本发明专利技术涉及生物技术领域，涉及一种醛固酮胶乳增强检测试剂盒，尤其涉及一种醛固酮胶乳增强检测试剂盒的制备方法，公开了包括试剂R1和试剂R2的组分和浓度，所述试剂R2由第二缓冲液、保存液以及胶乳微球抗体偶联物组成，其保存液由甘氨酸、第二稳定剂、第二防腐剂构成，胶乳微球抗体偶联物由胶乳微球、抗醛固酮单克隆抗体、1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐。本发明专利技术的优点是：该该试剂盒具有稳定性好、灵敏度高、线性范围宽、特异性高、精密度好、检测时间短特点，可广泛应用到基础和临床医学的各个领域。
An aldosterone latex enhanced detection kit and its preparation method
【技术实现步骤摘要】
一种醛固酮胶乳增强检测试剂盒及其制备方法
本专利技术涉及生物
，涉及一种醛固酮胶乳增强检测试剂盒，尤其涉及一种醛固酮胶乳增强检测试剂盒的制备方法。
技术介绍
醛固酮(英文：Aldosterone)是一种类固醇类激素(盐皮质激素家族)，主要作用于肾脏，进行钠离子及水分子的再吸收。整体来说，醛固酮为一种增进肾脏对于离子及水分子再吸收作用的一种激素，为肾素-血管紧张素系统的一部分，其作用是促进Na+在体内贮留，同时排出K+，是由肾上腺皮质球状带生成，并受肾脏分泌的血管紧张肽原酶，即血管紧张肽的调节，醛固酮进入远曲小管和集合管上皮细胞后，与胞浆内受体结合，形成激素-受体复合体，后者通过核膜，与核中DNA特异性结合位点相互作用，调节特异性mRNA转录，最终合成多种醛固酮诱导蛋白，进而使管腔膜对Na+的通透性增大，线粒体内ATP合成和管周膜上钠泵的活动性增加。从而导致对Na+的重吸收增强，对水的重吸收增加，K+的排出量增加。目前在国内，醛固酮检测灵敏度较低，线性范围较窄，检测过程耗时长，并且通常只适用手工操作，不利于全自动检测仪器的检测，从而限制了该方法的推广应用。
技术实现思路
本专利技术的目的是：针对上述不足，提供稳定性好、灵敏度高、线性范围宽、特异性高、精密度好、检测时间短的一种醛固酮胶乳增强检测试剂盒及其制备方法。为达到上述目的，本专利技术采用的技术方案是：一种醛固酮胶乳增强检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1的各组分及浓度包括：所述试剂R2由第二缓冲液、保存液以及胶乳微球抗体偶联物组成，其保存液由甘氨酸、第二稳定剂、第二防腐剂构成，胶乳微球抗体偶联物由胶乳微球、抗醛固酮单克隆抗体、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐构成，各组分的浓度为：1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐0.01-0.3g/L。所述试剂R1以及试剂R2中的第一缓冲液和第二缓冲液包括PBS缓冲液、HEPES缓冲液、甘氨酸缓冲体系、MES缓冲液、Tris缓冲液中的一种或几种。所述试剂R1的第一稳定剂以及R2中的第二稳定剂均为酪蛋白、甘露醇、牛血清白蛋白中的一种或几种以上混合物。所述试剂R1中的表面活性剂为吐温20、曲拉通、聚乙烯吡咯烷酮、辛基苯基聚氧乙烯醚中的一种或几种以上混合物。所述试剂R1中的第一防腐剂以及R2中的第二防腐剂均为叠氮钠、Proclin-950、Proclin-300、硫柳汞中的一种。所述试剂R1的pH在6.00-8.50之间，所述试剂R2的pH在6.00-8.50之间。一种醛固酮胶乳增强检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：A)、试剂R1制备：在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌子至中档转速，使溶液保持中速转动状态，边搅拌边投入第一缓冲液、第一稳定剂、D-海藻糖、表面活性剂、聚乙二醇6000和第一防腐剂，搅拌20-30分钟至物料完全溶解、溶液清澈透明、配液罐底部无沉淀后，调节pH值到6.00-8.50之间，最后定容至最终体积，存放在成品罐中，进行标识；B)、试剂R2制备：B1缓冲液的制备：在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌子至中档转速，使溶液保持中速转动状态，边搅拌边投入第二缓冲液，搅拌20-30分钟至物料完全溶解，调节pH值到6.00-8.50之间，继续搅拌5-10分钟至溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀，定容至最终体积，溶液存放备用，进行标识；B2保存液的制备：在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌子至中档转速，使溶液保持中速转动状态，边搅拌边投入甘氨酸、第二稳定剂和第二防腐剂，搅拌20-30分钟至物料完全溶解，调节pH值到6.00-8.50之间，继续搅拌5-10分钟至全部物料完全溶解，溶液清澈透明，配液罐底部无沉淀,定容至最终体积，溶液存放备用，进行标识；B3胶乳微球抗体偶联物的制备：将胶乳微球以缓冲液稀释到0.1-2.0％的浓度，将抗醛固酮单克隆抗体以缓冲液稀释到0.05-1.5g/L的浓度，二者进行混匀，将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐以缓冲液溶解到0.01-0.3g/L的浓度，边摇匀边滴加入上述混合溶液中，室温反应180分钟，加入牛血清白蛋白封闭，振荡混匀，室温反应60分钟，将混合液以14800rpm的转速离心30分钟，吸去上清，加入保存液，超声重悬，重复离心清洗2次，最后一次离心去上清后，加入保存液，超声重悬，将制备好的R2装入成品罐中，进行标识。