与MET结合的抗MET抗体、双特异性抗原结合分子及其使用方法技术

技术编号：41392095 阅读：4 留言：0更新日期：2024-05-20 19:14

本申请提供了结合MET的抗体和双特异性抗原结合分子及其使用方法。所述双特异性抗原结合分子包含第一和第二抗原结合结构域，其中所述第一和第二抗原结合结构域结合人MET的细胞外结构域的两种不同(优选非重叠的)表位。所述双特异性抗原结合分子能够阻断人MET与其配体HGF之间的相互作用。例如，与仅包含双特异性分子的一个抗原结合结构域的单价抗原结合分子相比，双特异性抗原结合分子可以表现出最小的或没有MET激动剂活性，所述单价抗原结合分子倾向于发挥不希望的MET激动剂活性。还包括抗体‑药物缀合物(ADC)，其包含与细胞毒性剂、放射性核素或其他部分连接的本申请提供的抗体或双特异性抗原结合分子，以及通过向受试者施用双特异性抗原结合分子或其ADC来治疗受试者的癌症的方法。

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【技术实现步骤摘要】

专利
本专利技术涉及特异性结合肝细胞生长因子受体(c-met或met)并调节met信号转导的抗体、双特异性抗体及其抗原结合片段，以及这些抗体的抗体-药物偶联物，及其使用方法。

技术介绍

1、肝细胞生长因子(hgf)(也称为离散因子[sf])是异二聚体旁分泌生长因子，其通过与hgf受体(hgfr)相互作用而发挥其活性。hgfr是c-met癌基因的产物，也称为met。met是一种受体酪氨酸激酶，由细胞外α链通过二硫桥键连接到跨膜β链组成。hgf与met的结合激活met的激酶催化活性，导致β链的tyr 1234和tyr 1235的磷酸化以及随后的下游信号传导通路的激活。

2、met和/或hgf过表达、激活或扩增已被证明与非小细胞肺癌(nsclc)、胃癌、卵巢癌、胰腺癌、甲状腺癌、乳腺癌、头颈癌、结肠癌和肾癌有关(sierra和tsao,ther.adv.med.oncol.,3(1增刊):s21-s35,2011)。met扩增被认为是nsclc和食管胃恶性肿瘤中肿瘤发生的关键驱动因素。此外，导致met外显子14缺失的突变已被描述为nsclc的一个亚组中的致癌驱动因素。具有met基因扩增的肿瘤细胞系的生长和存活高度依赖于met。临床前数据提示，met信号传导参与了多种肿瘤类型如nsclc、结肠直肠癌和头颈部鳞状细胞癌(hnscc)对靶向疗法的抗药性。

3、临床前和最近的临床结果均表明，携带这些基因改变的肿瘤对met抑制剂有反应，证实met是癌症驱动因素。各种单价met阻断抗体正在临床开发中用于治疗各种癌症(

4、仍然存在对改进的抗癌药物的显著未满足的医学需求，所述抗癌药物有效地阻断配体依赖性和配体非依赖性met信号传导。

5、专利技术简述

6、本文提供结合人c-met受体蛋白的抗体、抗体的抗原结合片段、二价单特异性抗体的组合和双特异性抗体(met x met)。所述抗体尤其可用于靶向表达met的肿瘤细胞。抗met抗体及其抗原结合部分可以以未修饰的形式单独使用，或者可以作为抗体-药物缀合物或双特异性抗体的一部分包括在内。

7、通过审阅随后的详细描述，其他实施方案将变得显而易见。

8、附图简述

9、图1是说明本文公开的272种示例性met x met双特异性抗体的组分的矩阵。矩阵的每个编号单元表示包含“d1”抗原结合结构域和“d2”抗原结合结构域的独特双特异性抗体，其中所述d1抗原结合结构域包含来自沿y轴列出的相应抗met抗体的免疫球蛋白可变结构域(hcvr/lcvr氨基酸序列对)或cdr，并且其中所述d2抗原结合结构域包含来自沿x轴列出的相应抗met抗体的免疫球蛋白可变结构域(hcvr/lcvr氨基酸序列对)或cdr。

10、图2是基于荧光素酶的报告分子测定的示意图，所述测定用于评估在含有sre-荧光素酶报告基因构建体的hek293t细胞中，抗体诱导的met通路激活或抗体对hgf诱导的通路激活的阻断作用。

