抑制乳腺癌细胞增殖侵袭转移的基因、表达载体及应用制造技术

本发明专利技术属于基因工程技术领域，公开了一种抑制乳腺癌细胞的增殖侵袭转移的基因、表达载体及应用，基因为LINC00850，为长链非编码RNA是不具有编码蛋白质能力的RNA，长度大于200nt；LINC00850位于X染色体，长度为697bps，sequence name为NR_109813。本发明专利技术通过检测正常乳腺上皮细胞MCF‑10A以及乳腺癌细胞中LINC00850的表达情况；与正常乳腺上皮细胞MCF‑10A相比，LINC00850在乳腺癌细胞中的表达明显上调，在高侵袭性细胞MDA‑MB‑231中的表达量最高，在低侵袭性细胞MCF‑7中的表达量最低。本发明专利技术对于乳腺癌的诊断和治疗具有重要的意义。

【技术实现步骤摘要】
抑制乳腺癌细胞增殖侵袭转移的基因、表达载体及应用
本专利技术属于基因工程
，尤其涉及一种抑制乳腺癌细胞的增殖侵袭转移的基因、表达载体及应用。
技术介绍
目前，最接近的现有技术：女性乳腺是由皮肤、纤维组织、乳腺腺体和脂肪组成的，乳腺癌是发生在乳腺腺上皮组织的恶性肿瘤。乳腺癌中99％发生在女性，男性仅占1％。乳腺并不是维持人体生命活动的重要器官，原位乳腺癌并不致命；但由于乳腺癌细胞丧失了正常细胞的特性，细胞之间连接松散，容易脱落。癌细胞一旦脱落，游离的癌细胞可以随血液或淋巴液播散全身，形成转移，危及生命。目前乳腺癌已成为威胁女性身心健康的常见肿瘤。全球乳腺癌发病率自20世纪70年代末开始一直呈上升趋势。美国8名妇女一生中就会有1人患乳腺癌。中国不是乳腺癌的高发国家，但不宜乐观，近年我国乳腺癌发病率的增长速度却高出高发国家1～2个百分点。据国家癌症中心和卫生部疾病预防控制局2012年公布的2009年乳腺癌发病数据显示：全国肿瘤登记地区乳腺癌发病率位居女性恶性肿瘤的第1位，女性乳腺癌发病率(粗率)全国合计为42.55/10万，城市为51.91/10万，农村为23.12/10万。乳腺癌已成为当前社会的重大公共卫生问题。自20世纪90年代全球乳腺癌死亡率呈现出下降趋势；究其原因，一是乳腺癌筛查工作的开展，使早期病例的比例增加；二是乳腺癌综合治疗的开展，提高了疗效。乳腺癌已成为疗效最佳的实体肿瘤之一。综上所述，现有技术存在的问题是：(1)现有技术中，不能为乳腺癌细胞中的表达、高侵袭性细胞MDA-MB-231中的表达、低侵袭性细胞MCF-7中的表达提供理论依据。(2)现有技术不能准确抑制乳腺癌的增殖、侵袭和转移。临床上对于乳腺癌的治疗达不到抑制增殖，侵袭和转移的效果，不能提高病人的生存率。我们的技术为临床靶基因的治疗提供理论依据。(3)lncRNA可以调控编码蛋白，研究lncRNA对乳腺癌增殖，侵袭转移的影响有助于揭示乳腺癌侵袭和转移的分子机制从而有助于筛选用出乳腺癌诊断及判断预后的生物标记物，同时可以设计有效的抗乳腺癌增殖侵袭转移的分子靶向药物。解决上述技术问题的难度：寻找一种能有效抑制乳腺癌细胞侵袭和转移的精准靶向药物。解决上述技术问题的意义：(1)提供一种筛选抑制乳腺癌侵袭转移的潜在的靶向药物，此药物可以通过抑制lncRNA调控的蛋白起到抑制乳腺癌侵袭转移的作用。(2)提供一种治疗乳腺癌的药物，实现乳腺癌的精准分子治疗。
技术实现思路
针对现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种抑制乳腺癌细胞的增殖侵袭转移的基因、表达载体及应用。本专利技术是这样实现的，一种抑制抑制乳腺癌细胞的增殖侵袭转移的基因，其特征在于，所述抑制乳腺癌细胞的侵袭和转移的基因的为LINC00850，sequencename为NR_109813，序列为SEQIDNO：5。本专利技术的另一目的在于提供一种包含上述基因的乳腺癌细胞的表达载体。本专利技术的另一目的在于提供一种包含上述基因构建的的乳腺癌检测试剂盒。本专利技术的另一目的在于提供一种包含上述基因在抑制乳腺癌细胞的抑制乳腺癌细胞的增殖、侵袭和转移中的应用。