一种用于定量检测贝氏柯克斯体I相株的单抗组合物制造技术

本发明专利技术提供一种用于贝氏柯克斯体I相株定量检测的单克隆抗体，该单克隆抗体克结合上转发光技术进行检测，跟传统的贝氏柯克斯体检测方法相比，具有准确定量、零背景干扰，检测结果稳定，检测简便快速的特点。

A kind of monoclonal antibody composition for quantitative detection of Coxiella burnetii phase strain

【技术实现步骤摘要】
一种用于定量检测贝氏柯克斯体I相株的单抗组合物
本专利技术涉及一种用于定量检测贝氏柯克斯体I相株的单抗组合物。
技术介绍
贝氏柯克斯体(Coxiellaburnetii)为重要的人兽共患病——Q热(Qfever)的病原菌，革兰氏阴性染色、专性胞内寄生、呈小短杆状或小球杆状。贝氏柯克斯体在生长过程中存在相变，I相株通常为Q热病人或感染动物上分离到的强毒株，在经过数十甚至数百代的实验室人工传代，I相株的LPS部分抗原丢失，形成减毒株即II相株。贝氏柯克斯体I相菌株含有I相和II相抗原，可以诱导动物产生I相和II相抗体，而II菌株主要为II相抗原，只能诱导产生II相抗体。急性Q热的临床症状多以急性发热、头痛、肌肉酸痛为主，常并发肺炎、肝炎等。慢性Q热常并发心内膜炎、骨髓炎等严重疾病。Q热在临床上无特异的症状和体征且缺乏特异的临床诊断标志，因此它与其它热性传染病难以区分开来，误诊率较高。血清学检测贝氏柯克斯体特异性抗体是最常用的方法，包括补体结合实验(CF)、酶联免疫吸附(ELISA)、间接免疫荧光(IFA)、微量凝集实验(MA)等；分子生物学检测方法包括多聚酶链式反应(PCR)、实时荧光定量PCR、重组酶聚合酶扩增反应(RPA)、环介导等温扩增(Lamp)、DNA斑点杂交等。血清学检测方法专业性强、生物安全要求高、技术要求高，发病急的病人往往检测不出抗体，且从血液中分离病原十分困难；核酸检测时需要提前提取基因组，操作费时耗力，且需要专业的仪器设备，需要在专业的实验室内操作进行，同时核酸检测的方法不能判断菌体是否存活，易导致结果判断和感染风险评估的复杂化。随着化学和材料学等相关学科的发展和社会应用领域的不断拓展，近年来，免疫诊断技术一直朝着稳定、高通量、高敏感性、宽领域的方向发展。如上转发光技术(Up-ConvertingPhosphorTechnology，UPT)等，它在提高传统免疫层析灵敏度的基础上，还对各种复杂检测样品具有极强的耐受性，使得直接对病人或动物血清中的痕量级抗体或抗原进行定量检测成为可能。
技术实现思路
本专利技术提供一种用于定量检测贝氏柯克斯体I相株的单抗组合物。本专利技术提供一种用于贝氏柯克斯体检测的试纸，所述试纸包括结合垫和与所述结合垫连接的分析膜；所述结合垫包被有UCP-单抗10复合物，所述UCP-单抗10复合物是用UCP标记单抗10得到的复合物；所述分析膜具有相互分离的检测带和质控带，所述检测带包被有单抗10；所述单抗10是由重链和轻链组成的单克隆抗体，所述重链和所述轻链均由可变区和恒定区组成，所述可变区均由决定簇互补区和框架区组成，所述决定簇互补区均由CDR1、CDR2和CDR3组成；所述单抗10的重链的CDR1的氨基酸序列如SEQIDNo.4的第26-33位所示；所述单抗10的重链的CDR2的氨基酸序列如SEQIDNo.4的第51-60位所示；所述单抗10的重链的CDR3的氨基酸序列如SEQIDNo.4的第99-106位所示；所述单抗10的轻链的CDR1的氨基酸序列如SEQIDNo.8的第26-32位所示；所述单抗10的轻链的CDR2的氨基酸序列如SEQIDNo.8的第50-52位所示；所述单抗10的轻链的CDR3的氨基酸序列如SEQIDNo.8的第89-97位所示；。其中，所述单抗10的重链可变区的氨基酸序列为SEQIDNo.4中的第1-117位；所述单抗10的轻链可变区的氨基酸序列为SEQIDNo.8中的第1-107位。其中，所述单抗10的重链的氨基酸序列为SEQIDNo.4；所述单抗10的轻链的氨基酸序列为SEQIDNo.8。其中，所述质控带包被有与所述UCP-单抗10复合物特异结合的第二抗体。本专利技术还提供一种单克隆抗体，所述单克隆抗体为如上所述单抗10。所述单克隆抗体为鼠源单克隆抗体。与所述的单克隆抗体相关的生物材料，所述生物材料为B1)至B16)中的任一种：B1)编码权所述的单克隆抗体的核酸分子；B2)含有B1)所述核酸分子的表达盒；B3)含有B1)所述核酸分子的重组载体；B4)含有B2)所述表达盒的重组载体；B5)含有B1)所述核酸分子的重组微生物；B6)含有B2)所述表达盒的重组微生物；B7)含有B3)所述重组载体的重组微生物；B8)含有B4)所述重组载体的重组微生物；B9)含有B1)所述核酸分子的转基因动物细胞系；B10)含有B2)所述表达盒的转基因动物细胞系；B11)含有B3)所述重组载体的转基因动物细胞系；B12)含有B4)所述重组载体的转基因动物细胞系；B13)含有B1)所述核酸分子的转基因植物细胞系；B14)含有B2)所述表达盒的转基因植物细胞系；B15)含有B3)所述重组载体的转基因植物细胞系；B16)含有B4)所述重组载体的转基因植物细胞系。其中，B1)所述核酸分子为编码所述的单克隆抗体的基因。