一种检测动物源性食品中兽药残留方法及其应用技术

本发明专利技术涉及一种检测动物源性食品中兽药残留的方法及其应用，所述方法包括将动物源性食品经提取、净化后进行高效液相色谱‑高分辨质谱分析；所述高效液相色谱条件为：色谱柱：Agilent Eclipse plus C18；流动相：A：0.1％甲酸‑水溶液B：乙腈；洗脱程序：0～0.5min A的含量保持95～98％，0.5～20min A的含量线性变化至0，20～25min A的含量维持0，25～28min A的含量维持95～98％。本发明专利技术的检测动物源性食品中兽药残留的方法可以提取并检测各类动物源食品中155种兽药残留，通过高效液相色谱‑高分辨质谱联用技术可以对兽药残留同时进行定性和定量分析。

A method for the determination of veterinary drug residues in animal derived foods and its application

【技术实现步骤摘要】
一种检测动物源性食品中兽药残留方法及其应用
本专利技术涉及食品安全领域，尤其涉及一种检测动物源性食品中兽药残留方法及其应用。
技术介绍
近些年，食品安全问题越来越成为广大消费者关注的问题，食品检验机构也随之面临着大量的检测工作。现有的用于家畜和鱼类饲养过程中的兽药数量有数百种之多，其化学结构、性质差别极大，用单一的方法对其进行检测难度极大，目前常用的兽药残留的检测标准方法有100多种。通常一个标准检验方法只适用于一类基质或几类基质中单类兽药残留的分析，需要用多个方法分析多个基质中的100多种兽药残留，对于常规检查任务来说，工作量巨大，耗时耗力。为应对这一问题，使用液相色谱串联高分辨质谱对复杂样品基质中的多种兽药残留进行痕量分析及其快速定量检测，能够大大提高实验室的检测通量。目前，国内外开展的多兽残快速筛查方法较多，也有多种使用液相色谱串联高分辨质谱检测某一类样品基质中兽药残留的方法，但一般检测范围较窄，仅涉及某一类动物源性食品，例如鱼类基质，并且检测兽药种类较少，难以全面，准确地对动物源性食品中的兽药残留进行检测。
技术实现思路
本专利技术提供一种检测动物源性食品中兽药残留方法及其应用，通过prime固相萃取柱净化样品结合高效液相色谱/高分辨质谱联用技术可以检测出动物源性食品中的155种兽药残留。第一方面，本专利技术提供一种检测动物源性食品中兽药残留的方法，包括将动物源性食品经提取、净化后进行高效液相色谱-高分辨质谱分析；所述高效液相色谱的条件为：色谱柱：AgilentEclipseplusC18；流动相：A：0.1％甲酸-水溶液B：乙腈；洗脱程序：0～0.5minA的含量保持95～98％，0.5～20minA的含量线性变化至0，20～25minA的含量维持0，25～28minA的含量维持95～98％。进一步地，所述高效液相色谱的条件为：色谱柱：AgilentEclipseplusC18；流动相：A：0.1％甲酸-水溶液B：乙腈；洗脱程序：0～0.5minA的含量保持98％，0.5～20minA的含量线性变化至0，20～25minA的含量维持0，25～28minA的含量维持98％。在大批量兽药的高通量检测过程中，容易出现不同兽药色谱峰重叠或同分异构体无法实现色谱分离的问题，一方面，如果大部分的化合物在同一时间出峰，会导致质谱对各化合物离子的扫描时间减少，从而降低仪器的灵敏度；另一方面，例如在磺胺类兽药中存在四对同分异构体，如果这些化合物不在色谱条件下实现分离，将无法在质谱条件下区别。本专利技术针对155种兽药设定特定的高效液相色谱分析的条件，解决了这一问题，在检测结果中，可以准确地对155种兽药进行定性和定量分析。进一步地，所述将动物源性食品经提取、净化具体步骤为：在所述动物源性食品加入提取液中，混匀离心后取上清液过PrimeHLB固相萃取柱；其中，所述提取液包括以下质量百分比的成分：0.15～0.25％甲酸、75～85％乙腈。在实际分析过程中，由于各成分间相互干扰，导致各种兽药检出限不同，多种兽药难以同时检出，容易出现假阴性结果。本专利技术发现采用PrimeHLB固相萃取柱，配合特定采用含0.2％甲酸的80％乙腈水溶液提取各类动物源性食品中的残留兽药，在提取的同时对提取液进行净化，可以有效降低基质的干扰作用并减少对质谱的污染，可以提取至少155种残留的兽药成分。