一种定量检测鸡蛋中氟苯尼考的嵌合ELISA试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术实施例公开了一种定量检测鸡蛋中氟苯尼考的嵌合ELISA试剂盒，所述ELISA试剂盒包括氟苯尼考单克隆抗体、氟苯尼考偶联抗原、基准液、酶标物、包被所述氟苯尼考偶联抗原的酶标板，以及用于ELISA实验的显色液、终止液和稀释液；所述基准液用于作为空白对照组的溶液；测定待测样品时，同时检测空白对照组和待测样品组的OD值，通过所述OD值计算得到所述待测样品的浓度。本发明专利技术实施例提供的定量检测鸡蛋中氟苯尼考残留的检测试剂盒，其操作简便，可批量快速准确检测，且成本低、稳定性好，需要的技术含量不高。

A chimeric ELISA kit for quantitative detection of florfenicol in eggs and its preparation

【技术实现步骤摘要】
一种定量检测鸡蛋中氟苯尼考的嵌合ELISA试剂盒及其制备方法
本专利技术实施例涉及生物检测
，具体涉及一种定量检测鸡蛋中氟苯尼考的嵌合ELISA试剂盒及其制备方法。
技术介绍
氟苯尼考是酰胺醇类第3代动物专用抗菌药，其具有广谱、高效、吸收好、体内分布广、无致再生障碍性贫血作用等特点，作为氯霉素的替代药物被广泛用于治疗畜禽的细菌性疾病。氟苯尼考具有胚胎毒性和耐药性，在畜禽生产上的大量应用也导致其在畜禽产品中残留，危害人体的健康。目前，针对氟苯尼考检测的试剂盒，往往需要一套系列标准品，这样不仅增加了工作量，而且为了标准曲线线性复合，对操作要求极高；系列标准品的使得一盒96T规格的试剂盒，所需检测的样本数量多，试剂盒的操作复杂，检测结果的稳定性差，检测精密度差，检测所需的时间长。
技术实现思路
为此，本专利技术实施例提供一种定量检测鸡蛋中氟苯尼考的嵌合ELISA试剂盒及其制备方法，以解决现有技术中试剂盒操作麻烦，检测结果稳定性差的问题。为了实现上述目的，本专利技术实施例提供如下技术方案：一种定量检测鸡蛋中氟苯尼考的嵌合ELISA试剂盒，所述ELISA试剂盒包括氟苯尼考单克隆抗体、氟苯尼考偶联抗原、基准液、酶标物、包被所述氟苯尼考偶联抗原的酶标板，以及用于ELISA实验的显色液、终止液和稀释液；所述基准液用于作为空白对照组的溶液；测定待测样品时，同时检测加入基准液的空白对照组和待测样品组的OD值，通过所述OD值计算得到所述待测样品的浓度。优选的，所述基准液为硼酸、氢氧化钠、色氨酸和乙二胺四乙酸的水溶液。优选的，所述单克隆抗体是通过氟苯尼考FF3C11细胞株制备得到的，所述氟苯尼考FF3C11细胞株已于2019年7月4日保藏于位于中国武汉武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CTCCNO：C2019152。本专利技术实施例还包括：储存有预先建立的用于计算待测样本中氟苯尼考含量的标准曲线的数据处理装置。优选的，所述标准曲线建立包括：利用标准品稀释液配成不同质量浓度的氟苯尼考标准品溶液，用缓冲液稀释的氟苯尼考抗体，用缓冲液稀释的所述酶标物，进行间接ELISA测定，计算各浓度氟苯尼考的结合率，并以氟苯尼考的结合率为纵坐标、氟苯尼考浓度为横坐标，建立IC50最低的氟苯尼考抑制标准曲线。优选的，所述酶标液为羊抗鼠IgG-HRP溶液。本专利技术实施例还提供一种制备所述的定量检测鸡蛋中氟苯尼考的嵌合ELISA试剂盒的方法，其特征在于包括制备基准液，制备氟苯尼考单克隆抗体，配制用于ELISA实验的显色液、终止液和稀释液以及将所述氟苯尼考偶联抗原包被在酶标板上的过程。优选的，所述基准液为硼酸、氢氧化钠、色氨酸和乙二胺四乙酸的水溶液。优选的，所述单克隆抗体是通过氟苯尼考FF3C11细胞株制备得到的，所述氟苯尼考FF3C11细胞株已于2019年7月4日保藏于位于中国武汉武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CTCCNO：C2019152。本专利技术实施例还包括：预先建立用于计算待测样本中氟苯尼考含量的标准曲线，其建立过程为：利用标准品稀释液配成不同质量浓度的氟苯尼考标准品溶液，用缓冲液稀释的氟苯尼考抗体，用缓冲液稀释的所述酶标物，进行间接ELISA测定，计算各浓度氟苯尼考的结合率，并以氟苯尼考的结合率为纵坐标、氟苯尼考浓度为横坐标，建立IC50最低的氟苯尼考抑制标准曲线。本专利技术实施例具有如下优点：本专利技术实施例提供的定量检测鸡蛋中氟苯尼考残留的检测试剂盒，其操作简便，可批量快速准确检测，且成本低、稳定性好，需要的技术含量不高，本专利技术的试剂盒，操作人员无需接触标准品，避免了标准品对操作人员的伤害，本专利技术实施例的ELISA试剂盒，一盒96T规格的试剂盒，实际测试样本的数量远远大于90个，同时可以定量检测鸡蛋中氟苯尼考含量，减少了检验样本所需要的处理时间和数据分析时间，大大节约了检测时间和工作量，降低了检测成本。附图说明为了更清楚地说明本专利技术的实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是示例性的，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图引伸获得其它的实施附图。图1为本专利技术实施例提供的SPG单克隆抗体纯化纯度鉴定图；图2为本专利技术实施例提供的嵌合ELISA试剂盒利用预建立的标准曲线的计算的软件主界面图；图3为本专利技术实施例提供的嵌合ELISA试剂盒预建立的标准曲线图。具体实施方式以下由特定的具体实施例说明本专利技术的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本专利技术的其他优点及功效，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实施1、氟苯尼考单克隆抗体的制备1、细胞复苏将杂交瘤细胞株3C11从液氮罐内快速取出后，该氟苯尼考FF3C11细胞株已于2019年7月4日保藏于位于中国武汉武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CTCCNO：C2019152。迅速放至37℃水中融化，完全融化后1000转离心3分钟，酒精擦拭消毒放置无菌工作台操作，弃上清，用600ulHT培养基悬浮管内细胞，转至24孔培养板中，放至37℃CO2培养箱中培养。2、腹水制备氟苯尼考单克隆抗体的制备采用动物体内腹水诱生法，按照0.5ml矿物油/只小鼠的用量制敏，制敏后7至10天将至80％满时的细胞打入小小鼠腹腔，按照100万/只的数量注入，稀释液为无菌生理盐水，7至10天取腹水。氟苯尼考单克隆抗体的纯化：采用SPG柱法对腹水进行纯化，按常规操作，将2批次纯化的氟苯尼考单克隆抗体进行抗体纯度鉴定如图1所示，泳道1为批次2016FF23，泳道2为批次2016FF21，SDS-PAGE电泳观察到25KD和55KD的清晰条带，分别是抗体的轻链和重连，并无杂带，表明两个批次抗体纯度均达到95％以上。实施例2、定量检测氟苯尼考的嵌合ELISA试剂盒及其制备方法1.酶标板的制备1.1包被：将包被偶联氟苯尼考抗原(FF-BSA，货号LD-007；山东绿都生物科技有限公司)用包被缓冲液稀释，FF-BSA按照1：30000稀释，每孔取100μL加入酶标板，盖好盖板膜，置4℃静置20h。1.2洗板：包被后要进行两次洗涤，用蒸馏水，250微升/孔，洗涤完毕后，应在毛巾上拍干残余液体，并及时进行下一步封闭。1.3封闭：封闭液应提前一小时取出初步回温，用前摇匀，每孔取180μL加入酶标板，盖好盖板膜，37℃封闭1.5h，酶标板之间的间距应保持一致(一般为5cm)。1.4烘干装袋：封闭完后，摔倒孔内液体，并在毛巾上拍干，后采取烘方式彻底干燥酶标板，37℃倒置，不加盖板膜或用自封袋，烘干30min。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种定量检测鸡蛋中氟苯尼考的嵌合ELISA试剂盒，其特征在于，所述ELISA试剂盒包括氟苯尼考单克隆抗体、氟苯尼考偶联抗原、基准液、酶标物、包被所述氟苯尼考偶联抗原的酶标板，以及用于ELISA实验的显色液、终止液和稀释液；所述基准液用于作为空白对照组的溶液；/n测定待测样品时，同时检测加入基准液的空白对照组和待测样品组的OD值，通过所述OD值计算得到所述待测样品的浓度。/n

