一种抑制DICER1-AS1表达的siRNA及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种抑制人DICER1‑AS1表达的核苷酸及其应用，其特征是：所述的核苷酸特异性结合于人DICER1‑AS1，所述核苷酸的序列由AAACACAG AAGAUCUUGCUUCUCUCCC序列或者互补序列中的18‑22个连续核苷酸序列组成，特别是其包含序列：AAACACAGAAGAUCUUGCU和AAGAUCUUGCUUCUCUCCC。本发明专利技术抑制人DICER1‑AS1，能够有效抑制A549和XWLC‑05细胞中DICER1‑AS1表达，与抗肿瘤药物联合可以增加其抑制其生长和增殖，从而有效治疗多种肿瘤。

【技术实现步骤摘要】
一种抑制DICER1-AS1表达的siRNA及其应用
本专利技术属于医学材料技术和药物领域，具体地本专利技术涉及一种环状RNAs核苷酸，尤其是涉及人环状RNAs核苷酸。该核苷酸可与DICER1-AS1互补，从而抑制人DICER1-AS1的表达，与其他抗肿瘤药物其起到抗肿瘤的作用。
技术介绍
长的非编码RNA（lncRNA）是一类长度小于200bp的RNA分子。LncRNA通常由RNA聚合酶II转录，并经过5'末端加帽，RNA剪接和聚腺苷酸化程序。LncRNA不编码或蛋白质编码能力很低（3），过去被认为是“转录噪声”，没有任何生物学影响。然而，越来越多的证据表明，lncRNA参与基因调节，细胞周期调节，细胞分化，免疫应答，肿瘤代谢和其他过程。LncRNA通常在细胞质和细胞核中执行不同的功能。有趣的是，环境转变或感染也可以诱导lncRNA在细胞核和细胞质中的定位发生变化。在肿瘤微环境中，lncRNA可能由于其表达的变化而显示出致癌或抑制肿瘤的功能。肿瘤微环境的缺氧，低pH和能量应激都是导致lncRNA改变的因素。RNA干扰(RNAinterference，RNAi)技术利用双链小RNA高效、特异性降解细胞内同源RNA从而沉默靶基因，从而实现干扰靶基因的功能。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种能够特异高效地抑制DICER1-AS1表达的siRNA及其应用。本专利技术的目的是这样实现的，包括合成核苷酸的序列由AAACACAGAAGAUCUUGCUUCUCUCC(SEQIDNO.1)序列中的18-22个连续核苷酸序列组成或者互补序列中的18-22个连续核苷酸序列组成。特别是其包含序列：AAACACAGAAGAUCUUGCU(SEQIDNO.2)和AAGAUCUUGCUUCUCUCCC(SEQIDNO.3)或者互补序列。核苷酸为核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸或者核糖核苷酸与脱氧核糖核苷酸的嵌合体。核苷酸进一步被核糖修饰、碱基修饰、磷酸骨架修饰、氟代修饰、硫代修饰、甲氧基修饰、胆固醇修饰的一种或几种。核苷酸和其他抗肿瘤治疗药物特别是三价无机砷。制备治疗癌症药物中的应用。癌症包括：肝癌、贲门癌、结胃癌、、鼻咽癌、卵巢癌、前列腺癌症、慢性或急性白血病、脑瘤、食道癌、口腔癌、尿道癌、皮肤癌、直肠癌、中耳癌、骨癌、肠癌、胆囊癌、喉癌、牙龈癌、肺癌、胰腺癌、乳腺癌、宫颈癌、、大肠癌、睾丸癌、内分泌系统的癌症、淋巴细胞性淋巴瘤。本研究受国家自然科学基金的支持（81860572）。本专利技术（优点）：专利技术的核苷酸具有很好的DICER1-AS1抑制效果，作用于特异性的靶位点，特异性强、毒性低、副作用小和修饰半衰期长，可以与多种抗肿瘤药物合用。具体实施方式下面对本专利技术作进一步的说明，但不以任何方式对本专利技术加以限制，基于本专利技术教导所作的任何变换或替换，均属于本专利技术的保护范围。本专利技术所述的抑制DICER1-AS1表达的核苷酸（siRNA），所述核苷酸的序列由AAACACAGAAGAUCUUGCUUCUCUCC序列或者互补序列中的18-22个连续核苷酸序列组成。所述的核苷酸，其序列为AAACACAGAAGAUCUUGCU或者AAGAUCUUGCUUCUCUCCC及其互补序列。所述核苷酸为核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸或者核糖核苷酸与脱氧核糖核苷酸的嵌合体。所述核苷酸进一步被核糖修饰、碱基修饰、磷酸骨架修饰、氟代修饰、硫代修饰、甲氧基修饰、胆固醇修饰一种或几种修饰。本专利技术所述的核苷酸的应用为所述的核苷酸在制备抗肿瘤药物中的应用。所述肿瘤为肺癌。本专利技术所述的药物组合物包含所述的核苷酸和其他抗肿瘤治疗药物。