进一步地，在所述进行高效液相色谱-高分辨质谱分析后，进行如下步骤：(1)将获取的母离子和二级碎片离子的质核比、保留时间，和各兽药的基质加标样品中的相应标准进行对比，对所述动物源性食品中的兽药残留进行定性分析；(2)通过外标法检测各兽药的浓度，对所述动物源性食品中的兽药残留进行定量分析。进一步地，所述兽药为磺胺苯吡唑、磺胺苯酰、磺胺吡啶、磺胺醋酰、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺恶唑、磺胺二甲基异唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺二甲异嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺氯吡嗪、磺胺氯哒嗪、磺胺脒、磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺甲噻二唑、奥比沙星、丹诺沙星、恩诺沙星、氟甲喹、氟罗沙星、环丙沙星、洛美沙星、萘啶酸、诺氟沙星、培氟沙星、沙拉沙星、双氟沙星、司帕沙星、伊诺沙星、氧氟沙星、克伦特罗、莱克多巴胺、氯丙那林、喷布特罗、异丙喘宁、福莫特罗、非诺特罗、塞布特罗、班布特罗、苯乙醇胺A、噻苯达唑、沙丁胺醇、特布他林、妥布特罗、西马特罗、氟苯尼考、金霉素、强力霉素、四环素、土霉素、红霉素、吉他霉素、林可霉素、泰乐菌素、替米考星、泰万菌素、竹桃霉素、罗硝达唑、地美硝唑、羟基甲硝唑、羟甲基甲硝咪唑、甲硝唑、奥芬达唑、苯硫氨酯、芬苯达唑、氨苄西林、苯唑西林、氯唑西林、双氯西林、青霉素、头孢匹啉、头孢喹肟、头孢噻呋、头孢氨苄、19-去甲睾酮、醋酸甲孕酮、睾酮、甲基睾酮、氯丙嗪、阿扎哌隆、异丙嗪、乙酰丙嗪、地西泮、多拉菌素、伊维菌素、马杜霉素、盐霉素、莫能菌素、喹恶啉-2-羧酸、卡巴氧、喹乙醇、脱氧卡巴氧、左旋咪唑、克百威、蝇毒磷、倍硫磷砜、倍硫磷亚砜、马拉硫磷、辛硫磷、敌百虫、甲氧苄啶、阿托品、普鲁卡因、利多卡因、东莨菪碱、山莨菪碱、磺胺、马布特罗、头孢唑啉、金刚烷胺、金刚乙胺、利巴韦林、奥司他韦、差向土霉素、差向金霉素、去甲基金霉素、甲苄喹啉、氯羟吡啶、氨丙啉、常山酮、甲基盐霉素、阿苯达唑-2-氨基砜、阿苯达唑砜、阿苯达唑亚砜、阿苯达唑、磺胺硝苯、氯霉素、倍氯米松、醋酸可的松、地塞米松、甲基泼尼松龙、可的松、泼尼松、氢化可的松、醋酸氟氢可的松、倍他米松、己烯雌酚、雌二醇、己烷雌酚、拉沙洛菌素、氟虫腈、克拉珠利、尼卡巴嗪、氟虫腈砜、氟虫腈亚砜、氟甲腈、甲砜霉素和阿维菌素中的一种或多种。进一步地，所述定性分析的标准为：在分析结果中，任一兽药的母离子与二级碎片离子的精确质核比的相对偏差在5ppm以内，保留时间的相对偏差在±2.5％以内即可判断所述动物源性食品中含有该兽药。进一步地，所述外标法具体为：取阴性样品，分别配置每一种兽药不同浓度的标准溶液后，进行高效液相色谱-高分辨质谱分析，根据色谱峰面积和对应的浓度绘制标准工作曲线，通过所述标准工作曲线对所述动物源性食品中的兽药残留进行定量分析。进一步地，在所述进行高效液相色谱-高分辨质谱分析前，将萃取液吹干后加入1mL的初始流动相后过滤。进一步地，所述高分辨质谱的参数为：高分辨质谱：ScanType：FullMS--dd-MS2，Polarity：Negative，Sheathgasflowrate:40L，Auxgasflowrate:15L，Sprayvoltage:3.5KV，Capillarytemp:325℃，Auxgasheatertemp:450℃，FullMSResolution:60000，dd-MS2Resolution:15000。本专利技术进一步提供上述方法在动物源性食本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测动物源性食品中兽药残留的方法，其特征在于，包括：/n将动物源性食品经提取、净化后进行高效液相色谱-高分辨质谱分析；所述高效液相色谱的条件为：/n色谱柱：Agilent Eclipse plus C18；流动相：A：0.1％甲酸-水溶液B：乙腈；洗脱程序：/n0～0.5min A的含量保持95～98％，/n0.5～20min A的含量线性变化至0，/n20～25min A的含量维持0，/n25～28min A的含量维持95～98％。/n

