一株降低生物胺的肉葡萄球菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株降低生物胺的肉葡萄球菌及其应用，所述肉葡萄球菌已于2019年7月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.18295，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。该菌株具有较好的降解生物胺能力，对于酪胺、亚精胺、腐胺和尸胺这4种发酵食品中常见的生物胺具有较明显的降解作用，降解率分别为50.88％、51.83％、31.14％和22.82％，并且在豆酱生产环境中具有稳定性，可以用于豆酱发酵。

A strain of Staphylococcus botulinus with low biogenic amines and its application

【技术实现步骤摘要】
一株降低生物胺的肉葡萄球菌及其应用
本专利技术涉及一株降低生物胺的肉葡萄球菌及其应用，属于生物发酵

技术介绍
肉葡萄球菌(Staphylococcuscarnosus)是肉制品发酵行业中形成肉制品风味的关键菌种，在欧洲等地被用作发酵肉产品起始培养物已经超过60年。与其他葡萄球菌相比，它不产生任何毒素、溶血素、凝固酶或聚集因子，是葡萄球菌属中被完全确认的食品级GRAS(generallyregardedassafe)菌株。肉葡萄球菌具有很低的胞外蛋白水解能力，所以该菌可以作为基因克隆宿主菌用于分子遗传学方面进行葡萄球菌属相关代谢途径的研究，以及安全正常地表达和分泌异源蛋白。豆酱，通常是以黄豆或蚕豆、面粉、辣椒及盐水为主要原料发酵而成的我国传统豆类调味食品。由于酿造过程中是一个开放式过程，故有多种微生物参与豆酱的发酵。历经复杂的生化反应，形成色香味俱一体的营养丰富的调味品。然而在其发酵过程中，经过微生物的作用往往形成多种多样的物质，其中包含一些有毒物质如生物胺。生物胺是一类含氮有机化合物，食品中常见的主要有以下八种，分别为腐胺、尸胺、亚精胺、精胺、色胺、苯乙胺、组胺和酪胺。过量摄入生物胺可能会导致许多健康问题，如引发头痛、低血压、恶心、潮热、局部炎症、心悸、高血压和消化问题等，因此，为了保障食品安全，需要采取相关方法控制生物胺的含量。现代工厂可通过将食品进行辐照、气调包装、高静水压处理、添加食品添加剂和防腐剂等手段控制生物胺，但可能对人体有潜在危害。安全环保的生物学方法越来越被现代人们接受，如在食品发酵过程中添加降解生物胺的菌株或不产生生物胺的优势菌株，从而控制生物胺的含量。因此筛选一株既能适应豆酱生产环境又能高效降解生物胺的菌株，对于制备安全健康的豆酱具有重要的应用价值。在文献《不同发酵剂对发酵香肠中风味物质释放及有害生物胺控制的影响》(公开日2019年7月5日)中，王德宝等将肉葡萄球菌与植物乳杆菌同时接种至发酵香肠中，结果表明，接种肉葡萄杆菌与植物乳杆菌的复合组和单一接种植物乳杆菌相比，在组胺和酪胺的降解中显示出优势：复合组降解率分别为4.8％和66.6％，高于单一组的3.8％和61.7％。由此，可以看出肉葡萄球菌对于生物胺有一定的降解能力。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的是筛选得到一株肉葡萄球菌M43，已于2019年7月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.18295，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。本专利技术的第二个目的是提供所述肉葡萄球菌M43的培养方法，所述方法是将肉葡萄球菌M43以10～50mL/L的接种量接种至培养基中，于35～40℃恒温环境中静置培养20～30h。本专利技术的第三个目的是提供一种降低生物胺的方法，所述方法是将所述肉葡萄球菌M43以10～50mL/L的接种量接种至含生物胺的液体、半固体或固体中。本专利技术的第四个目的是提供一种所述肉葡萄球菌M43的活化方法，所述方法是将肉葡萄球菌M43以10～50mL/L的接种量接种至培养基中。在本专利技术的一种实施方式中，所述活化方法的培养条件为30～40℃培养20～30h。在本专利技术的一种实施方式中，所述培养基为改良MRS培养基。本专利技术的第五个目的是提供一种降低豆酱中生物胺含量的方法，所述方法是在豆酱发酵第0天接种所述肉葡萄球菌M43，接种量为10～50mL/L，搅拌均匀后30～40℃发酵30～40天。在本专利技术的一种实施方式中，肉葡萄球菌M43在豆酱中菌株浓度为103～109CFU/g。本专利技术的第六个目的是提供应用所述肉葡萄球菌M43制备的豆酱产品。在本专利技术的一种实施方式中，所述调味品包括黄豆酱或豆瓣酱或豆面酱。