKFSLMLHTNQGAGVAVNRATGKHTYMKMFGAGLAAGLGGKFYQQVILFEDKARFDAFVSQGWEATSEVGAVAGKESAELTAKYNGGMAIYQIGEKGLLLDANISGSKYWVDKDLTR(SEQIDNO:1)。DWAKLKAAASDLGAAVSETSKEVWQDVSDFSKKSWASISAWGEEAFNTAGVWTDKSIATGKEWLKAADKELNEMLNPKTAKEARIAINTMADTALIRLFNEQPSAKLLFDKAYGYAVFDSRKFSLMLHTNQGAGVAVNRKTGKHTYMKMFGAGLAAGIGGKFYQQVILFEDKARFDAFVTQGWEATSEVGVVAGKESAELTAKYNGGMAIYQIGEKGLLLDANISGSKYWIDKDLTETSR(SEQIDNO:2)。DWAKLKAAASDLGAAVSETSKEVWQDVSDFSKKSWASISAWGEDAFNTAGVWTDKSIATGKEWLKAADKELNEMLNPKTAKEARIALNTMADTALIRLFNEQPSAKLLFDKAYGYAVFDSRKFSLMLHTNQGAGVAVNRKTGKHTYMKMFGAGLAAGIGGKFYQQVILFEDKARFDAFVTQGWEATSEVGVVAGKESAELTAKYNGGMAIYQIGEKGLLLDANISGSKYWIDKDLTETSR(SEQIDNO:3)。DWAKVKAAATELGNAVSDTSKEAWQSVTDFSKATWASVSQWGEEAFNTAGAWTDKSVATGKEWLAVADKKLDEMLEPKTADEARLALNTMADTALVRLFNEQPSAKLLFDKAYGYAVFDSRKFSLMLHTNQGAGVAVNRATGKHTYMKMFGAGLAAGLGGKFYQQVILFEDKARFDAFVSQGWEATSEVGAVAGKESAELTAKYNGGMAIYQIGEKGLLLDANISGSKYWVDKDLTR(SEQIDNO:4)。GCSAQGDTASQQRASIQKMRNETLTKLYTLQPEARSDIQHAKGYAVFANNSSKILLFGFGSGYGVVRDTASGKDTYMKMAQGGAGLGIGIKQQRTVLVFHDKAALDRFIRQGYMVGADANAAAKYDDKGIAPIAASANGVAKDTSSLPSKVNVYEITDKGLAAQAMVNGYKYWPDDELNP(SEQIDNO:5)。SWEEIKKAASDLGQKVSEGSKKAWEDVTDFSETWDSVSEWGEDAFNTAGEWTDASIEKGKEWLEAGEAKLNEMLEPETPEEARLALDTMSDTALVRLFNEEPSAKLLFDTAYGYAVFDSRKFSLMLHTNQGAGVAVDRKTGKRTYMKMFGGLALGLGGKFYQQLIF本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种多肽，其特征在于，所述多肽与具有下列氨基酸序列的多肽相比，其N端具有修饰，所述修饰包括选自N端氨基酸的增加、甲基化、甲酰化、氨甲酰化、琥珀酰化、环化、丙酰化、十六烷酰化、十四烷化和乙酰化的至少之一，/n(1)具有SEQ ID NO：1-6所示氨基酸序列的多肽；或/n(2)与(1)相比具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少99％同一性的多肽；或/n(3)与(1)相比具有一个或者多个氨基酸的取代、缺失和/或添加的多肽。/n

【技术特征摘要】
20200102 CN 20201000324021.一种多肽，其特征在于，所述多肽与具有下列氨基酸序列的多肽相比，其N端具有修饰，所述修饰包括选自N端氨基酸的增加、甲基化、甲酰化、氨甲酰化、琥珀酰化、环化、丙酰化、十六烷酰化、十四烷化和乙酰化的至少之一，
(1)具有SEQIDNO：1-6所示氨基酸序列的多肽；或
(2)与(1)相比具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少99％同一性的多肽；或
(3)与(1)相比具有一个或者多个氨基酸的取代、缺失和/或添加的多肽。


2.根据权利要求1所述的多肽，其特征在于，所述N端氨基酸的增加包括N端增加一个或一个以上的氨基酸，且增加的氨基酸至少有一个甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、缬氨酸、丝氨酸、苏氨酸、谷氨酸、组氨酸或脯氨酸；优选甘氨酸、丙氨酸、甲硫氨酸、缬氨酸或异亮氨酸；更优选甘氨酸。


3.根据权利要求1或2所述的多肽，其特征在于，所述的N端氨基酸的增加为N端增加一个氨基酸，所述氨基酸为甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、缬氨酸、丝氨酸、苏氨酸、谷氨酸、组氨酸或脯氨酸；优选甘氨酸、丙氨酸、甲硫氨酸、缬氨酸或异亮氨酸；更优选甘氨酸。


4.根据权利要求1～3中任一项所述的多肽，其特征在于，所述多肽具有SEQIDNO:7所示的氨基酸序列。


5.一种提高BefA蛋白稳定性或制备BefA蛋白突变体的方法，其特征在于，对BefA蛋白氨基酸序列的N端进行修饰，所述修饰包括选自N端氨基酸的增加、甲基化、甲酰化、氨甲酰化、琥珀酰化、环化、丙酰化、十六烷酰化、十四烷化和乙酰化的至少之一。


6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述BefA蛋白具有
(1)SEQIDNO：1-6所示氨基酸序列；或
(2)与(1)相比具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少99％同一性的序列；或
(3)与(1)相比具有一个或者多个氨基酸的取代、缺失和/或添加的氨基酸序列。


7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述N端氨基酸的增加包括N端增加一个或一个以上的氨基酸，且增加的氨基酸至少有一个甘氨酸、丙氨酸、异亮氨酸、甲硫氨酸、缬氨酸、丝氨酸、苏氨酸、谷氨酸、组氨酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：李利佳，古想娣，吴都，郭林峰，李晓平，胡育龙，李宇晟，李玉，许玲华，李静，陈小锋，李文佳，
申请(专利权)人：东莞市东阳光生物药研发有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44