所述基因为如下A)或B)所述的DNA分子：A)所述单抗10是由重链和轻链组成的单克隆抗体，所述重链和所述轻链均由可变区和恒定区组成，所述可变区均由决定簇互补区和框架区组成，所述决定簇互补区均由CDR1、CDR2和CDR3组成；所述单抗10的重链的CDR1的氨基酸序列如SEQIDNo.4的第26-33位所示；所述单抗10的重链的CDR2的氨基酸序列如SEQIDNo.4的第51-60位所示；所述单抗10的重链的CDR3的氨基酸序列如SEQIDNo.4的第99-106位所示；所述单抗10的轻链的CDR1的氨基酸序列如SEQIDNo.8的第26-32位所示；所述单抗10的轻链的CDR2的氨基酸序列如SEQIDNo.8的第50-52位所示；所述单抗10的轻链的CDR3的氨基酸序列如SEQIDNo.8的第89-97位所示；B)与A)限定的DNA分子具有90％以上的同一性且编码所述单克隆抗体的DNA。一种用于检测的贝氏柯克斯体I相株的组合物，所述组合物的活性成分为所述的单抗10。本专利技术制备的贝氏柯克斯体检测的试纸，用该单抗组合物检测贝氏柯克斯体I相株抗原具有准确定量、零背景干扰，检测结果稳定，检测简便快速的特点。附图说明图1为Cbu-UPT-LF各个浓度检测结果示意图；图2为Cbu-UT-LF对贝氏柯克斯体检测的定量曲线。具体实施方式以下实施例中利用仪器。BALB/c小鼠：北京维通利华公司。下述实施例中的羊抗鼠IgM为辣根过氧化物酶(HRP)标记羊抗小鼠抗体：英国Abcam公司，货号分别为：ab97230。单克隆抗体亚类鉴定试剂盒：美国Sigma公司，货号：ISO2-1KT1640培养基：美国Gibco公司UVM340酶标仪：英国ASYS公司贝氏柯克斯体新桥株(XinQiaostrain)、七医株(QiYistrain)、Grita株(Gritastrain本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于贝氏柯克斯体I相株检测的试纸，其特征在于，所述试纸包括结合垫和与所述结合垫连接的分析膜；所述结合垫包被有UCP-单抗10复合物，所述UCP-单抗10复合物是用UCP标记单抗10得到的复合物；/n所述分析膜具有相互分离的检测带和质控带，所述检测带包被有单抗10；/n所述单抗10是由重链和轻链组成的单克隆抗体，所述重链和所述轻链均由可变区和恒定区组成，所述可变区均由决定簇互补区和框架区组成，所述决定簇互补区均由CDR1、CDR2和CDR3组成；所述单抗10的重链的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID No.4的第26-33位所示；所述单抗10的重链的CDR2的氨基酸序列如SEQ ID No.4的第51-60位所示；所述单抗10的重链的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID No.4的第99-106位所示；所述单抗10的轻链的CDR1的氨基酸序列如SEQ ID No.8的第26-32位所示；所述单抗10的轻链的CDR2的氨基酸序列如SEQ IDNo.8的第50-52位所示；所述单抗10的轻链的CDR3的氨基酸序列如SEQ ID No.8的第89-97位所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于贝氏柯克斯体I相株检测的试纸，其特征在于，所述试纸包括结合垫和与所述结合垫连接的分析膜；所述结合垫包被有UCP-单抗10复合物，所述UCP-单抗10复合物是用UCP标记单抗10得到的复合物；
所述分析膜具有相互分离的检测带和质控带，所述检测带包被有单抗10；
所述单抗10是由重链和轻链组成的单克隆抗体，所述重链和所述轻链均由可变区和恒定区组成，所述可变区均由决定簇互补区和框架区组成，所述决定簇互补区均由CDR1、CDR2和CDR3组成；所述单抗10的重链的CDR1的氨基酸序列如SEQIDNo.4的第26-33位所示；所述单抗10的重链的CDR2的氨基酸序列如SEQIDNo.4的第51-60位所示；所述单抗10的重链的CDR3的氨基酸序列如SEQIDNo.4的第99-106位所示；所述单抗10的轻链的CDR1的氨基酸序列如SEQIDNo.8的第26-32位所示；所述单抗10的轻链的CDR2的氨基酸序列如SEQIDNo.8的第50-52位所示；所述单抗10的轻链的CDR3的氨基酸序列如SEQIDNo.8的第89-97位所示。


2.根据权利要求1所述的试纸，其特征在于，所述单抗10的重链可变区的氨基酸序列为序列4中的第1-117位；所述单抗10的轻链可变区的氨基酸序列为序列8中的第1-107位。


3.根据权利要求1或2所述的试纸，其特征在于，所述单抗10的重链的氨基酸序列为序列4；所述单抗10的轻链的氨基酸序列为序列8。


4.根据权利要求1-3任一所述的试纸，其特征在于，所述质控带包被有与所述UCP-单抗10复合物特异结合的第二抗体。


5.一种单克隆抗体，所述单克隆抗体为如权利要求1-3任一所述单抗10。


6.根据权利要求5所述的单克隆抗体，所述单克隆抗体为鼠源单克隆抗体。


7.与权利要求5或6中所述的单克隆抗体相关的生物材料，所述生物材料为B1)至B16)中的任一种：
B1)编码权利要求5或6中所述的单克隆抗...

【专利技术属性】
技术研发人员：熊小路，张平平，杨瑞馥，焦俊，赵勇，王津，周冬生，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，
类型：发明
国别省市：北京;11