一种油茶籽油皂苷类化合物分类及结构推测方法技术

本发明专利技术涉及一种油茶籽油皂苷类化合物分类及结构推测方法，包括按照皂苷元骨架结构差异分成三种不同类型；总结油茶籽油不同类型皂苷类化合物在质谱中的裂解特征；对油茶籽油样品进行皂苷类化合物提取和检测基础上，结合裂解特征，根据皂苷元骨架结构、m/z差值以及现有茶皂苷的官能团位点，推测未知皂苷类化合物的结构。本发明专利技术提供的分类方法快速、准确，是一种系统的质谱解析方法，可为油茶籽油茶皂苷类化合物的定性分析提供理论指导，为油茶籽油的进一步深入分析和开发提供了参考。

A method for classification and structure prediction of saponins from Camellia oleifera seed oil

【技术实现步骤摘要】
一种油茶籽油皂苷类化合物分类及结构推测方法
本专利技术涉及分析方法
，尤其是一种油茶籽油皂苷类化合物分类及结构推测方法。
技术介绍
油茶作为世界四大木本油料之一，是我国的特色木本油料，在湖南、广西、江西等十多个省(市)广泛栽培，不与粮食争田地，属于我国重要国家战略资源。油茶籽油是一种高级本木植物油，不饱和脂肪酸可达90％左右，脂肪酸组成与橄榄油类似。油茶籽油还富含酚类化合物、维生素E以及角鲨烯等。另外油茶籽中还含有丰富的皂苷类化合物，榨油后的饼粕可开发茶皂素产品，但是油茶籽油中的皂苷类化合物分析报道较少。目前，油茶籽油皂苷类化合物基础数据几乎空白。然而，脂溶性皂苷类化合物作为油茶籽油特有的活性成分，对其开展研究可为油茶籽油质量标准及应用开发提供基础数据。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服现有技术中油茶籽油皂苷类化合物分析数据的不足，提供一种油茶籽油皂苷类化合物分类及结构推测方法，为其定性定量工作奠定科学基础。具体方案如下：一种油茶籽油皂苷类化合物分类及结构推测方法，包括：步骤1：按照皂苷元骨架结构差异分成三种不同类型，分别如下：步骤2：根据上述皂苷元骨架结构，列出茶皂苷糖基逐步丢失以及茶皂苷的官能团丢失的路径，总结出油茶籽油皂苷类化合物在质谱中的裂解特征；步骤3：对油茶籽油样品进行皂苷类化合物提取和检测，所述检测包括：采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱技术，获取色谱信息和质谱信息，结合步骤2中的油茶籽油皂苷类化合物在质谱中的裂解特征，根据皂苷元骨架结构、m/z差值以及现有茶皂苷的官能团位点，推测未知皂苷类化合物的结构。进一步的，所述步骤2中，裂解特征包括：CamelliageninB类型的茶皂苷在二级质谱中有特征碎片451.32，计算出的化学式为C30H44O3；CamelliageninA类型的茶皂苷在二级质谱中有特征碎片437.34，计算出的化学式为C30H46O2；TheasapogenolF类型的茶皂苷在二级质谱中特征碎片为497.32，计算出的化学式为C31H46O5。进一步的，所述步骤2中，茶皂苷糖基逐步丢失以及茶皂苷的官能团丢失的路径包括：①苷元骨架烷基链基团丢失②糖基逐步丢失③糖基链与皂苷元分离。进一步的，所述步骤2中，茶皂苷在质谱中有以下特征二级碎片：①苷元骨架烷基链基团丢失：茶皂苷中苷元骨架上的烷基链，包括Ang，Tig，MB，Isov，Hex或Butyryl，易丢失形成大于1100Da的特征碎片。②糖基逐步丢失：对茶皂苷施加适当的碰撞电压，四个糖基均可能丢失，且每丢失一个糖基后可能形成两种碎片：其中一种是断裂处脱水形成双键，另一种是加氢形成羟基，两者相差18Da，该裂解规律可能形成7种碎片。③糖基链与皂苷元分离：糖基除了一个一个丢失之外，也可能以糖基链，例如三个糖的形式整体丢失，形成451Da的特征碎片，其最外侧的糖为五碳糖；或481Da的特征碎片，其最外侧的糖为六碳糖的特征碎片。