环状RNA has_circ_000918及其用途制造技术

本发明专利技术公开了一种环状RNA hsa_circ_0009618及其用途，所述环状RNA hsa_circ_0009618基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；前期通过检测肺腺癌组织中hsa_circ_0009618基因表达情况，发现其表达水平明显升高。本发明专利技术将慢病毒转染hsa_circ_0009618基因的肺腺癌细胞与对照肺腺癌细胞相比，发现其增殖速度显著减慢。与健康对照者相比，hsa_circ_0009618在肺腺癌患者血浆中的表达显著增高。ROC曲线显示血浆hsa_circ_0009618诊断肺腺癌的具有一定的敏感性和特异性，为肺腺癌提供了新的诊断和预后判断标志物。

Loop RNA has_ circ_ 000918 and its application

【技术实现步骤摘要】
环状RNAhas_circ_000918及其用途
本专利技术涉及生物诊断领域，具体涉及环状RNAhsa_circ_0009618及其用途。
技术介绍
原发性肺癌是全球范围内发病率和死亡率均居前列的恶性肿瘤。全球每年约有209万患者被新诊断为肺癌，同时约有180万患者死于肺癌。我国占位了全球每年新发病例的30％，肺癌已经成为我国最严重的的恶性肿瘤死亡原因。近年来虽然靶向治疗和免疫治疗有很大的发展，但肺癌的5年生存率仍不足20％。因此，早期诊断、寻找新的肺癌诊断标志物仍是目前肺癌领域的研究热点。肺腺癌是肺癌的主要病理类型，约占40％。通过影像学如胸部CT筛查可以发现早期肺部结节，但不能判断结节的性质。病理虽然是诊断肺癌的金标准，但不适合用于体检筛查。因此临床上常联合肿瘤标志物提高早期肺癌诊出率。目前诊断肺腺癌标志物的灵敏度和特异度不强，如公认的肺腺癌诊断标志物癌胚抗原(CEA)灵敏度仅有30％，且在肺癌早期常常不增高，对诊断意义不大。因此，临床上需要寻找新的肺癌诊断标志物。环状RNA(circularRNA，circRNA)是新近确认的一类特殊的非编码RNA分子。与miRNA、lncRNA等线性RNA不同的是，circRNA由特殊位点(backsplicing)的反向的可变剪接使得基因的外显子序列反向首位连接而成，以共价键形成环形结构，且没有5'末端和3'末端poly(A)。近年来研究表明，circRNA具有以下重要特征：(1)表达丰度高：广泛表达于人体细胞中，主要存在于细胞质；(2)表达稳定：circRNA成封闭环状结构，不含5′和3′末端，不易被核酸外切酶RNaseR降解，比线性RNA更稳定；(3)高度保守性：多数具高度保守序列，仅少数在进化上不保守；(4)具有一定的组织、时序和疾病特异性。circRNA所具备的这些特征，使其有可能成为一种新的临床诊断标志物或人类疾病治疗的靶点。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种环状RNAhsa_circ_0009618，以及基于hsa_circ_0009618的在肺腺癌辅助诊断和预后判断方面的用途。为实现上述目的，本专利技术所采取的技术方案为：一方面，本专利技术提供了一种环状RNAhsa_circ_0009618，所述环状RNAhsa_circ_0009618基因的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。所述环状RNAhsa_circ_0009618的结构是线状核苷酸序列转录后经剪接形成的首尾相连的环状RNA结构。本专利技术所述的环状RNAhsa_circ_0009618在基因组上的定位为chr1:8923293-8928116，相应的线性基因为ENO1(NM_001201483)，环化序列有936个碱基，包含ENO1基因的第5至第10外显子。目前尚未有任何关于hsa_circ_0009618功能的报道。另一方面，本专利技术还提供了一种肺腺癌的分子标志物，所述分子标志物为环状RNAhsa_circ_0009618。本专利技术申请人前期通过环状RNA芯片及qRT-PCR发现，hsa_circ_0009618在肺腺癌组织中表达显著上调。敲低hsa_circ_0009618可抑制肺腺癌细胞增殖，提示hsa_circ_0009618可成为肺腺癌辅助诊断和治疗的新的分子标志物。第三方面，本专利技术还提供了环状RNAhsa_circ_0009618含量的检测试剂在制备肺腺癌的辅助诊断和预后判断试剂盒中的应用，所述检测试剂为可以扩增本专利技术所述环状RNAhsa_circ_0009618的引物。优选的，所述引物的碱基序列如SEQIDNO:2和SEQIDNO:3所示的DNA序列组成的hsa_circ_0009618引物对和SEQIDNO:4和SEQIDNO:5所示的GAPDH引物对。