【技术实现步骤摘要】
一种用于间接血凝(IHA)法检测日本血吸虫抗体的特异抗原制备方法
本专利技术涉及血吸虫抗体检测
,具体为一种间接血凝试剂中,用于日本血吸虫抗体检测的特异抗原制备的方法。
技术介绍
血吸虫病是严重危害人群健康和阻碍经济社会发展的重大传染病,我国党和政府高度重视血吸虫病的防控工作,经过60多年的努力我国血吸虫病防控起得了举世瞩目的成就。然而,在控制和消除血吸虫病的进程中,我们还存在不少的技术壁垒和障碍。尤其是随着血吸虫病防控工作的深入,流行区血吸虫病感染率越来越低,感染度也越来越轻。在血吸虫病病原学诊断中,本来检出率不理想的孵化法、加藤法、沉淀镜检法等,在低度流行区已经越来越不适用,尤其在我国实施以传染源控制为主的综合性防控对策中,如何最大限度地发现传染源是我们防控工作的重中之重。日本血吸虫病是由于日本血吸虫寄生于人和哺乳动物体内引起的一种人兽共患寄生虫病。人感染日本血吸虫病后,其血清中可产生相应的特异性血吸虫抗体,该抗体在感染血吸虫病后,可在体内显现,并存在较长时间,故可被检测,以此作为诊断依据。早期、正确的诊断是控制血吸虫病流行的重要环节。血清免疫学检查方法在我国控制和消除血吸虫病中发挥着重要的作用。在血吸虫病的免疫性诊断中,先后研制了一系列用抗原检测体内抗体、用抗体检测体内抗原、检测血吸虫特异性DNA等方法。但各类方法不是敏感性不高,就是特异性不强,或是稳定性上存在不足。到目前为止没有一种特异性强、敏感性高,能考核疗效的理想方法。我们研制的以血吸虫虫卵可溶性抗原为基础的混合性特异抗原,以此作为 ...
【技术保护点】
1.一种用于间接血凝(IHA)法检测日本血吸虫抗体的特异抗原制备方法,其特征在于:包括以下步骤:/n步骤一:制备血吸虫特异抗原:/n步骤1、制备日本血吸虫可溶性成虫抗原;/n步骤2、制备日本血吸虫可溶性尾蚴抗原;/n步骤3、制备日本血吸虫可溶性虫卵抗原;/n步骤4、将制备的日本血吸虫可溶性成虫抗原,加入10mmol/L过碘酸钠室温反应30min,再加入50mmol/L硼氢化钠室温30min终止反应;将处理后的日本血吸虫可溶性成虫抗原溶液置pH7.2 PBS中透析并于4℃过夜,超滤浓缩后配制1mg/ml溶液;同法将日本血吸虫尾蚴抗原和虫卵抗原,经过碘酸钠和硼氢化钠处理,经透析和超滤浓缩后制备成1mg/ml溶液;过碘酸钠氧化法可使糖分子的羟基变成醛基或酮基,使蛋白所携带的糖基分子被破坏;/n步骤5、将经过碘酸钠处理过的日本血吸虫可溶性成虫抗原、日本血吸虫可溶性尾蚴抗原和日本血吸虫可溶性虫卵抗原按体积比1:0.5:2比例混合,即为特异抗原;/n步骤二:特异抗原制备间接血凝试剂:/n步骤1、醛化红细胞制备;/n步骤2、鞣化红细胞制备;/n步骤3、致敏红细胞悬液的制备;/n步骤4、冻干致敏红细胞 ...
【技术特征摘要】
1.一种用于间接血凝(IHA)法检测日本血吸虫抗体的特异抗原制备方法,其特征在于:包括以下步骤:
步骤一:制备血吸虫特异抗原:
步骤1、制备日本血吸虫可溶性成虫抗原;
步骤2、制备日本血吸虫可溶性尾蚴抗原;
步骤3、制备日本血吸虫可溶性虫卵抗原;
步骤4、将制备的日本血吸虫可溶性成虫抗原,加入10mmol/L过碘酸钠室温反应30min,再加入50mmol/L硼氢化钠室温30min终止反应;将处理后的日本血吸虫可溶性成虫抗原溶液置pH7.2PBS中透析并于4℃过夜,超滤浓缩后配制1mg/ml溶液;同法将日本血吸虫尾蚴抗原和虫卵抗原,经过碘酸钠和硼氢化钠处理,经透析和超滤浓缩后制备成1mg/ml溶液;过碘酸钠氧化法可使糖分子的羟基变成醛基或酮基,使蛋白所携带的糖基分子被破坏;
步骤5、将经过碘酸钠处理过的日本血吸虫可溶性成虫抗原、日本血吸虫可溶性尾蚴抗原和日本血吸虫可溶性虫卵抗原按体积比1:0.5:2比例混合,即为特异抗原;
步骤二:特异抗原制备间接血凝试剂:
步骤1、醛化红细胞制备;
步骤2、鞣化红细胞制备;
步骤3、致敏红细胞悬液的制备;
步骤4、冻干致敏红细胞制备;
在致敏红细胞悬液中加入10%浓度的蔗糖和2%浓度的经56℃灭活30min后的兔血清;摇匀后分装于2mL的安瓿瓶内,每支含量0.5mL;将分装后的致敏红细胞放入冷冻干燥机内进行抽干,并用封口机进行封口,冻干致敏红细胞外观为褐色或淡红色疏松体。
2.根据权利要求1所述的一种用于间接血凝(IHA)法检测日本血吸虫抗体的特异抗原制备方法,其特征在于:所述步骤一中步骤1、制备日本血吸虫可溶性成虫抗原方法为:取日本血吸虫成虫冻干品,按1%浓度加入pH5.6的50mmol/L醋酸钠缓冲液,在-20℃和37℃之间反复冻融3次后,超声10min,置冰箱中冷藏放置过夜,于4℃10000g离心30min,吸取上清,经滤纸过滤后再次4℃10000g离心30min离心,吸取上清即为日本血吸虫可溶性成虫抗原,蛋白测定后以醋酸钠缓冲液配制成1mg/ml终浓度备用。
3.根据权利要求1所述的一种用于日本血吸虫抗体检测的特异抗原制备间接血凝试剂的方法,其特征在于:所述步骤一中步骤2、制备日本血吸虫可溶性尾蚴抗原方法为:取日本血吸虫尾蚴冻干品,按1%浓度加入pH5.6的50mmol/L醋酸钠缓冲液,在-20℃和37℃之间反复冻融3次后,超声...
【专利技术属性】
技术研发人员:汪天平,王恩木,章乐生,张世清,呼明闯,
申请(专利权)人:安徽省血吸虫病防治研究所,
类型:发明
国别省市:安徽;34
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