进一步的，所述步骤3中，对油茶籽油样品进行油皂苷类化合物提取的方法，以2.5g油茶籽油样品为例，各试剂用量对应于2.5g油茶籽油样品，则油茶籽油皂苷类化合物提取的方法为：准确称取2.5g油茶籽油样品于离心管中，加入3-7mL正己烷，加入20-30mL乙醇水混合溶液，涡旋3-7min，3000-4000rmp离心8-12min后收集下层，旋蒸干燥后加入8-12mL蒸馏水溶解，将提取液移至离心管中，加入8-12mL正丁醇，涡旋振荡2-5min后离心分离，重复2-4次，合并正丁醇提取液旋蒸至干，用甲醇水重溶得到提取液。进一步的，所述步骤3中，油茶籽油皂苷类化合物提取的方法，以2.5g油茶籽油样品为例，各试剂用量对应于2.5g油茶籽油样品，则油茶籽油皂苷类化合物提取的方法为：准确称取2.5g油茶籽油样品于离心管中，加入5mL正己烷，加入20-30mL乙醇水混合溶液，其中乙醇含量为65-85％，涡旋5min，3500rmp离心10min后收集下层，旋蒸干燥后加入10mL蒸馏水溶解，将提取液移至离心管中，加入10mL正丁醇，涡旋振荡3min后离心分离，重复3次，合并正丁醇提取液旋蒸至干，用250μl50％甲醇水重溶得到提取液，提取液过孔径为0.2-0.3μm的滤膜，收集过滤液备用；上述％皆为体积分数。进一步的，所述步骤3中，采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱技术，其中：色谱条件为：色谱柱：AgilentPoroshell120EC-C18，流动相A：0.1％甲酸水，流动相B：0.1％甲酸乙腈，梯度洗脱，流速：0.2-0.4mL/min，柱温：30±5℃，进样量：4±0.5μL；色谱条件中的％皆为体积分数；质谱条件为：离子化模式：ESI-，干燥气温度300±10℃，干燥器流速7±2L/min，毛细管电压3.5±0.5kV，雾化器压力35±5psig，鞘气温度350±10℃，鞘气流速10±2L/min，碎裂电压120±10V，一级质谱碰撞电压45±5V，二级质谱碰撞电压65±5V，离子扫描范围m/z＝100-1500。进一步的，色谱条件为：色谱柱：AgilentPoroshell120EC-C18(3.0mm×100mm，2.7μm)，流动相A：0.1％甲酸水，流动相B：0.1％甲酸乙腈，梯度洗脱(0-2min，90％A，10％B；2-6min，90％A→65％A，10％B→35％B；6-16min，65％A→35％A，35％B→65％B；16-18min，35％A→5％A，65％B→95％B；18-19.9min，5％A，95％B；19.9-20min，5％A→90A，95％B→10％B)，流速：0.3mL/min，柱温：30℃，进样量：4μL；色谱条件中的％皆为体积分数。进一步的，质谱条件为：离子化模式：ESI-，干燥气温度300℃，干燥器流速7L/min，毛细管电压3.5kV，雾化器压力35psig，鞘气温度350℃，鞘气流速10L/min，碎裂电压120V，一级质谱碰撞电压45V，二级质谱碰撞电压65V，离子扫描范围m/z＝100-1500。进一步的，所述步骤3中，采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱技术，包括：利用Q-TOF/MS质谱分析器的四极杆选择色谱峰对应的分子离子，在碰撞池中对其进行碰撞诱导解离，裂解所得的碎片离子通过TOF扫描得到二级质谱图。有益效果：本专利技术提供的油茶籽油皂苷类化合物分类及结构推测方法，可用于指导分析油茶籽油样品中茶皂苷的种类及结构。由于茶皂苷类化合物在质谱中裂解的规律性强，可根据茶皂苷骨架结构、m/z差值以及现有茶皂苷的官能团位点来对其结构进行合理推测。本专利技术提供的方法快速、准确，是一种相对较好的鉴定思路，可作为油茶籽油茶皂苷类化合物的分析方法，为油茶籽油的进一步深入分析和开发提供了参考。附图说明为了更清楚地说明本专利技术的技术方案，下面将对附图作简单的介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅涉及本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种油茶籽油皂苷类化合物分类及结构推测方法，其特征在于：包括：/n步骤1：按照皂苷元骨架结构差异分成三种不同类型，分别如下：/n

