The application relates to a mesothelin (msln) immunohistochemical detection kit, which contains msln monoclonal antibody 3 \u2011 2g6.
【技术实现步骤摘要】
间皮素免疫组化检测试剂盒
本专利技术涉及一种检测间皮素(Mesothelin,MSLN)的免疫组化试剂盒。
技术介绍
间皮素(Mesothelin,MSLN)是一种细胞表面糖蛋白。间皮素基因编码的是一个71KD的前蛋白,经修饰切割变成两段,分别是41KD的糖基化磷脂酰肌醇细胞膜锚定蛋白和30KD的被称为巨核细胞促进因子的游离片段。有研究证实41KD的膜锚定蛋白包含一段与另一个肿瘤标志物CA125蛋白的结合区,其可能与细胞粘附相关,因而该锚定蛋白可能有助于肿瘤的转移,并导致预后效果不理想。最新研究表明:MSLN在几乎全部的间皮瘤和胰腺癌,多数的卵巢癌和肺癌中高度表达,在正常组织中很少表达,一般只在胸膜间皮细胞衬、腹膜和心包有一定量表达。虽然目前Mesothelin的功能尚不确切,但是无论是细胞膜结合区还是游离区都被证实可以作为间皮癌、胰腺癌、卵巢癌等多种肿瘤的标志物和治疗靶点。免疫组化方法的主要原理是:应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及相对定量的研究方式。免疫组化技术的主要特点是:1.特异性强:免疫学的基本原理决定了抗原与抗体之间的结合具有高度特异性;2.敏感性高:抗体稀释上千倍、上万倍甚至上亿倍仍可在组织细胞中与抗原结合,这样高敏感性的抗体抗原反应,使免疫组化方法越来越方便地应用于常规病理诊断工作;3.定位准确:该技术通过抗原抗体反应及呈色反应,可 ...
【技术保护点】
1.用于检测MSLN的免疫组化抗体组合物,其含有抗MSLN单克隆抗体3-2G6,所述抗体由以保藏编号CCTCC C201811于2017年12月20日保藏于中国典型培养物保藏中心的杂交瘤细胞产生。/n
【技术特征摘要】
1.用于检测MSLN的免疫组化抗体组合物,其含有抗MSLN单克隆抗体3-2G6,所述抗体由以保藏编号CCTCCC201811于2017年12月20日保藏于中国典型培养物保藏中心的杂交瘤细胞产生。
2.权利要求1所述的免疫组化抗体组合物,所述抗体组合物通过将所述抗体与抗体稀释液相混合得到,其中所述抗体稀释液包含PH7.2的磷酸缓冲液,优选地,所述磷酸缓冲液浓度为0.005-0.5M,更优选0.01-0.1M。
3.权利要求2所述的免疫组化抗体组合物,所述抗体稀释液还包含:0.5%-5%的蛋白质保护剂、0.05%-0.5%的表面活性剂和0.01%-0.2%的防腐剂;优选地,1%-3%的蛋白质保护剂、0.05%-0.2%的表面活性剂和0.02%-0.1%的防腐剂;更优选地,1%的蛋白质保护剂、0.05%的表面活性剂和0.05%的防腐剂。
4.权利要求3所述的免疫组化抗体组合物,其中所述蛋白质保护剂包含牛血清白蛋白,所述表面活性剂包含吐温20,所述防腐剂包含2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮和5-氯-2-甲基-4-异噻唑啉-3-酮。
5.权利要求2所述的免疫组化抗体组合物,其中所述抗体稀释液还包含0.05-0.5MNaCl,优选地0.1-0.3MNaCl,更优选0.15MNaCl。
6.权利要求2所述的免疫组化抗体组合物,其中所述抗体稀释液包含:0.05M磷酸缓冲液、0.15MNaCl、1%牛血清白蛋白、0.05%吐温20和0.05%的ProClin300。
7.权利要求1或2所述的免疫组化抗体组合物,其中所述抗MSLN单克隆抗体以抗体溶液的形式存在,其中抗体浓度为0.05-20μg/ml,更优选0.2-10μg/ml,最优选0.3-5μg/ml。
8.权利要求7所述的免疫组化抗体组合物,其中所述抗体溶液(初始浓度1mg/ml)与所述抗体稀释液的体积比为1∶200-1∶18000,优选1∶1600-1∶6400,更优选1∶3200。
9.权利要求1-8中任一项所述的免疫组化抗体组合物在制备间皮素检测免疫组化试剂盒中的应用。
10.用于检测MSLN的免疫组化试剂盒,其包含权利要求1-11中任一项所述的免疫组化抗体组合物。
11.权利要求10所述的免疫组化试剂盒,其还包含:抗原修复液、免疫组化笔以及细胞质控片。
12.权利要求11所述的免疫组化试剂盒,所述抗原修复液包含0.01M的柠檬酸或其盐,其pH为6.0。
13.权利要求11所述的免疫组化试剂盒,所述细胞质控片包括作为对照的4种细胞,其分别为:间皮素阴性表达的293细胞、间皮素弱阳性表达的CFPAC-1细胞、间皮素阳性表达的OVCAR-3细胞、间皮素强阳性表达的OVCAR-3-MSLN细胞,其中所述OVCAR-3-MSLN细胞为经遗传修饰从而表达外源MSLN的OVCAR-3细胞。
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【专利技术属性】
技术研发人员:毛海燕,于占娇,肖童雨,李壮林,房健民,
申请(专利权)人:荣昌生物制药烟台有限公司,
类型:发明
国别省市:山东;37
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