【技术特征摘要】
1.一种定量检测鸡蛋中氟苯尼考的嵌合ELISA试剂盒，其特征在于，所述ELISA试剂盒包括氟苯尼考单克隆抗体、氟苯尼考偶联抗原、基准液、酶标物、包被所述氟苯尼考偶联抗原的酶标板，以及用于ELISA实验的显色液、终止液和稀释液；所述基准液用于作为空白对照组的溶液；
测定待测样品时，同时检测加入基准液的空白对照组和待测样品组的OD值，通过所述OD值计算得到所述待测样品的浓度。


2.如权利要求1所述的定量检测鸡蛋中氟苯尼考的嵌合ELISA试剂盒，其特征在于，
所述基准液为硼酸、氢氧化钠、色氨酸和乙二胺四乙酸的水溶液。


3.如权利要求1所述的定量检测鸡蛋中氟苯尼考的嵌合ELISA试剂盒，其特征在于，
所述单克隆抗体是通过氟苯尼考FF3C11细胞株制备得到的，所述氟苯尼考FF3C11细胞株已于2019年7月4日保藏于位于中国武汉武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CTCCNO:C2019152。


4.如权利要求1所述的定量检测鸡蛋中氟苯尼考的嵌合ELISA试剂盒，其特征在于还包括：储存有预先建立的用于计算待测样本中氟苯尼考含量的标准曲线的数据处理装置。


5.如权利要求4所述的定量检测鸡蛋中氟苯尼考的嵌合ELISA试剂盒，其特征在于，
所述标准曲线建立包括：利用标准品稀释液配成不同质量浓度的氟苯尼考标准品溶液，用缓冲液稀释的氟苯尼考抗体，用缓冲液稀释的所述酶标物，进行间接ELISA测定...

【专利技术属性】
技术研发人员：武玉香，李建林，
申请(专利权)人：武玉香，
类型：发明
国别省市：山东;37