11、图3(a-b)是描绘相对光度单位(rlu)的线图，其表示随着抗体浓度(log摩尔每升)而改变的sre-荧光素酶表达。实心方块(■)代表亲本二价单特异性抗体h4h13306p2，实心金字塔(▲)代表亲本二价单特异性抗体h4h13312p2，实心圆(●)代表单价抗体，实心菱形(◆)代表同种型对照，实心倒金字塔代表无配体。图3a描绘了只有抗体而不含hgf配体的情况。图3b描绘了抗体加hgf配体。

12、图4(a-b)是描绘相对光度单位(rlu)的线图，其表示随着抗体浓度(log摩尔每升)而改变的sre-荧光素酶表达。实心方块(■)代表抗met单价抗体，实心圆(●)代表met xmet双特异性抗体，实心菱形(◆)代表亲本抗体h4h13312p2。图4a描绘了只有抗体而不含hgf配体的情况。图4b描绘了抗体加hgf配体。

13、图5是条形图，其描绘了随着用人二价单特异性抗met抗体1-18、对照抗体和抗met单价抗体的处理而改变的met扩增的胃癌snu5细胞的相对细胞生长。出于比较目的，抗体8(横坐标)是亲本抗体h4h13306p2，抗体11(横坐标)是亲本抗体h4h13312p2。

14、图6(a-b)含有条形图，其描绘了随着用met x met双特异性抗体、对照抗体和抗met单价抗体的处理而改变的met扩增的细胞的相对细胞生长。图6a描绘了snu5细胞的相对生长，其随着用对照抗体、0.1、1和10μg/ml的单价抗体和0.1、1和10μg/ml的met x met双特异性抗体的处理而改变。图6b描绘了ebc-1细胞的相对生长，其随着用对照抗体和0.1和1μg/ml的met x met双特异性抗体的处理而改变。

15、图7(a-b)描绘了用对照抗体和met x met双特异性抗体处理后从hs746t细胞提取的pmet(磷酸化met)、met、perk(磷酸化erk)和微管蛋白(用于上样对照)的免疫印迹(图7a)，和用met x met双特异性抗体处理0、2和6小时后，hs746t细胞中met(和微管蛋白作为上样对照)的表达(图7b)。

16、图8描绘了用对照抗体、met x met双特异性抗体、抗met单特异性二价亲本抗体1、抗met单特异性二价亲本抗体2和亲本抗体1和2的组合处理后，从hs746t细胞提取的pmet、met、perk和微管蛋白(用于上样对照)的免疫印迹。

17、图9描绘了用对照抗体和met x met双特异性抗体处理2、6和18小时后，hs746t细胞中met(和微管蛋白作为上样对照)的表达的免疫印迹。

18、图10(a-b)描绘了用对照抗体和met x met双特异性抗体处理后，从snu5细胞提取的pmet、met、perk和微管蛋白(用于上样对照)的免疫印迹(图10a)；和用对照抗体和抗met单价抗体处理后，snu5细胞中met(和微管蛋白作为上样对照)的表达(图10b)。

19、图11描绘了用对照抗体和met x met双特异性抗体处理后从ebc-1细胞提取的pmet、met、perk和微管蛋白(用于上样对照)的免疫印迹。

20、图12是描绘在用对照抗体(实心方块■)、met单价抗体(实心圆●)本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物具有下式其中，R1是H、酰基、芳基氧羰基、杂芳基羰基或烷基氧羰基，其中每一者任选地被取代。

2.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物具有下式其中，R2是H、酰基、芳基氧羰基、杂芳基羰基或烷基氧羰基，其中每一者任选地被取代。

3.如权利要求2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物具有下式

4.如权利要求3所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物具有下式

5.如权利要求4所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物具有下式

6.如权利要求5所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物具有下式

7.一种制备具有下式的化合物或其药学上可接受的盐的方法

8.一种制备具有下式的化合物或其药学上可接受的盐的方法

9.一种制备具有下式的化合物或其药学上可接受的盐的方法

10.根据权利要求7-9中任一项所述的方法制备的产品。

【技术特征摘要】

1.一种化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物具有下式其中，r1是h、酰基、芳基氧羰基、杂芳基羰基或烷基氧羰基，其中每一者任选地被取代。

2.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物具有下式其中，r2是h、酰基、芳基氧羰基、杂芳基羰基或烷基氧羰基，其中每一者任选地被取代。

3.如权利要求2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物具有下式

4.如权利要求3所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所...

【专利技术属性】
技术研发人员：R·巴布，G·陈，C·戴利，J·达席尔瓦，D·麦克唐纳，T·尼托利，
申请(专利权)人：瑞泽恩制药公司，
类型：发明
国别省市：

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