一种湖北麦冬多糖的高产细菌菌株及其应用制造技术

本发明专利技术公开一种湖北麦冬多糖的高产细菌菌株及其应用，所述湖北麦冬多糖的高产细菌菌株的分类学命名为砖红色微杆菌(Microbacterium testaceum)EBPDAK006，其保藏编号为CCTCC NO：M2018785。本发明专利技术提供的湖北麦冬多糖的高产细菌菌株，经液体发酵能够得到湖北麦冬多糖，可有效解决湖北麦冬多糖生产困难的问题，且通过微生物发酵的方式可快速化、工厂化、规模化地生产湖北麦冬多糖。

A high yield bacterial strain of Ophiopogon japonicus polysaccharide and its application

【技术实现步骤摘要】
一种湖北麦冬多糖的高产细菌菌株及其应用
本专利技术涉及微生物
，特别涉及一种湖北麦冬多糖的高产细菌菌株及其应用。
技术介绍
湖北麦冬多糖，是国家地理标志产品、道地中药材植物——湖北麦冬Liriopespicatavar.proliferaY.T.Ma块根的主要活性成分之一，研究表明：湖北麦冬多糖具有抗心肌缺血、抗血栓形成、耐缺氧、抗衰老、降血糖等方面的药理作用，它对改善机体免疫系统、增进胃肠运动机能等方面都有着积极的影响，最新的研究表明它还具有抗肿瘤作用。传统的湖北麦冬多糖生产，主要还是通过直接分离湖北麦冬植物块根提取物获得。但是，在湖北麦冬实际种植生产中，存在着诸如“连作障碍导致种植面积相对较小”、“受气候条件影响较大”、“块根生产周期长”、“多糖提取成本高”等因素，导致湖北麦冬多糖的市场投放受到限制。目前，还未见报道一种能够通过微生物发酵产生湖北麦冬多糖的内生细菌及其应用。
技术实现思路
本专利技术的主要目的是提出一种湖北麦冬多糖的高产细菌菌株，旨在通过微生物发酵来提高湖北麦冬多糖的产量。为实现上述目的，本专利技术提出一种湖北麦冬多糖的高产细菌菌株，所述湖北麦冬多糖的高产细菌菌株的分类学命名为砖红色微杆菌(Microbacteriumtestaceum)EBPDAK006，其保藏编号为CCTCCNO：M2018785。可选地，所述湖北麦冬多糖的高产细菌菌株的16SrRNA基因序列如SEQIDNO.1所示。所述湖北麦冬多糖的高产细菌菌株的分离方法包括以下步骤：将新鲜湖北麦冬植物块根清洗干净，用乙醇浸泡1～3min并用水漂洗2～4次，再用次氯酸钠溶液浸泡1～3min并用水漂洗3～5次，无菌滤纸蘸干得消毒样品；将所述消毒样品的两头褐变部分剪去，取块根组织块并加水研磨，得匀浆液，稀释所述匀浆液并取悬液涂布PDA培养基平板，用封口膜密封后置于37℃恒温培养；挑取生长良好的呈白色，圆团状，表面平整光滑良好的菌落移至新的PDA培养基平板中，分别进行多次划线、纯化培养，最终得到湖北麦冬多糖的高产细菌菌株。本专利技术还提出一种湖北麦冬多糖的高产细菌菌株的应用，该应用采用所述湖北麦冬多糖的高产细菌菌株通过液体发酵制备得到湖北麦冬多糖。上述发酵制备湖北麦冬多糖具体包括以下步骤：将所述的湖北麦冬多糖的高产细菌菌株接入PDA培养基试管，活化培养，得活化菌种；将所述活化菌种接入种子培养基中，振荡培养，得种子；将所述种子接入液体发酵培养基，振荡培养，得发酵混合物；将所述发酵混合物快速冷冻成固态后，进行低温冷冻干燥处理，得发酵产物；将所述发酵产物研磨成粉末，用乙醇对粉碎物进行多次洗涤，并烘干得烘干样品；将所述烘干样品加入水中，水浴加热后过滤，对滤渣再重复一次上述步骤，合并滤液并离心，取上清液透析，得透析液；将所述透析液减压浓缩得浸膏，再用乙醇对所述浸膏进行醇沉，得醇沉产物；将所述醇沉产物依次经无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，再干燥得湖北麦冬多糖，低温保存。本专利技术提供的湖北麦冬多糖的高产细菌菌株，通过液体发酵后，可生产出湖北麦冬多糖，具有快速化、工厂化、规模化的优点，可避免化学合成对环境造成的污染，更能规避湖北麦冬药材种植生产中的各种不利因素，具有较大的应用价值。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅为本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。