一种Msyb融合标签的大肠杆菌可溶性蛋白表达载体、构建方法及应用技术

本发明专利技术属于蛋白工程技术领域，尤其是涉及一种Msyb融合标签的大肠杆菌可溶性蛋白表达载体、构建方法及应用。本发明专利技术所提供的Msyb融合标签的大肠杆菌可溶性蛋白表达载体的构建方法所制备得到的Msyb融合标签的大肠杆菌可溶性蛋白表达载体可以较好地提高目的蛋白表达量及提高目的蛋白的可溶性，目的蛋白可溶性表达将为蛋白分离纯化、蛋白活性研究奠定基础，在基因工程、蛋白质工程等生物学领域中将存在广泛的应用。

Expression vector, construction method and application of a msyb fusion tag for E.coli soluble protein

【技术实现步骤摘要】
一种Msyb融合标签的大肠杆菌可溶性蛋白表达载体、构建方法及应用
本专利技术属于蛋白工程
，尤其是涉及一种Msyb融合标签的大肠杆菌可溶性蛋白表达载体、构建方法及应用。
技术介绍
大肠杆菌具有遗传性状了解透彻、生长快、培养经济、表达水平高、待选质粒多等特点，在基因工程
成为首选的表达系统，也是基因表达技术中发展最早和目前应用最广泛的表达系统。但是由于各种原因，大肠杆菌表达系统也有自身局限性，当所表达的蛋白是复杂的真核来源的蛋白时，大肠杆菌往往不能将翻译出的多肽链正确折叠而不能形成具有天然构象蛋白质，而是形成不溶性的无功能的包涵体。包涵体中的多肽链折叠错误，必须通过复杂的变性与复性过程才能形成有活性的蛋白，但成功率低。探索重组蛋白在大肠杆菌中可溶性表达具有较高的学术价值与广泛的应用前景。目前已经找到了一些提高重组蛋白在大肠杆菌中可溶性表达的方法，如改造工程菌、优化诱导表达条件(诱导温度、诱导时间、诱导剂浓度等)、分子伴侣共表达、添加融合标签等。其中较常用的办法是使用融合表达策略，即将融合标签和靶蛋白连接成为一个融合蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种Msyb融合标签的大肠杆菌可溶性蛋白表达载体，其特征在于，所述Msyb融合标签的大肠杆菌可溶性蛋白表达载体命名为BL21-pHis-Msyb，且保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(北京)，保藏编号为：CGMCC No.16044。/n

【技术特征摘要】
1.一种Msyb融合标签的大肠杆菌可溶性蛋白表达载体，其特征在于，所述Msyb融合标签的大肠杆菌可溶性蛋白表达载体命名为BL21-pHis-Msyb，且保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(北京)，保藏编号为：CGMCCNo.16044。


2.一种Msyb融合标签的大肠杆菌可溶性蛋白表达载体的构建方法，其特征在于，所述Msyb融合标签的大肠杆菌可溶性蛋白表达载体的构建方法包括如下步骤：以大肠杆菌BL2(DE3)基因组为模板，以SQEIDNO.2、SQEIDNO.3为引物进行PCR扩增，得到基因序列为SQEIDNO.1的Msyb基因片段；将pET20进行双酶切，并通过柔和连接子连接双酶切后的pET20和Msyb基因片段，得到连接产物；将连接产物热激转化DH5α感受态细胞并筛选重组克隆，得到Msyb融合标签的大肠杆菌可溶性蛋白表达载体；
上述基因序列分别为：
SQEIDNO.1：



SEQIDNO.2：
taagaaggagatatacatatgCACCACCACCACCACCACATGACCATGTACGCAACGCTTSEQIDNO.3：
acggagctcgaattcggatccACCACCAGAACCACCACGT...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓春泉，吴配配，李因来，周旭一，
申请(专利权)人：杭州博茵生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33