综上所述，本专利技术的优点及积极效果为：本专利技术通过荧光定量PCR检测正常乳腺上皮细胞MCF-10A以及乳腺癌细胞MDA-MB-231，T47D，MCF-7中LINC00850的表达情况，结果显示，与正常乳腺上皮细胞MCF-10A相比，LINC00850在乳腺癌细胞中的表达明显上调，而且在高侵袭性细胞MDA-MB-231中的表达量最高，在低侵袭性细胞MCF-7中的表达量最低。敲除MDA-MB-231细胞中的LINC00850后，细胞的增殖能力明显减弱。敲除LINC00850可明显抑制MDA-MB-231细胞的侵袭能力。本专利技术对于乳腺癌的诊断和治疗具有重要的意义。本专利技术的抑制乳腺癌细胞的侵袭和转移的基因，为临床设计有效的抗乳腺癌侵袭转移的分子靶向药物提供了一定的实验及理论依据。附图说明图1是本专利技术实施例提供的抑制乳腺癌细胞的增殖侵袭转移的基因的检测方法流程图。图2是本专利技术实施例提供的荧光定量PCR检测LINC00850在正常乳腺上皮细胞MCF-10A以及乳腺癌细胞MDA-MB-231，T47D，MCF-7中的表达情况示意图。图3是本专利技术实施例提供的HCS细胞增殖检测细胞增殖能力改变的典型图像示意图。图4是本专利技术实施例提供的感染慢病毒以后细胞增殖能力的改变示意图。图5是本专利技术实施例提供的HCS细胞划痕检测实验检测感染前后细胞的侵袭能力的典型图像示意图。图6是本专利技术实施例提供的HCS细胞划痕检测实验检测感染前后细胞的平均侵袭率的比较示意图。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。本专利技术提供了一种抑制乳腺癌细胞的增殖侵袭转移的基因，所述抑制乳腺癌细胞的增殖侵袭转移的基因为LINC00850。序列为SEQIDNO：5。进一步，所述LINC00850为长链非编码RNA是不具有编码蛋白质能力的RNA，长度大于200nt；LINC00850位于X染色体，长度为697bps，sequencename为NR_109813。本专利技术的另一目的在于提供一种所述抑制乳腺癌细胞的增殖侵袭转移的基因的检测方法，所述抑制乳腺癌细胞的增殖侵袭转移的基因的检测方法包括以下步骤：第一步，细胞中LINC00850的表达：通过荧光定量PCR检测正常乳腺上皮细胞MCF-10A以及乳腺癌细胞MDA-MB-231，T47D，MCF-7中LINC00850的表达情况；第二步，慢病毒感染细胞：通过shRNA慢病毒感染乳腺癌细胞MDA-MB-231，成功敲低细胞中的LINC00850，并筛选出稳转细胞株，感染shRNA慢病毒的MDA-MB-231细胞称为shLINC00850，感染对照慢病毒MDA-MB-231细胞称为shCtrl；第三步，Celigo细胞计数检测细胞增殖：HCS细胞增殖实验检测感染前后细胞的增殖能力，敲低LINC00850可抑制MDA-MB-231细胞的增殖能力；第四步，HCS细胞划痕检测实验检测感染前后细胞的侵袭能力，敲低LINC00850可抑制MDA-MB-231细胞的侵袭能力进一步，所述第一步荧光定量PCR包括：步骤一，细胞中总RNA的提取；步骤二，应用M-MLV逆转录酶合成第一链cDNA；步骤三，用Bio-Rad的SYBRGreen荧光定量PCR试剂盒检测细胞中LINC00850的表达量，用2–△△CT法计算LINC00850的相对表达量。进一步，所述步骤一细胞中总RNA的提取具体包括：(1)吸尽6孔板中正常乳腺上皮细胞MCF-10A或乳腺癌细胞MDA-MB-231，T47D，MCF-7细本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抑制抑制乳腺癌细胞的增殖侵袭转移的基因，其特征在于，所述抑制乳腺癌细胞的侵袭和转移的基因的为LINC00850，sequence name为NR_109813，序列为SEQ ID NO：5。/n

【技术特征摘要】
1.一种抑制抑制乳腺癌细胞的增殖侵袭转移的基因，其特征在于，所述抑制乳腺癌细胞的侵袭和转移的基因的为LINC00850，sequencename为NR_109813，序列为SEQIDNO：5。


2.一种包含权...

【专利技术属性】
技术研发人员：张宝刚，付长霞，李洪利，尹崇高，
申请(专利权)人：潍坊医学院，
类型：发明
国别省市：山东;37