本专利技术还提供所述肉葡萄球菌M43在食品领域降低生物胺含量方面的应用。在本专利技术的一种实施方式中，所述食品包括需要用黄豆或蚕豆或肉类发酵的食品。在本专利技术的一种实施方式中，所述食品包括酱油、香肠、鱼露。有益效果：本专利技术提供的肉葡萄球菌M43是豆酱发酵过程中的无害菌，对于酪胺、亚精胺、腐胺和尸胺这4种发酵食品中常见的生物胺具有较明显的降解作用，降解率分别为50.88％、51.83％、31.14％和22.82％，可用于控制豆酱等发酵食品生产过程中的生物胺含量。并且肉葡萄球菌M43发酵豆酱中的风味物质的数量较对照高出了108.3％，风味物质种类更加多样。生物材料保藏本专利技术所提供的肉葡萄球菌(Staphylococcuscarnosus)M43，已于2019年7月25日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.18295，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。具体实施方式配制BAs培养基：磷酸二氢钾2g、柠檬酸铵2g、氯化钠50g、七水合硫酸镁0.4g、硫酸锰0.03g、硫酸亚铁0.04g、硫胺素0.01g、葡萄糖2g、腐胺二盐酸盐100mg、尸胺二盐酸盐100mg、亚精胺100mg、精胺100mg、色胺100mg、苯乙胺100mg、组胺二盐酸盐100mg，酪胺盐酸盐100mg、琼脂20g、去离子水定容至1L。配制改良MRS培养基：大豆蛋白胨10g，葡萄糖20g，氯化钠50g，柠檬酸氢二铵2g，磷酸氢二钾2g，硫酸镁0.58g，硫酸锰0.25g，腐胺二盐酸盐100mg，尸胺二盐酸盐100mg，亚精胺100mg，精胺100mg，色胺100mg，苯乙胺100mg，组胺二盐酸盐100mg，酪胺盐酸盐100mg，去离子水定容至1L。生物胺含量测定：使用液相色谱法方法测定，具体步骤参见朱天傲等《国产酱类产品中的生物胺》。菌株的活化方法：将菌株以20mL/L的接种量接种至培养基中，37℃恒温培养箱静置培养24h。实施例1生物按降解菌株的筛选及鉴定(1)生物胺降解菌株的初筛：取5g酱醅于100mL锥形瓶中，加入50mL生理盐水，于摇床上充分振荡混匀，取悬浮液进行梯度稀释至10-5，每个梯度取100μL悬浮液于BAs固体培养基和改良MRS固体培养基进行涂布，并于37℃培养箱进行培养，待菌落生长良好，方可分离。生物胺降解率测定：将从BAs固体培养基和改良MRS固体培养基分离的单菌落分别在LB和改良MRS培养基进行活化，调节初始OD值在含有100mg/L生物胺的磷酸盐缓冲液中为0.6，并在37℃培养箱中静置培养24h。通过4000×g离心5min得到上清液经过0.22μm滤膜过滤，并取2mL放入10mL离心管中，加入1mL2mol/LNaOH溶液和20μL苯甲酰氯溶液，立即将离心管放入水浴恒温振荡器，30℃、200r/min振荡20min。振荡结束后加入2mL饱和NaCl溶液停止衍生化反应，再加入3mL无水乙醚进行生物胺的萃取，使用涡旋震荡仪萃取1min，小心吸取上清液置于5mL离心管中，使用氮吹仪吹干。用1mL乙腈溶解管中残留物，0.22μ本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株肉葡萄球菌(Staphylococcus carnosus)，于2019年7月25日由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC No.18295，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。/n

【技术特征摘要】
1.一株肉葡萄球菌(Staphylococcuscarnosus)，于2019年7月25日由中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCCNo.18295，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。


2.一种培养权利要求1所述肉葡萄球菌的方法，其特征在于，将肉葡萄球菌以体积比1％～5％的接种量接种至培养基，在35～40℃恒温环境中静置培养20～30h。


3.一种降低生物胺的方法，其特征在于，所述方法是将权利要求1所述肉葡萄球菌接种至含生物胺的液体、半固体或固体产品中。


4.一种降低豆酱中生物胺含量的方法，其特征在于，所述方法是在豆酱发酵过程中接种权...

【专利技术属性】
技术研发人员：钮成拓，赵佳迪，李崎，刘春凤，王金晶，郑飞云，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32