包括腺病毒相关病毒多核苷酸的真核细胞制造技术

本发明专利技术提供了真核细胞，如哺乳动物细胞，所述真核细胞包括腺相关病毒(AAV)多核苷酸，包含AAV衣壳蛋白(Cap)，并且能够表达由所述AAV多核苷酸编码的多肽，并且由此能够产生AAV，包含重组AAV。所述真核细胞也可以包括腺病毒(Ad)多核苷酸。本发明专利技术还提供了在真核细胞如CHO细胞、HEK 293细胞和BHK细胞中表达AAV多核苷酸以及Ad多核苷酸的方法。本发明专利技术进一步提供了本文所描述的其它产物和方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】

本专利技术提供了真核细胞，所述真核细胞包括腺相关病毒(aav)多核苷酸，包含aav衣壳蛋白(cap)。所述细胞能够表达由所述aav多核苷酸编码的多肽，并且由此能够产生aav，包含重组aav。所述真核细胞也可以包括腺病毒(ad)多核苷酸。本专利技术还提供了在真核细胞中表达aav多核苷酸以及ad多核苷酸的方法。本专利技术还提供了用于利用真核细胞产生重组腺相关病毒的方法，所述真核细胞表达由多核苷酸编码的aav和ad多肽以及通过这些专利技术方法产生的重组aav。本专利技术进一步提供了本文所描述的其它产物和方法。对电子序列表的引用本申请含有已经以.xml格式电子提交并且特此通过引用以其整体并入的序列表。创建于2022年10月5日的所述.xml副本命名为135975-61702.xml并且大小为229,879字节。此.xml文件中含有的序列表是说明书的一部分，并且特此通过引用整体并入本文。

技术介绍

1、腺相关病毒(aav)是一种无包膜的单链dna病毒，并且被用作研究和治疗两者的基因递送载体。weitzman和linden,《腺相关病毒生物学(adeno-associ本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种多核苷酸，其包括(i)启动子，(ii)内含子，(iii)内部核糖体进入位点，(iv)编码腺相关病毒(AAV)Cap蛋白的多核苷酸，以及(v)聚腺苷酸化位点，其中所述多核苷酸允许产生AAV Cap VP2和VP3。

2.根据权利要求1所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸处于CHO细胞中，并且所述(i)启动子、所述(ii)内含子、所述(iii)内部核糖体进入位点和所述(iv)编码AAV Cap蛋白的多核苷酸可操作地连接。

3.根据权利要求2所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸被整合到CHO细胞基因组或BHK细胞基因组中。

4.根据权利要求1所述的多核苷酸，...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

1.一种多核苷酸，其包括(i)启动子，(ii)内含子，(iii)内部核糖体进入位点，(iv)编码腺相关病毒(aav)cap蛋白的多核苷酸，以及(v)聚腺苷酸化位点，其中所述多核苷酸允许产生aav cap vp2和vp3。

2.根据权利要求1所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸处于cho细胞中，并且所述(i)启动子、所述(ii)内含子、所述(iii)内部核糖体进入位点和所述(iv)编码aav cap蛋白的多核苷酸可操作地连接。

3.根据权利要求2所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸被整合到cho细胞基因组或bhk细胞基因组中。

4.根据权利要求1所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸处于hek 293细胞中，并且所述(i)启动子、所述(ii)内含子、所述(iii)内部核糖体进入位点和所述(iv)编码aav cap蛋白的多核苷酸可操作地连接。

5.根据权利要求2所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸被整合到hek 293细胞基因组或人羊膜细胞基因组中。

6.根据权利要求1所述的多核苷酸，其进一步包括操纵子。

7.根据权利要求6所述的多核苷酸，其中所述启动子是cmv启动子，并且所述操纵子是tet操纵子。

8.一种多核苷酸，其包括(i)启动子，(ii)内含子，(iii)第一内部核糖体进入位点，(iv)编码aav cap蛋白的第一多核苷酸，(v)第二内部核糖体进入位点，(vi)编码aav cap蛋白的第二多核苷酸，以及(vii)聚腺苷酸化位点。