【技术特征摘要】
1.一种油茶籽油皂苷类化合物分类及结构推测方法，其特征在于：包括：
步骤1：按照皂苷元骨架结构差异分成三种不同类型，分别如下：



步骤2：根据上述皂苷元骨架结构，列出茶皂苷糖基逐步丢失以及茶皂苷的官能团丢失的路径，总结出油茶籽油皂苷类化合物在质谱中的裂解特征；
步骤3：对油茶籽油样品进行皂苷类化合物提取和检测，所述检测包括：采用超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱技术，获取色谱信息和质谱信息，结合步骤2中的油茶籽油皂苷类化合物在质谱中的裂解特征，根据皂苷元骨架结构、m/z差值以及现有茶皂苷的官能团位点，推测未知皂苷类化合物的结构。


2.根据权利要求1所述油茶籽油皂苷类化合物分类及结构推测方法，其特征在于：所述步骤2中，裂解特征包括：CamelliageninB类型的茶皂苷在二级质谱中有特征碎片451.32，计算出的化学式为C30H44O3；CamelliageninA类型的茶皂苷在二级质谱中有特征碎片437.34，计算出的化学式为C30H46O2；TheasapogenolF类型的茶皂苷在二级质谱中特征碎片为497.32，计算出的化学式为C31H46O5。


3.根据权利要求1所述油茶籽油皂苷类化合物分类及结构推测方法，其特征在于：所述步骤2中，茶皂苷糖基逐步丢失以及茶皂苷的官能团丢失的路径包括：①苷元骨架烷基链基团丢失②糖基逐步丢失③糖基链与皂苷元分离。


4.根据权利要求3所述油茶籽油皂苷类化合物分类及结构推测方法，其特征在于：所述步骤2中，茶皂苷在质谱中有以下特征二级碎片：
①苷元骨架烷基链基团丢失：茶皂苷中苷元骨架上的烷基链，包括Ang，Tig，MB，Isov，Hex或Butyryl，易丢失形成大于1100Da的特征碎片；
②糖基逐步丢失：对茶皂苷施加适当的碰撞电压，四个糖基均可能丢失，且每丢失一个糖基后可能形成两种碎片：其中一种是断裂处脱水形成双键，另一种是加氢形成羟基，两者相差18Da，该裂解规律可能形成7种碎片；
③糖基链与皂苷元分离：糖基除了一个一个丢失之外，也可能以糖基链，例如三个糖的形式整体丢失，形成451Da的特征碎片，其最外侧的糖为五碳糖；或481Da的特征碎片，其最外侧的糖为六碳糖的特征碎片。


5.根据权利要求1所述油茶籽油皂苷类化合物分类及结构推测方法，其特征在于：所述步骤3中，对油茶籽油样品进行油皂苷类化合物提取的方法，以2.5g油茶籽油样品为例，各试剂用量对应于2.5g油茶籽油样品，则油茶籽油皂苷类化合物提取的方法为：准确称取2.5g油茶籽油样品于离心管中，加入3-7mL正己烷，加入20-30mL乙醇水混合溶液，涡旋3-7min，3000-4000rmp离心8-12min后收集下层，旋蒸干燥后加入8-12mL蒸馏水溶解，将提取液移至离心管中，加入8-12mL正丁醇，涡旋振荡2-5min后离心分离，重复2-4次，合并正丁醇提取液旋蒸至干，用甲醇水重溶得到提取液。


6.根据权利要求4所述油茶籽油皂苷类化合物分类及结构推测方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：王晓琴，邢晨，徐敦明，
申请(专利权)人：华侨大学，
类型：发明
国别省市：福建;35