【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】向性修饰的重组病毒粒子和其用于将遗传物质靶向引入至人类细胞中的用途序列表的引用经由EFSWEB作为文本文件提交编写在文件10359WO01_ST25.txt中的序列表为183千字节，于2018年6月27日创建，且以引用的方式并入本文中。
本文的公开内容大体上涉及适用于将遗传物质靶向引入至细胞中的向性修饰的重组病毒粒子，和包括其的组合物。
技术介绍
将基因递送至特定靶细胞中已成为用于潜在治疗多种慢性和遗传疾病的现代医学中最重要的技术之一。迄今为止，基因疗法的临床应用的进展受到缺乏理想基因递送媒剂的限制。为了实现成功治疗，基因递送媒剂必须能够转导靶细胞，同时避免转导非靶细胞。确切地说，当病毒的天然向性不满足所需的治疗靶组织或细胞类型时，需要重组病毒粒子，其中天然向性被消除或减弱且所需向性被成功地工程化。(Buchholz等人，)近年来，已使用非包膜病毒(例如包括由无包膜(例如脂质双层)的病毒衣壳蛋白形成的衣壳的病毒)，如腺相关病毒(AAV)和腺病毒(Ad)，以及包膜病毒(例如衣壳被脂质双层包围的病毒)，如逆转录病毒、慢病毒和单纯疱疹病毒实现载体开发的最大进展。基于AAV的载体已成为许多研究的焦点，因为AAV仅具有轻微免疫原性且能够在体内转导大范围的物种和组织而无毒性迹象。AAV为小的、无包膜的单链DNA病毒。AAV基因组为4.7kb，且其特征在于两个反向末端重复序列(ITR)和两个分别编码Rep蛋白和Cap蛋白的开放阅读框。两个ITR为AAV复制和衣壳化所需的唯一顺...
【技术保护点】
1.一种重组病毒衣壳蛋白，其包括可操作地连接于所述衣壳蛋白的蛋白质:蛋白质结合对的第一成员，任选地其中所述第一成员为肽标签，且任选地其中所述第一成员和/或突变降低或消除所述衣壳蛋白的天然向性。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170627 US 62/525,7081.一种重组病毒衣壳蛋白，其包括可操作地连接于所述衣壳蛋白的蛋白质:蛋白质结合对的第一成员，任选地其中所述第一成员为肽标签，且任选地其中所述第一成员和/或突变降低或消除所述衣壳蛋白的天然向性。
2.根据权利要求1所述的重组病毒衣壳蛋白，其进一步包括所述蛋白质:蛋白质结合对的第二同源成员，其中所述第一和第二成员由共价键结合。
3.根据权利要求2所述的重组病毒衣壳蛋白，其中所述共价键为异肽键。
4.根据权利要求2至3中任一项所述的重组病毒衣壳蛋白，其中所述第二成员可操作地连接于靶向配体，任选地其中所述靶向配体为结合部分。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的重组病毒衣壳蛋白，其中所述第一成员由将所述第一成员连接至所述衣壳蛋白的第一和/或第二连接子侧接，且其中所述第一和/或第二连接子的长度各自独立地为至少一个氨基酸。
6.根据权利要求5所述的重组病毒衣壳蛋白，其中所述第一和第二连接子不相同。
7.根据权利要求5所述的重组病毒衣壳蛋白，其中所述第一和第二连接子相同且长度为10个氨基酸。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的重组病毒衣壳蛋白，其进一步包括在涉及所述病毒衣壳蛋白与其天然受体的结合的氨基酸位置处的突变，其中所述突变包括将异源肽插入至所述衣壳蛋白中、用异源肽取代所述衣壳蛋白的一个或多个氨基酸、所述衣壳蛋白的一个或多个氨基酸的缺失或其组合。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的重组病毒衣壳蛋白，其中所述重组病毒衣壳蛋白的转导效率：
(i)降低10％，
(ii)降低20％，
(iii)降低30％，
(iv)降低40％，
(v)降低50％，
(vi)降低60％，
(vii)降低70％，
(viii)降低80％，
(ix)降低90％，或
(x)被消除。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的重组病毒衣壳蛋白，其中所述病毒衣壳蛋白衍生自腺相关病毒(AAV)的衣壳基因，其中所述衣壳基因编码AAVVP1、VP2和/或VP3衣壳蛋白，且任选地进一步包括在涉及所述衣壳的结合的氨基酸位置处的突变。
