一种马链球菌兽疫亚种的检测试剂盒及检测方法技术

本发明专利技术公开了一种马链球菌兽疫亚种的检测试剂盒及检测方法，该检测试剂盒包括包被有重组SzP蛋白的酶标板，SzP蛋白的编码基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.1，终止液，含有检测用抗体的液相，所述的检测用抗体包括用于检测抗体的酶标二抗。本发明专利技术还公开了一种马链球菌兽疫亚种重组SzP蛋白的制备方法，该重组蛋白回收率、纯度和活性均较高。本发明专利技术提供的一种马链球菌兽疫亚种的检测试剂盒及检测方法具有制备成本低，且检测特异性、灵敏性及可重复性均较好的优点。

【技术实现步骤摘要】
一种马链球菌兽疫亚种的检测试剂盒及检测方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种马链球菌兽疫亚种的检测试剂盒及检测方法。
技术介绍
马链球菌兽疫亚种(Streptococcusequissp.zooepidemicus)是动物链球菌病的主要病原之一。马链球菌兽疫亚种可感染马属动物、猪、牛、犬和猫等多种动物，人类食用该菌污染的食品或与患病动物接触均有可能被感染。马链球菌兽疫亚种在我国主要感染马、驴和猪，临床表现为关节炎、败血症、肺炎和脑膜炎，一般呈地方流行性。类M蛋白具有多种生物学功能，能介导兽疫亚种和宿主细胞的粘附作用，具体而言，体内的H因子是血浆内一种重要的调节蛋白，与类M蛋白结合能抑制补体C3b对链球菌的吸附，从而起到抑制机体吞噬细胞对链球菌吞噬的作用。类M蛋白N末端带有负电荷，可排斥表面带负电荷的吞噬细胞，如单核巨噬细胞、嗜中性粒细胞等，从而抑制以上吞噬细胞对其的吞噬作用据此可知类M蛋白是兽疫亚种重要的毒力因子。酶联免疫吸附试验是常用免疫学诊断方法，是根据抗原抗体反应的特异性和酶催化反应的高敏感性而建立起来的免疫检测技术。其基本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种马链球菌兽疫亚种重组SzP蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1、SzP蛋白原核表达系统的构建；/nS2、重组SzP蛋白的诱导表达；/nS3、重组SzP蛋白的分离纯化；/n所述SzP蛋白的编码基因的核苷酸序列为SEQ ID NO.1；所述步骤S2中SzP重组蛋白的表达形式为可溶性蛋白，所述步骤S3具体包含：将诱导好的菌液离心收集沉淀，用磷酸盐缓冲液悬浮菌体，超声破碎，离心取上清，经0.45μm滤膜过滤后，加入终浓度为0.3-0.53mg/mL的鞣花酸和终浓度为0.16-0.24mg/mL的白桦脂醇，得到粗重组SzP蛋白；使用Ni-NTA His·Bind树脂的蛋白纯化层析柱...

【技术特征摘要】
1.一种马链球菌兽疫亚种重组SzP蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、SzP蛋白原核表达系统的构建；
S2、重组SzP蛋白的诱导表达；
S3、重组SzP蛋白的分离纯化；
所述SzP蛋白的编码基因的核苷酸序列为SEQIDNO.1；所述步骤S2中SzP重组蛋白的表达形式为可溶性蛋白，所述步骤S3具体包含：将诱导好的菌液离心收集沉淀，用磷酸盐缓冲液悬浮菌体，超声破碎，离心取上清，经0.45μm滤膜过滤后，加入终浓度为0.3-0.53mg/mL的鞣花酸和终浓度为0.16-0.24mg/mL的白桦脂醇，得到粗重组SzP蛋白；使用Ni-NTAHis·Bind树脂的蛋白纯化层析柱纯化重组蛋白SzP，得到纯化的重组SzP蛋白。


2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤S1具体包括：以SEZ基因组为模板，对SEZszp基因进行扩增，利用NdeⅠ和XhoⅠ对得到的PCR产物与表达载体pET-28a(+)进行双酶切后，酶切产物回收后进行连接反应，再将连接产物导入大肠杆菌BL21感受态细胞中。


3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤S3中使用...

【专利技术属性】
技术研发人员：董建宝，朱伟，高楠楠，索佳佳，袁东芳，杜燕，
申请(专利权)人：山东畜牧兽医职业学院，
类型：发明
国别省市：山东;37