应当说明的是，本专利技术中能扩增出环状RNAhsa_circ_0009618的引物包括但不限于SEQIDNO:2～5所示的引物，还包括其他能成功扩增出环状RNAhsa_circ_0009618的引物序列。第四方面，本专利技术还提供一种肺腺癌辅助诊断的试剂盒，所述试剂盒包含能够检测血浆中环状RNAhsa_circ_0009618含量的试剂。所述检测试剂为可以扩增上述所述的环状RNAhsa_circ_0009618的引物。所述引物如前所述。本专利技术提供了血浆环状RNAhsa_circ_0009618诊断肺腺癌的ROC曲线图。血浆hsa_circ_0009618诊断肺腺癌的AUC值为0.8099，说明血浆hsa_circ_0009618对肺腺癌具有辅助诊断价值。本专利技术所述的试剂盒中，还可以包含其他PCR扩增所需要的试剂，例如RNA聚合酶、缓冲液、NTP等。第五方面，本专利技术还提供用于扩增环状RNAhsa_circ_0009618的引物对，所述扩增引物为包含如SEQIDNO:2和SEQIDNO:3所示的DNA序列组成的hsa_circ_0009618引物对和SEQIDNO:4和SEQIDNO:5所示的GAPDH引物对。第六方面，本专利技术还提供了血浆环状RNAhsa_circ_0009618预测肺腺癌预后的生存曲线。图例显示，与低表达患者相比，血浆环状RNAhsa_circ_0009618高表达的患者预后差、预计生存期短。与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：(1)本专利技术通过设计特异的环状RNA引物进行qRT-PCR、RNA耐受实验证实了hsa_circ_0009618的客观存在；(2)本专利技术通过检测肺腺癌患者血浆中hsa_circ_0009618表达情况，首次发现hsa_circ_0009618在肺腺癌血浆中表达水平明显升高，可作为肺腺癌诊断的血浆标志物，能提高诊断肺腺癌诊断的效能；(3)本专利技术根据肺腺癌患者血浆中hsa_circ_0009618表达情况，将患者分为hsa_circ_0009618高表达组和低表达组，并比较二者预后。结果发现，血浆hsa_circ_0009618可用于判断肺腺癌患者预后，血浆hsa_circ_0009618高表达患者比低表达者预后差。(4)本专利技术公开的hsa_circ_0009618在肺腺癌诊断和预后中的价值，并研制了相应的诊断试剂盒，对肺腺癌的诊断和预后判断将会提供新的标志物，具有重要意义。附图说明图1为本专利技术实施例1中hsa_circ_0009618表达产物的测序图。图2为本专利技术实施例2中RnaseR对hsa_circ_0009618和GAPDH影响情况的柱状图。图3为本专利技术实施例3中慢病毒转染hsa_circ_0009618的肺腺癌细胞株和对照细胞系的细胞增殖曲线示意图，其中横坐标为天数，纵坐标为酶标仪检测的490nm吸光值。图4为本专利技术实施例1中qRT-PCR检测hsa_circ_0009618在肺腺癌患者血浆和正常人群血浆中表达情况对比图。图5为本专利技术实施例3中血浆hsa_circ_0009618诊断肺腺癌的ROC曲线图。图6为本专利技术实施本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种环状RNA hsa_circ_0009618，其特征在于，所述环状RNA的核苷酸序列如SEQ IDNO:1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种环状RNAhsa_circ_0009618，其特征在于，所述环状RNA的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。


2.一种肺腺癌的分子标志物，所述分子标志物为权利要求1所述的环状RNAhsa_circ_0009618。


3.权利要求1所述的环状RNAhsa_circ_0009618含量的检测试剂在制备肺腺癌的辅助诊断和预后判断试剂盒中的应用，其特征在于，所述检测试剂为可以扩增权利要求1所述的环状RNAhsa_circ_0009618的引物。


4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述引物的碱基序列如SEQIDNO:2和SEQIDNO:3所示的DNA序列组成的hsa_circ_0009618引物对和SEQIDNO:4和SEQIDNO:5所示的GAPDH引物对。


5.一种肺腺癌辅助诊断或预后判断的试剂盒，所述试剂盒包含能够...

【专利技术属性】
技术研发人员：陆国军，张宇，
申请(专利权)人：南京脑科医院，
类型：发明
国别省市：江苏;32