圆红冬孢酵母RNA聚合酶III型启动子及其应用制造技术

本发明专利技术通过扩增一段圆红冬孢酵母DNA序列，进行生物学功能验证，获得可广泛用于红酵母中红冬孢酵母属(Rhodosoporidium)、锁掷酵母属(Sporidiobolus)、掷孢酵母属(Sporobolomyces)和红酵母属(Rhodotorula)，进行非编码RNA转录、遗传工程操作和菌株改良的RNA聚合酶III型启动子，其核苷酸序列为SEQ ID NO：1。本发明专利技术还涉及含有此DNA序列表达盒或重组载体，及利用相关元件构建红冬孢酵母属、锁掷酵母属和红酵母属基因工程菌株的方法及相应的菌株。

【技术实现步骤摘要】
圆红冬孢酵母RNA聚合酶III型启动子及其应用
本专利技术属于基因工程
，具体涉及圆红冬孢酵母(Rhodosporidiumtoruloides)的RNA聚合酶III型启动子及其用途，包括基因工程菌株构建所必需的转化方法等。
技术介绍
微生物是自然界中分布最广泛的物种之一，其中一部分微生物能够在特定条件下(如氮源、磷源缺乏)在胞内贮存超过其细胞干重20％的油脂，其中以甘油三酯为主，具有这种表型的微生物称为产油微生物，包括细菌、酵母、霉菌、藻类等(RatledgeCandWynnJP.AdvApplMicrobiol2002,51:1–51.)。利用微生物转化生物质资源生产油脂，可发展成基本不依赖耕地、可连续生产、降低农业污染、资源综合利用的新技术，是形成化学品的石化资源替代品新的生产途径(赵宗保.中国生物工程杂志2005,25:8–11.)。圆红冬孢酵母属于担子菌门异宗配合型真菌，是发酵工业中一种极为重要的微生物，并且对环境具有很强的抗逆性和鲁棒性。除了常规的碳源，它还可以利用一些其它的底物作为碳源进行发酵，包括粗甘油(YangX本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.RNA聚合酶III型启动子，其特征在于：/n所述RNA聚合酶III型启动子包括下述核苷酸序列中的一种或二种以上，/n(1)具有序列表中如SEQ ID NO：1所示DNA序列的全部序列或包含该SEQ ID NO：1所示DNA序列自3’-末端起500bp以内的序列，/n(2)具有可与如SEQ ID NO：1所示序列的全部或包含该SEQ ID NO：1所示DNA序列3’-末端起500bp以内的部分序列杂交的、且保持转录启动子活性的序列，或/n(3)对SEQ ID NO：1所示的脱氧核苷酸序列进行一个或50个碱基以内的取代、缺失、插入或添加中的一种或二种以上所获得的，与SEQ ID NO：1所示序...

【技术特征摘要】
1.RNA聚合酶III型启动子，其特征在于：
所述RNA聚合酶III型启动子包括下述核苷酸序列中的一种或二种以上，
(1)具有序列表中如SEQIDNO：1所示DNA序列的全部序列或包含该SEQIDNO：1所示DNA序列自3’-末端起500bp以内的序列，
(2)具有可与如SEQIDNO：1所示序列的全部或包含该SEQIDNO：1所示DNA序列3’-末端起500bp以内的部分序列杂交的、且保持转录启动子活性的序列，或
(3)对SEQIDNO：1所示的脱氧核苷酸序列进行一个或50个碱基以内的取代、缺失、插入或添加中的一种或二种以上所获得的，与SEQIDNO：1所示序列具有70％以上同源性、且具有启动子活性的序列。


2.一种DNA表达盒，其特征在于：其含有权利要求1所述核苷酸序列中的一种或二种以上，优选其含有SEQIDNO：1所示的核苷酸序列。


3.根据权利要求2所述的表达盒，其特征在于：所述的表达盒还含有非编码RNA的核苷酸序列，位于SEQIDNO：1所示的序列的下游并与之直接相连接。


4.一种包含权利要求2-3中任一项所述的DNA表达盒的重组载体，其特征在于：所述载体为游离型或者整合型载体。


5.根据权利要求4所述的重组载体，其特征在于：所述的整合型载体为农杆菌介导表达载体，或者为携带有靶基因翼侧1500-4000碱基同源重组臂的同源重组载...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵宗保，焦翔，张素芳，
申请(专利权)人：中国科学院大连化学物理研究所，
类型：发明
国别省市：辽宁;21