11.根据权利要求10所述的重组病毒衣壳蛋白，其中所述AAV选自由以下组成的群组：AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8和AAV9。
12.根据权利要求10所述的重组病毒衣壳蛋白，其中所述腺相关病毒为AAV2。
13.根据权利要求10所述的重组病毒衣壳蛋白，其中所述腺相关病毒为AAV9。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的重组病毒衣壳蛋白，其中所述蛋白质:蛋白质结合对为：
(i)SpyTag:SpyCatcher，
(ii)SpyTag:KTag，
(iii)Isopeptag:pilin-C，
(iv)SnoopTag:SnoopCatcher，或
(v)SpyTag002:SpyCatcher002。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的重组病毒衣壳蛋白，其中所述第一成员和任何连接子在一起的长度不超过约50个氨基酸。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的重组病毒衣壳蛋白，其中所述第一成员为SpyTag。
17.根据权利要求2至16中任一项所述的重组病毒衣壳蛋白，其中所述第二同源成员为SpyCatcher。
18.根据权利要求2至16中任一项所述的重组病毒衣壳蛋白，其中所述第二同源成员为KTag。
19.根据权利要求2至15中任一项所述的重组病毒衣壳蛋白，其中所述第一成员为KTag且所述第二同源成员为SpyTag。
20.根据权利要求2至15中任一项所述的重组病毒衣壳蛋白，其中所述第一成员为SnoopTag且所述第二同源成员为SnoopCatcher。
21.根据权利要求2至15中任一项所述的重组病毒衣壳蛋白，其中所述第一成员为isopeptag且所述第二同源成员为Pilin-C。
22.根据权利要求2至15中任一项所述的重组病毒衣壳蛋白，其中所述第一成员为SpyTag002且所述第二同源成员为SpyCatcher002。
23.根据权利要求1至22中任一项所述的重组病毒衣壳蛋白，其中相比于包括适当靶向配体的所述病毒衣壳蛋白或衣壳，所述重组病毒衣壳蛋白或包括所述重组病毒衣壳蛋白的病毒衣壳在不存在所述适当靶向配体的情况下具有减少至消除的对靶细胞的感染。
24.根据权利要求4至23中任一项所述的重组病毒衣壳蛋白，其中所述结合部分为抗体或其部分。
25.根据权利要求24所述的重组病毒衣壳蛋白，其中所述抗体或其部分与SpyCatcher融合。
26.根据权利要求25所述的重组病毒衣壳蛋白，其中所述抗体或其部分与连接子在C端融合，且所述连接子与SpyCatcher在所述连接子的C端融合。
27.根据权利要求26所述的重组病毒衣壳蛋白，其中所述连接子包括阐述为SEQIDNO:48(GSGESG)的序列。
28.根据权利要求4至27中任一项所述的重组病毒衣壳蛋白，其中所述靶向配体包括阐述为SEQIDNO:46的氨基酸序列。
29.根据权利要求4至28中任一项所述的重组病毒衣壳蛋白，其中所述靶向配体特异性结合细胞表面分子，任选地其中细胞表面标记为
(i)脱唾液酸糖蛋白1(ASGR1)，
(ii)ENTPD3，
(iii)PTPRN，
(iv)CD20，
(v)CD63，或
(vi)Her2。
30.根据权利要求29所述的重组病毒衣壳蛋白，其中所述细胞表面分子为脱唾液酸糖蛋白1(ASGR1)。
31.根据权利要求29所述的重组病毒衣壳蛋白，其中所述细胞表面分子为CD63。
32.根据权利要求29所述的重组病毒衣壳蛋白，其中所述细胞表面分子为ENTDP3。
33.一种重组病毒衣壳，其包括根据权利要求1至32中任一项所述的重组病毒衣壳蛋白。
34.根据权利要求33所述的重组病毒衣壳，其进一步包括缺少特异性结合对的任何成员的参考病毒衣壳蛋白。
35.根据权利要求34所述的重组病毒衣壳，其中所述重组病毒衣壳蛋白和所述参考病毒衣壳蛋白各自包括涉及病毒粒...
【专利技术属性】
技术研发人员：L·萨宾，C·舍恩赫尔，A·N·伊科诺米迪斯，C·基拉索斯，A·J·莫菲，
申请(专利权)人：瑞泽恩制药公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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