图1为本专利技术实施例1中砖红色微杆菌在PDA培养基上的形态图；图2(a)为湖北麦冬块根提取的多糖的酸解单糖的HPLC检测图；图2(b)本专利技术实施例2制备的菌株发酵液多糖提取物中的酸解单糖的HPLC检测图；图3为本专利技术实施例2制备的菌株发酵液多糖提取物中的湖北麦冬多糖对OH、O2-、DPPH、ABTS自由基的清除活性。具体实施方式为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。本专利技术提出一种湖北麦冬多糖的高产细菌菌株，所述湖北麦冬多糖的高产细菌菌株的分类学命名为砖红色微杆菌(Microbacteriumtestaceum)EBPDAK006，其保藏编号为CCTCCNO：M2018785，保藏日期为2018年11月12日，保藏单位为中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址为中国.武汉.武汉大学。在实际应用的过程中，为了便于运输等原因，有必要将所述湖北麦冬多糖的高产细菌菌株扩大培养制成组合物(特别是微生物菌剂)的形式以扩大其应用范围。本专利技术还提供了组合物，其含有所述湖北麦冬多糖的高产细菌菌株的培养物。进一步地，所述组合物为液体、冷冻或干燥粉末形式。以本行业常用的制剂形式来表述，如颗粒剂、悬浮剂、可湿性粉剂、乳液或液剂。本专利技术还提出一种湖北麦冬多糖的高产细菌菌株的分离方法，在本专利技术提供的湖北麦冬多糖的高产细菌菌株的分离方法的一实施例中，所述湖北麦冬多糖的高产细菌菌株的分离方法包括如下步骤：步骤S10、将新鲜湖北麦冬植物块根清洗干净，用乙醇浸泡1～3min并用水漂洗2～4次，再用次氯酸钠溶液浸泡1～3min并用水漂洗3～5次，无菌滤纸蘸干得消毒样品。具体实施时，使用大量自来水充分清洗新鲜湖北麦冬植物块根表面泥土，然后装入干净的烧杯中，加入去离子水，置于超声波清洗器中反复清洗，直至清洗后的水变得极为清澈；用无菌滤纸蘸干麦冬块根表面的水分后，再按下述步骤处理：先用75％(V/V)乙醇浸泡块根2min，用无菌水漂洗2～4次；再用有效氯含量4～6％的次氯酸钠溶液浸泡2min，后用大量无菌水连续漂洗3～5次，再用无菌滤纸蘸干水分。步骤S20、将所述消毒样品的两头褐变部分剪去，取块根组织块并加水研磨，得匀浆液，稀释所述匀浆液并取悬液涂布PDA培养基平板，用封口膜密封后置于37℃恒温培养。具体实施时，取上述表面消过毒的麦冬块根样品，无菌条件下剪去块根两头褐变部分，称取块根组织块1.0g左右，加5mL无菌水充分研磨后，吸取0.5mL匀浆液稀释至10-3后，取悬液涂布PDA培养基平板，用parafilm封口膜密封后置于37℃恒温培养12～18h。步骤S30、挑取生长良好的呈白色，圆团状，表面平整光滑良好的菌落移至新的PDA培养基平板中，分别进行多次划线、纯化培养，最终得到所述湖北麦冬多糖的高产细菌菌株。本专利技术还提出一种湖北麦冬多糖的高产细菌菌株的应用，该应用采用所述湖北麦冬多糖的高产细菌菌株通过液体发酵制备得到湖北麦冬多糖。其中，所用的液体发酵培养基是PDB培养基，所述液体本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种湖北麦冬多糖的高产细菌菌株，其特征在于，所述湖北麦冬多糖的高产细菌菌株的分类学命名为砖红色微杆菌(Microbacterium testaceum)E BPDAK006，其保藏编号为CCTCC NO：M2018785。/n

【技术特征摘要】
1.一种湖北麦冬多糖的高产细菌菌株，其特征在于，所述湖北麦冬多糖的高产细菌菌株的分类学命名为砖红色微杆菌(Microbacteriumtestaceum)EBPDAK006，其保藏编号为CCTCCNO：M2018785。


2.如权利要求1所述的湖北麦冬多糖的高产...

【专利技术属性】
技术研发人员：余海忠，郑炜炜，张得祥，田文清，于博，王海燕，黄升谋，阎华，孙永林，李云捷，
申请(专利权)人：湖北文理学院，
类型：发明
国别省市：湖北;42