【技术特征摘要】
1.一种检测动物源性食品中兽药残留的方法，其特征在于，包括：
将动物源性食品经提取、净化后进行高效液相色谱-高分辨质谱分析；所述高效液相色谱的条件为：
色谱柱：AgilentEclipseplusC18；流动相：A：0.1％甲酸-水溶液B：乙腈；洗脱程序：
0～0.5minA的含量保持95～98％，
0.5～20minA的含量线性变化至0，
20～25minA的含量维持0，
25～28minA的含量维持95～98％。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱的条件为：
色谱柱：AgilentEclipseplusC18；流动相：A：0.1％甲酸-水溶液B：乙腈；洗脱程序：
0～0.5minA的含量保持98％，
0.5～20minA的含量由98％线性变化至0，
20～25minA的含量维持0，
25～28minA的含量维持98％。


3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述将动物源性食品经提取、净化的具体步骤为：
将所述动物源性食品加入提取液中，混匀离心后取上清液过PrimeHLB固相萃取柱；其中，所述提取液包括以下质量百分比的成分：0.15～0.25％甲酸、75～85％乙腈。


4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于，在所述进行高效液相色谱-高分辨质谱分析后，进行如下步骤：
(1)将获取的母离子和二级碎片离子的质核比、保留时间，和各兽药的基质加标样品中的相应标准进行对比，对所述动物源性食品中的兽药残留进行定性分析；
(2)通过外标法检测各兽药的浓度，对所述动物源性食品中的兽药残留进行定量分析。


5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述兽药为磺胺苯吡唑、磺胺苯酰、磺胺吡啶、磺胺醋酰、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺恶唑、磺胺二甲基异唑、磺胺二甲嘧啶、磺胺二甲异嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺氯吡嗪、磺胺氯哒嗪、磺胺脒、磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺甲噻二唑、奥比沙星、丹诺沙星、恩诺沙星、氟甲喹、氟罗沙星、环丙沙星、洛美沙星、萘啶酸、诺氟沙星、培氟沙星、沙拉沙星、双氟沙星、司帕沙星、伊诺沙星、氧氟沙星、克伦特罗、莱克多巴胺、氯丙那林、喷布特罗、异丙喘宁、福莫特罗、非诺特罗、塞布特罗、班布特罗、苯乙醇胺A、噻苯达唑、沙丁胺醇、特布他林、妥布特罗、西马特罗、氟苯尼考、金霉素、强力霉素、四环素、土霉素、红霉素、吉他霉素、林可霉素、泰乐菌素、替米考星、泰...

【专利技术属性】
技术研发人员：王守伟，赵文涛，郭文萍，李莹莹，李石磊，郭超，李志刚，姜锐，王娟强，王妍，张颖颖，宋永青，陈超，魏颖慧，
申请(专利权)人：中国肉类食品综合研究中心，
类型：发明
国别省市：北京;11