慢病毒的滴度提高型转移质粒制造技术

本发明专利技术提出了一种分离的核酸。该核酸具有X

【技术实现步骤摘要】
慢病毒的滴度提高型转移质粒
本专利技术涉及生物
，具体地，本专利技术涉及分离的核酸、转移质粒、病毒包装试剂盒以及包装病毒的方法。
技术介绍
目前，慢病毒作为一种基因递送载体，被广泛的应用于对各种疾病进行基因治疗，如CAR-T制备、造血干细胞基因转导。慢病毒的生产工艺流程一般包括：①质粒(包括1个转移质粒和辅助质粒)提取和纯化→②质粒共转染293T或293F细胞→③收集病毒上清→④纯化、浓缩、无菌→⑤得到可供基因治疗使用的慢病毒。现有的技术中，步骤③中得到的慢病毒生产初始滴度低、经步骤⑤得到的可供使用的慢病毒收率也极低(仅20％左右)；而步骤②中是采用瞬时转染的方式，生产成本高，且体系扩大难度极大。这些都导致单批次慢病毒产量十分有限，无法满足高病毒载体用量适应症的治疗需求。因此，迫切需要开发出新的提高慢病毒产量的技术。
技术实现思路
本专利技术旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，在本专利技术的第一方面，本专利技术提出了一种分离的核酸。根据本专利技术的实施例，所述核酸具有X1X2TAX5X6X7TX9所示的核苷酸序列，其中，X1为A或G；X2为T或C；X5为A或G；X6为C或T；X7为T或缺失；X9为T或G；但不具有GTTAACTTT所示的核苷酸序列。根据本专利技术实施例的分离的核酸位于慢病毒包装转移质粒的cPPT/CTS元件的5’端及5’上游，具有上述分离的核酸的转移质粒进入细胞核效率大幅提高，所包装出的病毒的滴度大幅提高。根据本专利技术的实施例，上述核酸还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一：根据本专利技术的实施例，具有ACTAGTTG所示的核苷酸序列。具有ACTAGTTG所示的核苷酸序列的核酸的转移质粒所包装出的病毒滴度提高显著。在本专利技术的第二方面，本专利技术提出了一种转移质粒。根据本专利技术的实施例，所述转移质粒携带前面所述的核酸。根据本专利技术实施例的转移质粒所包装出的病毒的滴度得到显著提高，相比于现有技术，病毒滴度至少可提高1.3倍。根据本专利技术的实施例，上述转移质粒还可以包括如下附加技术特征至少之一：根据本专利技术的实施例，位于所述转移质粒中cPPT/CTS元件的5’端及5’端上游。根据本专利技术的实施例，所述核酸位于所述转移质粒中cPPT/CTS元件的5’端2～5bp及5’端上游4～8bp范围内，优选地，所述核酸位于所述转移质粒中cPPT/CTS元件的5’端3bp及5’端上游6bp范围内。根据本专利技术的实施例，所述转移质粒具有SEQIDNO:1所示的核苷酸序列。GGGTCTCTCTGGTTAGACCAGATCTGAGCCTGGGAGCTCTCTGGCTAACTAGGGAACCCACTGCTTAAGCCTCAATAAAGCTTGCCTTGAGTGCTTCAAGTAGTGTGTGCCCGTCTGTTGTGTGACTCTGGTAACTAGAGATCCCTCAGACCCTTTTAGTCAGTGTGGAAAATCTCTAGCAGTGGCGCCCGAACAGGGACTTGAAAGCGAAAGGGAAACCAGAGGAGCTCTCTCGACGCAGGACTCGGCTTGCTGAAGCGCGCACGGCAAGAGGCGAGGGGCGGCGACTGGTGAGTACGCCAAAAATTTTGACTAGCGGAGGCTAGAAGGAGAGAGATGGGTGCGAGAGCGTCAGTATTAAGCGGGGGAGAATTAGATCGCGATGGGAAAAAATTCGGTTAAGGCCAGGGGGAAAGAAAAAATATAAATTAAAACATATAGTATGGGCAAGCAGGGAGCTAGAACGATTCGCAGTTAATCCTGGCCTGTTAGAAACATCAGAAGGCTGTAGACAAATACTGGGACAGCTACAACCATCCCTTCAGACAGGATCAGAAGAACTTAGATCATTATATAATACAGTAGCAACCCTCTATTGTGTGCATCAAAGGATAGAGATAAAAGACACCAAGGAAGCTTTAGACAAGATAGAGGAAGAGCAAAACAAAAGTAAGACCACCGCACAGCAAGCGGCCGCTGATCTTCAGACCTGGAGGAGGAGATATGAGGGACAATTGGAGAAGTGAATTATATAAATATAAAGTAGTAAAAATTGAACCATTAGGAGTAGCACCCACCAAGGCAAAGAGAAGAGTGGTGCAGAGAGAAAAAAGAGCAGTGGGAATAGGAGCTTTGTTCCTTGGGTTCTTGGGAGCAGCAGGAAGCACTATGGGCGCAGCGTCAATGACGCTGACGGTACAGGCCAGACAATTATTGTCTGGTATAGTGCAGCAGCAGAACAATTTGCTGAGGGCTATTGAGGCGCAACAGCATCTGTTGCAACTCACAGTCTGGGGCATCAAGCAGCTCCAGGCAAGAATCCTGGCTGTGGAAAGATACCTAAAGGATCAACAGCTCCTGGGGATTTGGGGTTGCTCTGGAAAACTCATTTGCACCACTGCTGTGCCTTGGAATGCTAGTTGGAGTAATAAATCTCTGGAACAGATTTGGAATCACACGACCTGGATGGAGTGGGACAGAGAAATTAACAATTACACAAGCTTAATACACTCCTTAATTGAAGAATCGCAAAACCAGCAAGAAAAGAATGAACAAGAATTATTGGAATTAGATAAATGGGCAAGTTTGTGGAATTGGTTTAACATAACAAATTGGCTGTGGTATATAAAATTATTCATAATGATAGTAGGAGGCTTGGTAGGTTTAAGAATAGTTTTTGCTGTACTTTCTATAGTGAATAGAGTTAGGCAGGGATATTCACCATTATCGTTTCAGACCCACCTCCCAACCCCGAGGGGACCCGACAGGCCCGAAGGAATAGAAGAAGAAGGTGGAGAGAGAGACAGAGACAGATCCATTCGATTAGTGAACGGATCTCGACGGTATCGACTAGTTGTAAAAGAAAAGGGGGGATTGGGGGGTACAGTGCAGGGGAAAGAATAGTAGACATAATAGCAACAGACATACAAACTAAAGAATTACAAAAACAAATTACAAAATTCAAAATTTTATCGATAAGCTTGGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTA本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离的核酸，其特征在于，具有X