9.根据权利要求8所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸处于cho细胞中，并且所述(i)启动子、所述(ii)内含子、所述(iii)第一内部核糖体进入位点、所述(iv)编码aav cap蛋白的第一多核苷酸、(v)第二内部核糖体进入位点和所述(vi)编码aav cap蛋白的第二多核苷酸可操作地连接。

10.根据权利要求9所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸被整合到cho细胞基因组或bhk细胞基因组中。

11.根据权利要求8所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸处于hek 293细胞中，并且所述(i)启动子、所述(ii)内含子、所述(iii)第一内部核糖体进入位点、所述(iv)编码aav cap蛋白的第一多核苷酸、(v)第二内部核糖体进入位点和所述(vi)编码aav cap蛋白的第二多核苷酸可操作地连接。

12.根据权利要求11所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸被整合到hek 293细胞基因组或人羊膜细胞基因组中。

13.根据权利要求8所述的多核苷酸，其进一步包括操纵子。

14.根据权利要求13所述的多核苷酸，其中所述启动子是cmv启动子，并且所述操纵子是tet操纵子。

15.一种多核苷酸，其包括(i)启动子，(ii)内含子，(iii)编码aav cap蛋白的多核苷酸，以及(iv)聚腺苷酸化位点，其中所述多核苷酸允许在被表达时产生aav cap vp1蛋白。

16.根据权利要求15所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸处于cho细胞中，并且所述(i)启动子、所述(ii)内含子和所述(iii)编码aav cap蛋白的多核苷酸可操作地连接。

17.根据权利要求16所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸被整合到cho细胞基因组或bhk细胞基因组中。

18.根据权利要求15所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸处于hek 293细胞中，并且所述(i)启动子、所述(ii)内含子和所述(iii)编码aav cap蛋白的多核苷酸可操作地连接。

19.根据权利要求16所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸被整合到hek 293细胞基因组或人羊膜细胞基因组中。

20.根据权利要求15所述的多核苷酸，其进一步包括操纵子。

21.根据权利要求20所述的多核苷酸，其中所述启动子是cmv启动子，并且所述操纵子是tet操纵子。

22.一种多核苷酸，其包括(i)启动子，(ii)内部核糖体结合位点，(iii)编码aav cap蛋白的多核苷酸，以及(iv)聚腺苷酸化位点，其中所述多核苷酸允许在被表达时产生aav vp1cap蛋白。

23.根据权利要求22所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸处于cho细胞中，并且所述(i)启动子、所述(ii)内部核糖体结合位点和所述(iii)编码aav cap蛋白的多核苷酸可操作地连接。

24.根据权利要求23所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸被整合到cho基因组或bhk细胞基因组中。

25.根据权利要求22所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸处于hek 293细胞中，并且所述(i)启动子、所述(ii)内部核糖体结合位点和所述(iii)编码aav cap蛋白的多核苷酸可操作地连接。

26.根据权利要求25所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸被整合到hek 293细胞基因组或人羊膜细胞基因组中。

27.根据权利要求22所述的多核苷酸，其进一步包括操纵子。

28.根据权利要求27所述的多核苷酸，其中所述启动子是cmv启动子，并且所述操纵子是tet操纵子。

29.一种包括多核苷酸的真核细胞，所述多核苷酸包括(i)启动子，(ii)内含子，(iii)第一内部核糖体进入位点，(iv)编码aav cap蛋白的第一多核苷酸，(v)第二内部核糖体进入位点，(vi)编码aav cap蛋白的第二多核苷酸，以及(vi...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·格伦，Y·赵，A·斯特里库迪斯，D·布拉科夫，陈刚，
申请(专利权)人：瑞泽恩制药公司，
类型：发明
国别省市：