所述的其他抗肿瘤治疗药物为亚砷酸钠。本专利技术所述的药物组合物的应用为所述的药物组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。所述肿瘤为肺癌。实施例1本实施例中的沉默RNA序列为：AAACACAGAAGAUCUUGCU(SEQIDNO.2)和AAGAUCUUGCUUCUCUCCC(SEQIDNO.3)以及互补序列,所有的序列都是从5端到3端,所有序列都在末端加上dTdT。DICER1-AS1的RNA序列信息存在于UCSC数据库中。本课题受本研究受国家自然科学基金的支持（81860572）。对照合成首先，由上海吉玛制药技术有限公司合成核苷酸，合成包含其互补序列的双链RNA序列，对照组使用吉玛制药技术有限公司的阴性对照siRNA货号为A06001序列为对照组的阴性对照。细胞培养：将A549或者XWLC-05细胞在含有10％胎牛血清的1640培养基于37℃，5％CO2条件下培养。以2500个每孔铺于96孔板内。RNA转染采用百代公司Rfect转染试剂进行转染，通过荧光定量PCR来经常RNA干扰的效率。以下分别为对照组、沉默组1、沉默组的沉默效率，A549细胞分别为：1.014±0.091，0.241±0.028，0.151±0.041；XWLC-05细胞分别为1.019±0.08,0.250±0.017,0.112±0.015,数据使用2^-ΔΔCt表示。荧光定量使用的引物：DICER1-AS1上游：TGGACCATAAAGACAAGGACG(SEQIDNO.4)下游：AGAGAGACAGTCCTGCTTGG(SEQIDNO.5)，内参采用“陈江容,张若冰,张媛,胡娟,周梅,何越峰.砷及其代谢产物对P21基因表达的影响[J].职业与健康,2018,34(23):3213-3216.”文章中的ACTB基因。两个细胞使用96孔板转染转染后48小时加入砷，亚砷酸钠溶于培养基中，不加砷的加入等量培养基，亚砷酸钠的终浓度为A549为60微摩尔每升，XWLC-05细胞砷的终浓度为40微摩尔每升，再培养48小时后MTS检测细胞活力。用Promega公司MTS检测，采用490nm吸光度，计算细胞活力。未加砷对照组：为使用阴性对照片段后不加入亚砷酸钠，本组的活力定为100.0%。未加砷实验组1：核苷酸片段1沉默的结果。未加砷实验组2：沉默核苷酸片段2沉默的结果。加砷对照组：为使用阴性对照片段后加入亚砷酸钠的结果。加砷实验组1：沉默核苷酸片段1沉默后加入亚砷酸钠的结果。加砷实验组2：沉默核苷酸片段2沉默后加入亚砷酸钠的结果。以下为各组的细胞活力均为百分比（%）：未加砷对照组：A549为99.8±5.1，XWLC-05为100.89±3.9，未加砷实验组1：A549为91.3±2.9，XWLC-05为93.4±3.4，未加砷实验组2:A549为81.3±3.4，XWLC-05为82.6±2.8，加砷对照组：A549为91.2±4.1，XWLC-05为84.4±2.9，加砷实验组1：A549为55.32±4.6，XWLC-05为53.1±4.8，加砷实验组2：A549为49.4±3.1，XWLC-05为48.1±3.9。SEQUENCELISTING<110>昆明本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抑制DICER1-AS1表达的核苷酸，其特征在于所述核苷酸的序列由AAACACAGAAGAUCUUGCUUCUCUCC序列或者互补序列中的18-22个连续核苷酸序列组成。/n

【技术特征摘要】
1.一种抑制DICER1-AS1表达的核苷酸，其特征在于所述核苷酸的序列由AAACACAGAAGAUCUUGCUUCUCUCC序列或者互补序列中的18-22个连续核苷酸序列组成。


2.根据权利要求1所述的核苷酸，其特征在于其序列为AAACACAGAAGAUCUUGCU或者AAGAUCUUGCUUCUCUCCC及其互补序列。


3.根据权利要求1所述的核苷酸，其特征在于所述核苷酸为核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸或者核糖核苷酸与脱氧核糖核苷酸的嵌合体。


4.根据权利要求1所述的核苷酸，其特征在于所述核苷酸进一步被核糖修饰、碱基修饰、磷酸骨架修饰、氟代修饰、硫代修饰、甲氧基修饰、胆固醇修饰...

【专利技术属性】
技术研发人员：何越峰，蒋成兰，谭婧文，王萌婕，屈子涵，阎星雨，普惠婕，周添霖，杨兴权，
申请(专利权)人：昆明医科大学，
类型：发明
国别省市：云南;53