一种甘蔗黄叶病毒运动蛋白表达纯化方法及其多克隆抗血清的制备技术

本发明专利技术涉及一种甘蔗黄叶病毒运动蛋白(ScYLV‑MP)表达纯化方法以及ScYLV‑MP多克隆抗血清的制备和检测试剂盒的构建，其中ScYLV‑MP表达纯化步骤为：(1)ScYLV‑MP基因的调取及扩增：(2)ScYLV‑MP基因原核表达载体构建；(3)His‑tag‑(ScYLV‑MP)融合蛋白的原核表达；(4)His‑tag‑(ScYLV‑MP)融合蛋白的纯化；(5)ScYLV‑MP蛋白的获得。采用本发明专利技术所述方法获得的ScYLV‑MP蛋白多克隆抗血清不仅准确率高、灵敏度高，而且特异性好，可实现甘蔗黄叶病毒及其运动蛋白的准确检测，具有较大的应用价值和市场前景。

Expression and purification of sugarcane yellow leaf virus movement protein and preparation of its polyclonal antiserum

【技术实现步骤摘要】
一种甘蔗黄叶病毒运动蛋白表达纯化方法及其多克隆抗血清的制备
本专利技术属于生物
，具体涉及一种检测甘蔗黄叶病毒及其运动蛋白的血清学方法及其专用表达纯化方法及其多克隆抗血清的制备。
技术介绍
甘蔗黄叶病毒(Sugarcaneyellowleafvirus，ScYLV)是侵染甘蔗的重要病毒，属于黄症病毒科(Luteoviridae)马铃薯卷叶病毒属(Polerovirus)。该病毒具有韧皮部局限的特点，主要通过蚜虫持久循回型和非增殖方式传播。ScYLV侵染造成的损失主要是感病植株叶片黄化并生长减缓，最大减产可达50％。甘蔗作为我国主要糖料作物，其产生的蔗糖占我国食糖产量的90％以上，同时可生产乙醇，为新能源产业发展作出贡献。近年来，甘蔗黄叶病毒引起的病害在我国主要甘蔗产区普遍发生，造成严重减产，从而对我国经济发展、能源产业发展等多领域构成威胁。ScYLV为正义单链RNA(+ssRNA)病毒，具有正二十面体球形病毒粒子，直径约为25-30nm，由180个蛋白亚基按T＝3形成，包裹着基因组RNA，无包膜。ScYLV基因组全长约5.本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种甘蔗黄叶病毒(Sugarcane yellow leaf virus，ScYLV)运动蛋白(ScYLV-MP)表达纯化方法，具体步骤为：/n(1)ScYLV-MP基因的调取及扩增；/n(2)ScYLV-MP基因原核表达载体构建；/n(3)His-tag-(ScYLV-MP)融合蛋白的原核表达；/n(4)His-tag-(ScYLV-MP)融合蛋白的纯化。/n

【技术特征摘要】
1.一种甘蔗黄叶病毒(Sugarcaneyellowleafvirus，ScYLV)运动蛋白(ScYLV-MP)表达纯化方法，具体步骤为：
(1)ScYLV-MP基因的调取及扩增；
(2)ScYLV-MP基因原核表达载体构建；
(3)His-tag-(ScYLV-MP)融合蛋白的原核表达；
(4)His-tag-(ScYLV-MP)融合蛋白的纯化。


2.根据权利要求1所述的表达纯化方法，其特征在于：所述ScYLV-MP基因的调取及扩增是以含有ScYLV运动蛋白基因全长的克隆质粒为模板，以5'-CATATGTCAGAAGACGCGCTAACCGT-3'(下划线为限制性内切酶NdeI的识别位点)和5'-CTCGAGTAAAGTCTTTCCCCCTG-3'(下划线为限制性内切酶XhoI的识别位点)为引物进行PCR扩增。


3.根据权利要求1-2任一项所述的表达纯化方法，其特征在于：所述ScYLV-MP基因原核表达载体构建是将步骤(1)中得到的PCR扩增产物和克隆载体pMD19-T进行连接，得到重组质粒pMD19-T-ScYLV-MP，用限制性内切酶NdeI和XhoI进行酶切，回收酶切片段，取载体pDB.His.MBP，用限制性内切酶NdeI和XhoI进行酶切，回收载体骨架，将所述酶切片段和所述载体骨架进行连接，得到重组质粒pDB.His.MBP-ScYLV-MP。


4.根据权利要求1-3任一项所述的纯化表达方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩成贵，张绍康，刘玉姿，王颖，张宗英，李大伟，于嘉林，王献兵，张永亮，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：北京;11