与现有技术相比，本专利技术所达到的技术效果是：该专利技术首次实现在生化分析仪上检测醛固酮的含量，其检测范围可达到5-1000pg/mL；该方法与其他检测方法相比具有操作简单、准确、快速的特点，并可在全自动生化分析仪上批量分析实现高通量检测；该试剂盒具有稳定性好、灵敏度高、线性范围宽、特异性高、精密度好、检测时间短特点，可广泛应用到基础和临床医学的各个领域。附图说明图1是本专利技术实施例4中胶乳微球间接偶联醛固酮定标曲线图。其中X轴表示标准品浓度，Y轴表示吸光度。图2是本专利技术实施例4中线性范围测定图。具体实施方式下面结合附图及实施例对本专利技术作进一步描述：实施例一：本专利技术的一种醛固酮胶乳增强检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1的各组分及浓度包括：作为第一缓冲液的三羟甲基氨基甲烷，其含量为6.0g/L、作为第一稳定剂的牛血清白蛋白，其含量为0.5g/L、D-海藻糖，其含量为5g/L、作为表面活性剂的曲拉通，其含量为1ml/L、聚乙二醇6000，其含量为60g/L、作为第一防腐剂的Proclin-950，其含量为0.8ml/L；所述试剂R2由作为第二缓冲液的2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物、保存液以及胶乳微球抗体偶联物组成，其保存液由甘氨酸、作为第二稳定剂的牛血清白蛋白、作为第二防腐剂的Proclin-950构成，胶乳微球抗体偶联物由胶乳微球、抗醛固酮单克隆抗体、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐构成，各组分的浓度为：2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物，其含量为10.00g/L、甘氨酸，其含量为1.26g/L、牛血清白蛋白，其含量为0.5g/L、Proclin-950，其含量为0.8ml/L、胶乳微球，其含量为0.1％、抗醛固酮单克隆抗体，其含量为0.05g/L、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，其含量为0.01g/L。所述试剂R1的pH在6.00，所述试剂R2的pH在6.00。一种醛固酮胶乳增强检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：A)、试剂R1制备：在配液罐中先加入部分纯化水于磁力搅拌器上，调节搅拌子至中档转速，使溶液保持中速转动状态，边搅拌边投入三羟甲基氨基甲烷、牛血清白蛋白、D-海藻糖、曲拉通、聚乙二醇6000和Proclin-950，搅拌20-30分钟至物料完全溶解、溶液清澈透明、配液罐底部无沉淀后，调节pH本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种醛固酮胶乳增强检测试剂盒，其特征在于：包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1的各组分及浓度包括：/n
【技术特征摘要】
1.一种醛固酮胶乳增强检测试剂盒，其特征在于：包括试剂R1和试剂R2，所述试剂R1的各组分及浓度包括：
所述试剂R2由第二缓冲液、保存液以及胶乳微球抗体偶联物组成，其保存液由甘氨酸、第二稳定剂、第二防腐剂构成，胶乳微球抗体偶联物由胶乳微球、抗醛固酮单克隆抗体、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐构成，各组分的浓度为：
2.根据权利要求1所述的一种醛固酮胶乳增强检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R1以及试剂R2中的第一缓冲液和第二缓冲液包括PBS缓冲液、HEPES缓冲液、甘氨酸缓冲体系、MES缓冲液、Tris缓冲液中的一种或几种。
3.根据权利要求1所述的一种醛固酮胶乳增强检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R1的第一稳定剂以及R2中的第二稳定剂均为酪蛋白、甘露醇、牛血清白蛋白中的一种或几种以上混合物。
4.根据权利要求1所述的一种醛固酮胶乳增强检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R1中的表面活性剂为吐温20、曲拉通、聚乙烯吡咯烷酮、辛基苯基聚氧乙烯醚中的一种或几种以上混合物。
5.根据权利要求1所述的一种醛固酮胶乳增强检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R1中的第一防腐剂以及R2中的第二防腐剂均为叠氮钠、Proclin-950、Proclin-300、硫柳汞中的一种。
6.根据权利要求1所述的一种醛固酮胶乳增强检测试剂盒，其特征在于：所述试剂R1的pH在6.00-8.50之间，所述试剂R2的pH在6.00-8.50之间。
7.如权利要求1-6中任一一种醛固酮胶乳增强检测试剂盒的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：A)、试剂R1制备：<...
【专利技术属性】
技术研发人员：袁嘉扬，张凤，
申请(专利权)人：苏州普瑞斯生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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