【技术特征摘要】
1.一种分离的核酸，其特征在于，具有X1X2TAX5X6X7TX9所示的核苷酸序列，
其中，X1为A或G；X2为T或C；X5为A或G；X6为C或T；X7为T或缺失；X9为T或G；但不具有GTTAACTTT所示的核苷酸序列。


2.根据权利要求1所述的核酸，其特征在于，具有ACTAGTTG所示的核苷酸序列。


3.一种转移质粒，其特征在于，携带权利要求1或2所述的核酸。


4.根据权利要求3所述的转移质粒，其特征在于，所述核酸位于所述转移质粒中cPPT/CTS元件的5’端及5’端上游。


5.根据权利要求4所述的转移质粒，其特征在于，所述核酸位于所述转移质粒中cPPT/CTS元件的5’端2～5bp及5’端上游4～8bp范围内，优选地，所述核酸位于所述转移质粒中cPPT/CTS元件的5’端3bp及5’端上游6bp范围内。


6.根据权利要求5所述的转移质粒，其特征在于，所述转移质粒具有SEQIDNO:1所示的核苷酸序列。


7.根据权利要求3所述的转移质粒，其特征在于，所述转移质粒包含启动子区和HIV-15’LTR区，所述启动子区与HIV-15’LTR区可操作地连接，所述HIV-15’LTR区的5’端具有单个鸟甘酸，优选地，所述启动子为RSV启动子。


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【专利技术属性】
技术研发人员：杨小丹，陈世优，朱秀琴，陈超，陈小锋，李文佳，
申请(专利权)人：东莞市东阳光生物药研发有限公司，广东东阳光药业有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44